تفاصيل المنتج
ترشد منظمة الصحة العالمية (WHO) إلى أن اختبارات التشخيص السريع للكشف عن المستضد (Ag-RDRs) يمكن أن توفر طريقة أسرع وأقل تكلفة لتشخيص عدوى SARS-CoV-2 النشطة من اختبارات تضخيم الحمض النووي (NAATs) ، وتوصي منظمة الصحة العالمية أيضًا أن Ag-RDTs التي تلبي الحد الأدنى من متطلبات الأداء يمكن استخدامها لاكتشاف الحالات الأولية ، وتتبع الاتصال ، وأثناء التحقيقات في تفشي المرض ورصد اتجاهات حدوث المرض في المجتمعات.
سمات
● شامل:يتم الكشف عن ثلاثة جينات مستهدفة في اختبار واحد
● متوافق:تتكيف مع المعدات المشتركة مع قنوات CY5 و FAM و VIC / HEX.
● أداء ممتاز:حساسية وخصوصية عالية ، مستوى اللد = 200 نسخة / مل.
المقياس التقني
| مواصفات التعبئة والتغليف | 50 اختبار / طقم ، 100 اختبار / طقم |
| المنطقة المستهدفة | ORF1ab، N، E |
| عينة قابلة للتطبيق | البلغم ، مسحة الفم والبلعوم |
| الحد من الكشف | 200 نسخة / مل |
| إجمالي معدل الصدفة | 99.55٪ |
| قيمة Ct (CV ،٪) | ≤5.0٪ |
| معدل الصدفة الإيجابية | 99.12٪ |
| معدل الصدفة السلبية | 100٪ |
| شروط التخزين وتاريخ انتهاء الصلاحية | مخزنة عند -20 ± 5 ℃ ، وهي صالحة مؤقتًا لمدة 12 شهرًا. |
| تحكم داخلي | نعم |
| رقم الكتالوج | A7793YF-50T ، A7793YF-100T |
| شهادة | CE |
| العينات | مسحة بلعومية أنفية ، مسحة بلعومية ، سائل غسيل سنخي ، لعاب ، بلغم |
| أداة قابلة للتطبيق | ABI 7500 ، Roche Light Cycler 480Ⅱ ، Roche Cobas z 480 ، SLAN-96P Real-Time PCR System |
إجراء الاختبار
1. استخراج الحمض النووي
يجب أن يتم التشغيل وفقًا لدليل أدوات الاستخراج.
2. إعداد النظام:
1) أخرج الكاشف وقم بإذابة الكاشف تمامًا.اقلب الخليط وجهاز الطرد المركزي على الفور.تم تحضير تفاعلات اختبار N (N = عدد العينات المراد اختبارها + التحكم الإيجابي + التحكم السلبي + 1) لأنظمة التفاعل ، على التوالي ، على النحو التالي.
| فومبونينتس | حجم نظام رد فعل واحد | حجم نظام التفاعل N. |
| مزيج محلول تفاعل تضخيم الحمض النووي (A7793YF) | 18 ميكرولتر | 18 ميكرولتر * ن |
| خليط الانزيم | 2 ميكرولتر | 2 ميكرولتر * ن |
| الحجم الكلي | 20 ميكرولتر | 20 ميكرولتر * ن |
2) توزيع التفاعل: تم خلط محلول التفاعل وطرده مركزيًا ، وتم توزيع كل أنبوب بكمية 20 ميكرولتر في أنبوب PCR مناسب لجهاز PCR مضان.
3. التحميل
تمت إضافة 5 ميكرولتر من العينة المستخرجة من الحمض النووي والحمض النووي ذي التحكم الإيجابي والحمض النووي ذي التحكم السلبي إلى أنظمة التفاعل ، ويبلغ الحجم الإجمالي للتفاعل 25 ميكرولتر.اربط غطاء الأنبوب وانقله إلى منطقة اختبار التضخيم بعد بضع ثوانٍ من الطرد المركزي.
4. فحص تضخيم PCR
1) ضع أنبوب تفاعل PCR في أداة التضخيم الفلورية PCR للكشف عن التضخيم.
2) إعداد معلمة الدورة:
| برنامج | عدد الدورات | درجة حرارة | وقت رد الفعل | |
| 1 | 1 | 50 | 10 دقائق | |
| 2 | 1 | 95 | 30 ثانية | |
| 3 | 45 | 95 | 5 ثوانى | |
| 60 | 30 ثانية | مجموعة الإسفار | ||
3) إعدادات الكشف:
يتم تعيين قنوات الكشف على FAM و VIC و ROX و CY5 ، بما يتوافق مع عنصر التحكم الداخلي ORF1ab و N و E Gene و RNase P على التوالي.تم تعيين "Quencher Dye" و "Passive Reference" على "None" لجهاز ABI 7500.قم بتعيين عنصر التحكم الإيجابي والتحكم السلبي والعينة (غير معروف) بالترتيب الذي تتوافق به العينات ، وقم بتعيين اسم العينة في عمود "اسم العينة".
بالنسبة إلى X-POCH16 ، تكون العملية والبرنامج كما يلي:
1) بعد اكتمال الاختبار الذاتي ، افتح الغطاء وضع أنابيب تفاعل PCR في المواضع المحددة في الجهاز.
2) ابدأ بتحديد "Exper".خيار.حدد خيار "الكل" أو حدد منطقة التفاعل يدويًا على الجانب الأيسر من الشاشة.
3) حدد خيار "LOAD" ؛حدد برنامج الاختبار ؛انقر فوق "تم" و "تشغيل".يستغرق البرنامج 30 دقيقة و 42 ثانية ليكتمل.
تم تعيين قنوات الكشف للبرنامج الافتراضي على FAM و VIC و ROX و CY5 ، بما يتوافق مع ORF1ab ، و N gene ، و E Gene ، و RNase P Internal Control ، على التوالي.
معلمة دورة البرنامج الافتراضي هي كما يلي:
| برنامج | رقم ال | درجة حرارة | وقت رد الفعل |
| 1 | 1 | 50 | 2 دقيقة |
| 2 | 1 | 95 | 30 ثانية |
| 3 | 41 | 95 | 2 ثانية |
| 60 | 13 ثانية | ضوئي |
5. إعداد العتبة
وفقًا للصورة التي تم تحليلها ، اضبط قيمة البداية وقيمة النهاية لخط الأساس وقيمة العتبة (يوصى بتعيين قيمة البداية والقيمة النهائية لتكون 3 و 15 على التوالي ، ويتم ضبط منحنى التضخيم الخاص بالتحكم السلبي ليكون مسطحًا أو أقل من خط العتبة) ، انقر فوق "تحليل" للحصول تلقائيًا على قيمة عينة Ct للتحليل.اعرض النتائج في واجهة التقرير.
6. معيار مراقبة الجودة
يجب أن يفي كل عنصر تحكم في المجموعة بالمتطلبات التالية مع منحنى "S" ، وإلا فإن التجربة غير صالحة.
| قنوات الكشف | سيطرة سلبية | مراقبة إيجابية |
| FAM (ORF1ab) | لا ط م | Ct≤38 |
| مركز فيينا الدولي (ن) | لا ط م | Ct≤38 |
| ROX (ه) | لا ط م | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | لا ط م | Ct≤38 |
【خفض السعر】
وفقًا لنتائج 100 عينة من مسحة البلعوم الفموي و 100 عينة من البلغم ، وباستخدام طريقة منحنى ROC ، فإن قيمة القطع لـ OFR1ab ، N الجينات E من هذه المجموعة هي Ct = 38
التعليمات
في هذه المجموعة ، تم تصميم الاشعال والتحقيقات الخاصة بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الفلوري في الوقت الحقيقي للمناطق المحفوظة والمحددة من الجين ORF1ab و N و E لـ 2019-nCoV على التوالي.أثناء تضخيم PCR ، يرتبط المسبار بالقالب ، ويتم شق مجموعة المراسل 5'-end من المسبار بواسطة إنزيم Taq (نشاط نوكلياز خارجي 5 '→ 3') ، وبالتالي الابتعاد عن مجموعة التبريد لتوليد إشارة الفلورسنت .يتم رسم منحنى التضخيم في الوقت الفعلي تلقائيًا بناءً على إشارة التألق المكتشفة ، ويتم حساب قيمة العينة Ct.يتم تصنيف الفلوروفورات FAM و VIC و ROX إلى الجين ORF1ab والجين N وتحقيقات الجين E.باستخدام اختبار واحد ، يمكن إجراء الكشف النوعي عن الجينات الثلاثة المذكورة أعلاه لـ 2019-nCoV في وقت واحد.
يتم تزويد المجموعة برقابة داخلية تستهدف جين RNase P لمراقبة جمع العينات السريرية والتعامل معها واستخراجها وعملية RT-PCR لتجنب النتائج السلبية الكاذبة.يتم تمييز عنصر التحكم الداخلي بمجموعة الفلورسنت CY5.
1. قم بتحليل وتفسير نتائج الاختبار عندما تكون الأداة طبيعية ، ويلبي كل من التحكم الإيجابي والتحكم السلبي ونتائج اختبار الرقابة الداخلية معايير مراقبة الجودة.
2. يوضح منحنى تضخيم التحكم الداخلي (CY5) منحنى S نموذجي و Ct 38 ، ويخضع تفسير نتائج الجينات المستهدفة للشروط التالية.
| قنوات الكشف | تفسير نتائج الجينات المستهدفة | ||
| FMA | مركز فيينا الدولي (الجين N) | ROX (الجين E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | مع منحنى تضخيم S نموذجي قيمة Ct هي 38 ، يكون الجين المستهدف المقابل موجبًا. |
| 38 قيراط ＜ 40 | 38 قيراط ＜ 40 | 38 قيراط ＜ 40 | باستخدام منحنى تضخيم S نموذجي ، أعد اختبار الجين المستهدف المقابل للعينة مرة أخرى. إذا كانت قيمة Ct ＜ 40 مع منحنى تضخيم S نموذجي ، يكون الجين المستهدف المقابل موجبًا ؛إذا كانت قيمة Ct 40 ، يكون الجين المستهدف المقابل سالبًا |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | الجين المستهدف المقابل سلبي |
تفسير نتائج 2019-nCoV:
وفقًا لنتائج ORF1ab و N gene و E gene ، التفسير على النحو التالي:
1) إذا كانت جيناتان أو ثلاثة من الجينات المكتشفة موجبة ، فإن 2019-nCoV يكون موجبًا ؛
2) إذا كان واحد فقط أو لا أحد من الجينات المكتشفة إيجابيًا ، فإن 2019-nCoV يكون سالبًا.
ملاحظة: يجب أن يكون منحنى التضخيم للعينة الإيجابية مع منحنى S نموذجي.ومع ذلك ، إذا كان التركيز المستهدف مرتفعًا جدًا ، فقد لا يتم تضخيم التحكم القياسي الداخلي ويمكن الحكم على العينة مباشرة على أنها إيجابية.إذا حصل أي اثنان من الجينات المستهدفة على Ct≤38 ، فإن 2019-nCoV يكون إيجابيًا.إذا حصل أي اثنان من الجينات المستهدفة على Ct≥40 ، فإن 2019-nCoV يكون سالبًا.إذا كان Ct≥40 ، أو لا يظهر أي قيمة ، فإن تفسير نتائج الجين المستهدف يكون سلبياً.
3. إذا كانت جميع قيم Ct لقنوات FAM و VIC و ROX و Cy5 أكثر من 38 أو لا يوجد منحنى تضخيم نموذجي واضح:
1) توجد / توجد مادة (مواد) في العينة تمنع تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.يوصى بتخفيف العينة لإعادة الاختبار.
2) إن عملية استخلاص الحمض النووي غير طبيعية ، لذا يُقترح إعادة الاستخلاص
حمض نووي لإعادة الاختبار.
3) هذه العينة لم تكن عينة مؤهلة في وقت أخذ العينات ، أو تدهورت
أثناء النقل والتخزين.
هناك طريقتان يمكننا اكتشاف هذه الحالات: NAAT و Antigen.
(يأتي من مركز السيطرة على الأمراض في لوس أنجلوس)
