የምርት ዝርዝር
የዓለም ጤና ድርጅት (WHO) አንቲጂንን የሚያገኙ ፈጣን የምርመራ ፈተናዎች (Ag-RDRs) ገባሪ SARS-CoV-2 ኢንፌክሽኑን ከኒውክሊክ አሲድ ማጉላት ፈተናዎች (NAATs) ለመለየት ፈጣን እና ርካሽ መንገድ እንደሚሰጡ መመሪያ ይሰጣል። ዝቅተኛ የአፈጻጸም መስፈርቶችን የሚያሟሉ Ag-RDTs ለአንደኛ ደረጃ ጉዳዮችን ለማወቅ፣ የእውቂያ ፍለጋ፣ በወረርሽኙ ምርመራዎች ወቅት እና በማህበረሰቦች ውስጥ የበሽታ መከሰት አዝማሚያዎችን ለመከታተል ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።
ዋና መለያ ጸባያት
● አጠቃላይ፡-ሶስት ዒላማ ዘረ-መል በአንድ ሙከራ ውስጥ ይገነዘባል
● ተስማሚ፡ከ CY5 ፣ FAM ፣ VIC/HEX ቻናሎች ጋር ለተለመዱ መሳሪያዎች ተስማሚ።
● ጥሩ አፈጻጸም፡ከፍተኛ ስሜታዊነት እና ልዩነት, LOD = 200 ቅጂ / ml.
የቴክኒክ መለኪያ
| የማሸጊያ ዝርዝር መግለጫ | 50 ሙከራዎች / ኪት, 100 ሙከራዎች / ኪት |
| የዒላማ ክልል | ORF1ab፣ N፣ E |
| የሚተገበር ናሙና | አክታ, ኦሮፋሪንክስ ስዋብ |
| የማወቅ ገደብ | 200 ቅጂዎች / ml |
| አጠቃላይ የአጋጣሚ ነገር መጠን | 99.55% |
| ሲቲ እሴት (ሲቪ፣%) | ≤5.0% |
| የአዎንታዊ የአጋጣሚ ነገር መጠን | 99.12% |
| አሉታዊ የአጋጣሚ ነገር መጠን | 100% |
| የማከማቻ ሁኔታዎች እና የሚያበቃበት ቀን | በ -20±5℃ የተከማቸ እና በጊዜያዊነት ለ12 ወራት ያገለግላል። |
| የውስጥ ቁጥጥር | አዎ |
| ካታሎግ ቁጥር | A7793YF-50T፣ A7793YF-100ቲ |
| ማረጋገጫ | CE |
| ናሙናዎች | Nasopharyngeal swab, Oropharyngeal swab, Alveolar lavage ፈሳሽ, ምራቅ እና አክታ. |
| የሚተገበር መሳሪያ | ABI 7500፣ Roche Light Cycler 480Ⅱ፣ Roche Cobas z 480፣ SLAN-96P Real-Time PCR ሲስተም |
የሙከራ ሂደት
1. ኑክሊክ አሲድ ማውጣት
ክዋኔው የሚከናወነው በማውጫ ኪት መመሪያው መሰረት ነው.
2. የስርዓት ዝግጅት;
1) ሬጀንቱን አውጥተው ሬጀንቱን ሙሉ በሙሉ ይቀልጡት።ድብልቁን ይለውጡ እና ወዲያውኑ ሴንትሪፉጅ ያድርጉ።N የፈተና ምላሾች (N = የሚፈተኑ ናሙናዎች ብዛት + አዎንታዊ ቁጥጥር + አሉታዊ ቁጥጥር + 1) እንደ ቅደም ተከተላቸው የምላሽ ስርዓቶች ተዘጋጅተዋል.
| Voponents | መጠን ለ 1 ምላሽ ሥርዓት | የድምጽ መጠን ለ N ምላሽ ሥርዓት |
| ኑክሊክ አሲድ ማጉላት ምላሽ ድብልቅ (A7793YF) | 18µ ኤል | 18 µL * N |
| የኢንዛይም ድብልቅ | 2µ ኤል | 2µL * N |
| ጠቅላላ መጠን | 20µL | 20µL * N |
2) የምላሽ ስርጭት፡ የምላሽ መፍትሄው ድብልቅ እና ሴንትሪፉድ የተደረገ ሲሆን እያንዳንዱ ቱቦ በ 20μL መጠን በ PCR ቱቦ ውስጥ ለፍሎረሰንስ ፒሲአር መሳሪያ ተስማሚ ነው።
3. በመጫን ላይ
5μL ከተገኘው ናሙና ኑክሊክ አሲድ፣ አወንታዊ ቁጥጥር ኑክሊክ አሲድ እና አሉታዊ ቁጥጥር ኑክሊክ አሲድ ወደ ምላሽ ስርዓቶች ተጨምሯል ፣ እና አጠቃላይ የምላሽ መጠን 25μL ነው።የቱቦውን ሽፋን ይዝጉትና ከጥቂት ሴኮንዶች ሴንትሪፍግሽን በኋላ ወደ ማጉያ መሞከሪያ ቦታ ይውሰዱት።
4. PCR Amplification Assay
1) ለማጉላት የ PCR ምላሽ ቱቦን ወደ ፍሎረሰንት PCR ማጉያ መሳሪያ ያስገቡ።
2) የዑደት መለኪያ ቅንብር፡-
| ፕሮግራም | የዑደቶች ብዛት | የሙቀት መጠን | ምላሽ ጊዜ | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 ደቂቃ | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 ሰከንድ | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 ሰከንድ | |
| 60℃ | 30 ሰከንድ | የፍሎረሰንት ስብስብ | ||
3) የማወቂያ ቅንብሮች;
የፍተሻ ቻናሎቹ በቅደም ተከተል ወደ FAM፣ VIC፣ROX እና CY5 ተቀናብረዋል፣ ከ ORF1ab፣ N gene እና E Gene፣ RNase P የውስጥ ቁጥጥር ጋር ይዛመዳሉ።"Quencher Dye" እና "Passive Reference" ወደ "ምንም" ተቀናብረዋል ለ ABI 7500 መሳሪያ።ናሙናዎቹ በሚዛመዱበት ቅደም ተከተል አወንታዊ ቁጥጥር ፣ አሉታዊ ቁጥጥር እና ናሙና (ያልታወቀ) ያዘጋጁ እና የናሙናውን ስም በ “ናሙና ስም” አምድ ውስጥ ያዘጋጁ።
ለ X-POCH16፣ ክዋኔው እና ፕሮግራሙ እንደሚከተለው ናቸው።
1) የራስ-ሙከራው ከተጠናቀቀ በኋላ ክዳኑን ይክፈቱ እና የ PCR ምላሽ ቱቦዎችን በመሳሪያው ውስጥ በተመረጡት ቦታዎች ላይ ያስቀምጡ.
2) "ኤክስፐር" የሚለውን በመምረጥ ይጀምሩ.አማራጭ።"ሁሉም" የሚለውን አማራጭ ይምረጡ ወይም በእጅ በማያ ገጹ በግራ በኩል ያለውን የምላሽ ቦታ ይምረጡ.
3) "LOAD" የሚለውን አማራጭ ይምረጡ;የሙከራ ፕሮግራሙን ይምረጡ;"ተከናውኗል" እና "RUN" ን ጠቅ ያድርጉ።ፕሮግራሙ ለማጠናቀቅ 30min42s ይወስዳል።
የነባሪ ፕሮግራሙን የማወቂያ ቻናሎች ወደ FAM፣ VIC፣ ROX እና CY5 ተቀናብረዋል፣ በቅደም ተከተል ከ ORF1ab፣ N gene እና E Gene፣ RNase P የውስጥ ቁጥጥር ጋር ይዛመዳሉ።
የነባሪ ፕሮግራሙ ዑደት መለኪያ እንደሚከተለው ነው።
| ፕሮግራም | ቁጥር | የሙቀት መጠን | ምላሽ ጊዜ |
| 1 | 1 | 50℃ | 2ደቂቃ |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 ሰከንድ |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 ሰከንድ |
| 60℃ | 13 ሰከንድ | ፍሎረሰንት |
5. የመነሻ አቀማመጥ
በተተነተነው ምስል መሰረት የመነሻ እሴቱን ፣የቤዝላይን የመጨረሻ እሴት እና የመነሻ ዋጋን ያስተካክሉ (የመጀመሪያ እሴት እና የመጨረሻ እሴት በቅደም ተከተል 3 እና 15 እንዲሆኑ ይመከራል ፣ እና የአሉታዊ መቆጣጠሪያው የማጉላት ኩርባ ጠፍጣፋ ወይም እንዲሆን ተስተካክሏል። ከመነሻው መስመር በታች) ትንታኔን ጠቅ ያድርጉ እና የናሙናውን የሲቲ እሴት በራስ-ሰር ለማግኘት።ውጤቱን በሪፖርት በይነገጽ ውስጥ ይመልከቱ።
6. የጥራት ቁጥጥር ደረጃ
እያንዳንዱ የኪቱ ቁጥጥር የሚከተሉትን መስፈርቶች ከ'S' ከርቭ ጋር ማሟላት አለበት፣ አለበለዚያ ሙከራው ልክ ያልሆነ ነው።
| ማወቂያ ሰርጦች | አሉታዊ ቁጥጥር | አዎንታዊ ቁጥጥር |
| FAM(ORF1ab) | የለም ሲቲ | ሲቲ≤38 |
| VIC(N) | የለም ሲቲ | ሲቲ≤38 |
| ሮክስ(ኢ) | የለም ሲቲ | ሲቲ≤38 |
| CY5(RP) | የለም ሲቲ | ሲቲ≤38 |
【የቆረጠ እሴት】
በ 100 oropharyngeal swab ናሙናዎች እና 100 የአክታ ናሙናዎች ውጤቶች እና በ ROC ከርቭ ዘዴ ፣ የዚህ ኪት የ OFR1ab ፣ N ጂኖች ኢ ጂን የመቁረጥ እሴት Ct = 38 ናቸው።
በየጥ
በዚህ ኪት ውስጥ፣ የእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት PCR ቴክኖሎጂ ፕሪመርሮች እና መመርመሪያዎች የተነደፉት ለተጠበቁ እና ለተወሰኑ የ ORF1ab፣ N እና E ጂን የ2019-nCoV በቅደም ተከተል ነው።በ PCR ማጉላት ወቅት፣ መፈተሻው ከአብነት ጋር ይያያዛል፣ እና የ5'-መጨረሻ የጋዜጠኞች ቡድን በታቅ ኢንዛይም (5'→3' exonuclease እንቅስቃሴ) ተሰንጥቋል፣ በዚህም ከመጥፋት ቡድኑ ርቆ የፍሎረሰንት ምልክት ያመነጫል። .በተገኘው የፍሎረሰንት ምልክት ላይ በመመስረት የእውነተኛ ጊዜ የማጉላት ኩርባ በራስ-ሰር ይቀረፃል እና የናሙና ሲቲ እሴት ይሰላል።FAM፣ VIC እና ROX fluorophores በ ORF1ab ጂን፣ ኤን ጂን እና ኢ የጂን መመርመሪያዎች ላይ ምልክት ተደርጎባቸዋል።አንድ ሙከራን በመጠቀም፣ ከላይ የተጠቀሱትን የ2019-nCoV ሶስት ጂኖች በጥራት መለየት በአንድ ጊዜ ሊከናወን ይችላል።
ኪቱ ሀሰት-አሉታዊ ውጤቶችን ለማስቀረት ክሊኒካዊ ናሙናዎችን መሰብሰብን፣ አያያዝን፣ ማውጣትን እና የ RT-PCR ሂደትን ለመከታተል በ RNase P ጂን ላይ ያነጣጠረ የውስጥ ቁጥጥር ይሰጣል።የውስጥ መቆጣጠሪያው በ CY5 ፍሎረሰንት ቡድን ተሰይሟል።
1. መሳሪያው መደበኛ ሲሆን የፈተና ውጤቶችን መተንተን እና መተርጎም, እና አወንታዊ ቁጥጥር, አሉታዊ ቁጥጥር እና የውስጥ ቁጥጥር የፍተሻ ውጤት የጥራት ቁጥጥር ደረጃን ያሟላል.
2. የውስጣዊ ቁጥጥር ማጉያ (CY5) የተለመደው S ጥምዝ እና Ct ≤ 38 ያሳያል, ትርጓሜው የዒላማ ጂኖች ውጤቶች በሚከተሉት ሁኔታዎች ውስጥ ይከተላሉ.
| ማወቂያ ሰርጦች | የዒላማ ጂኖች ውጤቶች ትርጓሜ | ||
| ኤፍኤምኤ | ቪ.አይ.ሲ (ኤን ጂን) | ሮክስ (ኢ ጂን) | |
| ሲቲ≤38 | ሲቲ≤38 | ሲቲ≤38 | በተለመደው የኤስ ማጉላት ከርቭ፣ የሲቲ እሴቱ≤38 ነው፣ ተዛማጁ የዒላማ ጂን አዎንታዊ ነው። |
| 38 ሲቲ 40 | 38 ሲቲ 40 | 38 ሲቲ 40 | በተለመደው የኤስ ማጉላት ከርቭ፣ የናሙናውን ተዛማጅ ኢላማ ጂን እንደገና ይሞክሩ። የሲቲ እሴት＜ 40 ከተለመደው የኤስ ማጉሊያ ከርቭ ጋር ከሆነ፣ ተዛማጁ የዒላማ ጂን አወንታዊ ነው።የሲቲ እሴት≥40 ከሆነ፣ ተጓዳኝ ኢላማው ጂን አሉታዊ ነው። |
| ሲቲ≥40 | ሲቲ≥40 | ሲቲ≥40 | ተጓዳኝ የዒላማው ጂን አሉታዊ ነው |
የ2019-nCoV ውጤቶች ትርጓሜ፡-
በ ORF1ab ፣ N ጂን እና ኢ ጂን ውጤቶች መሠረት ፣ እንደሚከተለው ትርጓሜ
1) የተገኙት ጂኖች ሁለት ወይም ሶስት ጂኖች አዎንታዊ ከሆኑ 2019-nCoV አዎንታዊ ነው።
2) ከተገኙት ጂኖች ውስጥ አንድ ወይም አንዳቸውም ብቻ አዎንታዊ ከሆኑ 2019-nCoV አሉታዊ ነው።
ማሳሰቢያ፡ የአዎንታዊ ናሙና የማጉላት ኩርባ ከተለመደው S ከርቭ ጋር መሆን አለበት።ነገር ግን፣ የታለመው ትኩረት በጣም ከፍተኛ ከሆነ፣ የውስጣዊው መደበኛ መቆጣጠሪያው ሊጨምር አይችልም እና ናሙናው በቀጥታ አዎንታዊ ነው ተብሎ ሊፈረድበት ይችላል።ከሁለቱ ኢላማ ጂኖች Ct≤38 ካገኙ፣ 2019-nCoV አዎንታዊ ነው።ከሁለቱ ኢላማ ጂኖች Ct≥40 ካገኙ፣ 2019-nCoV አሉታዊ ነው።Ct≥40፣ ወይም ምንም ዋጋ ካላሳየ፣ የትርጉም ዘረ-መል ውጤቶች አሉታዊ ናቸው።
3. ሁሉም የ FAM፣ VIC፣ ROX እና Cy5 ቻናሎች የሲቲ እሴቶች ከ38 በላይ ከሆኑ ወይም ምንም ግልጽ የሆነ የተለመደ የኤስ ማጉሊያ ከርቭ ከሌለ፡-
1) በናሙናው ውስጥ የ PCR ምላሽን የሚገቱ ንጥረ ነገሮች አሉ።እንደገና ለመፈተሽ ናሙናውን ለማጣራት ይመከራል.
2) የኒውክሊክ አሲድ የማውጣት ሂደት ያልተለመደ ነው, ስለዚህ እንደገና ለማውጣት ይመከራል.
እንደገና ለመሞከር ኑክሊክ አሲድ.
3) ይህ ናሙና በናሙና ወቅት ብቁ የሆነ ናሙና አልነበረም፣ ወይም የተዋረደ
በማጓጓዝ እና በማከማቻ ጊዜ.
እነዚህን ሁኔታዎች የምንለይባቸው 2 መንገዶች ናቸው፡-NAAT እና Antigen።
(ከሎስ አንጀለስ ሲዲሲ የመጣ)
