Məhsul təfərrüatı
Ümumdünya Səhiyyə Təşkilatı (ÜST) antigen aşkarlayan sürətli diaqnostik testlərin (Ag-RDRs) aktiv SARS-CoV-2 infeksiyasının diaqnozu üçün nuklein turşusunun gücləndirilməsi testlərindən (NAATs) daha sürətli və daha ucuz yol təklif edə biləcəyini rəhbər tutur və ÜST də tövsiyə edir minimum performans tələblərinə cavab verən Ag-RDT-lər ilkin halların aşkarlanması, kontaktların izlənməsi, alovlanma araşdırmaları zamanı və icmalarda xəstəlik hallarının tendensiyalarına nəzarət etmək üçün istifadə edilə bilər.
Xüsusiyyətləri
● Hərtərəfli:Bir testdə üç hədəf geni aşkar edir
● uyğun:CY5, FAM, VIC/HEX kanalları ilə ümumi avadanlıqlara uyğunlaşır.
● Əla performans:Yüksək həssaslıq və spesifiklik, LOD = 200 nüsxə/ml.
Texniki Parametr
| Qablaşdırma Spesifikasiyası | 50 test/dəst, 100 test/dəst |
| Hədəf Bölgəsi | ORF1ab, N, E |
| Tətbiq olunan Nümunə | Bəlğəm, orofaringeal tampon |
| Aşkarlama Limiti | 200 nüsxə/ml |
| Ümumi təsadüf dərəcəsi | 99,55% |
| Ct dəyəri (CV,%) | ≤5,0% |
| Müsbət təsadüf dərəcəsi | 99,12% |
| Mənfi təsadüf nisbəti | 100% |
| Saxlama şəraiti və son istifadə tarixi | -20±5 ℃ temperaturda saxlanılır və müvəqqəti olaraq 12 ay etibarlıdır. |
| Daxili nəzarət | Bəli |
| Kataloq nömrəsi | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifikatlaşdırma | CE |
| Nümunələr | Nazofarengeal tampon, Orofaringeal tampon, Alveolyar yuyulma mayesi, Tüpürcək və bəlğəm |
| Tətbiq olunan alət | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR Sistemi |
Test Proseduru
1. Nuklein turşularının çıxarılması
Əməliyyat ekstraksiya dəstinin təlimatına uyğun aparılmalıdır.
2. Sistemin hazırlanması:
1) Reagenti çıxarın və reagenti tamamilə əridin.Qarışığı çevirin və dərhal sentrifuqa edin.N test reaksiyası (N = sınaqdan keçiriləcək nümunələrin sayı + müsbət nəzarət + mənfi nəzarət + 1) reaksiya sistemləri üçün müvafiq olaraq aşağıdakı kimi hazırlanır.
| Vomponentss | 1 reaksiya sistemi üçün həcm | N reaksiya sistemi üçün həcm |
| Nuklein turşusunun gücləndirilməsi reaksiya məhlulu Qarışıq (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Ferment qarışığı | 2 µL | 2 µL * N |
| Ümumi həcm | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reaksiya paylanması: Reaksiya məhlulu qarışdırıldı və sentrifuqa edildi və hər bir boru flüoresan PCR aparatı üçün uyğun bir PCR borusuna 20μL miqdarında paylandı.
3. Yüklənir
Çıxarılan nümunənin 5μL nuklein turşusu, müsbət nəzarət nuklein turşusu və mənfi nəzarət nuklein turşusu reaksiya sistemlərinə əlavə edilir və ümumi reaksiya həcmi 25μL-dir.Borunun qapağını bərkidin və bir neçə saniyə santrifüjdən sonra onu gücləndirmə sınaq sahəsinə aparın.
4. PCR Amplification Assay
1) Gücləndirmənin aşkarlanması üçün PCR reaksiya borusunu flüoresan PCR gücləndirici alətə qoyun.
2) Döngə parametrlərinin qəbulu:
| Proqram | Dövrlərin sayı | Temperatur | Reaksiya vaxtı | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 dəq | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 san | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 san | |
| 60℃ | 30 san | Floresans Kolleksiyası | ||
3) Aşkarlama parametrləri:
Aşkarlama kanalları müvafiq olaraq ORF1ab, N geninə və E Gene, RNase P daxili nəzarətinə uyğun olaraq FAM, VIC, ROX və CY5 olaraq təyin edilib."Quencher Dye" və "Passiv Reference" ABI 7500 aləti üçün "Yox" olaraq təyin edilib.Müsbət Nəzarət, Mənfi Nəzarət və Nümunəni (Naməlum) nümunələrin uyğun olduğu ardıcıllıqla təyin edin və “Nümunə adı” sütununda nümunə adını təyin edin.
X-POCH16 üçün əməliyyat və proqram aşağıdakı kimidir:
1) Öz-özünə sınaq başa çatdıqdan sonra qapağı açın və PCR reaksiya borularını alətdə təyin olunmuş yerlərə qoyun.
2) "Eksperti" seçərək başlayın.seçim."Hamı" seçimini seçin və ya ekranın sol tərəfindəki reaksiya sahəsini əl ilə seçin.
3) "YÜKLƏ" seçimini seçin;test proqramını seçin;"BİTDİR" və "ÇALIŞTIR" düyməsini basın.Proqramı tamamlamaq üçün 30 dəqiqə 42 saniyə çəkir.
Defolt proqramının aşkarlama kanalları müvafiq olaraq ORF1ab, N geninə və E Gene, RNase P daxili nəzarətinə uyğun olaraq FAM, VIC, ROX və CY5 olaraq təyin edilib.
Defolt proqramının dövr parametri aşağıdakılardır:
| Proqram | Sayı | Temperatur | Reaksiya vaxtı |
| 1 | 1 | 50℃ | 2dəq |
| 2 | 1 | 95℃ | 30san |
| 3 | 41 | 95℃ | 2san |
| 60℃ | 13san | Floresensiya |
5. Həddinin təyini
Təhlil edilən təsvirə əsasən, Başlanğıc dəyərini, Əsas xəttin Son dəyərini və Hədiyyə dəyərini tənzimləyin (Başlanğıc dəyəri və son dəyərin müvafiq olaraq 3 və 15 olaraq təyin edilməsi tövsiyə olunur və mənfi idarəetmənin gücləndirmə əyrisi düz və ya eşik xəttindən aşağı), analizin nümunə Ct dəyərini avtomatik əldə etmək üçün Analiz düyməsini klikləyin.Hesabat interfeysində nəticələrə baxın.
6. Keyfiyyətə Nəzarət Standartı
Dəstin hər bir nəzarəti 'S' əyrisi ilə aşağıdakı tələblərə cavab verməlidir, əks halda təcrübə etibarsızdır.
| Aşkarlama kanalları | Mənfi nəzarət | Müsbət nəzarət |
| FAM(ORF1ab) | No Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | No Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | No Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | No Ct | Ct≤38 |
【Kəsmə dəyəri】
100 orofaringeal tampon nümunəsinin və 100 bəlğəm nümunəsinin nəticələrinə görə və ROC əyri metodu ilə bu dəstin OFR1ab, N geninin E Geni Ct = 38-dir.
Tez-tez verilən suallar
Bu dəstdə real vaxt rejimində flüoresan PCR texnologiyasının primerləri və zondları müvafiq olaraq 2019-nCoV-un ORF1ab, N və E geninin qorunmuş və xüsusi bölgələri üçün nəzərdə tutulmuşdur.PCR gücləndirilməsi zamanı zond şablona bağlanır və zondun 5'-ucu müxbir qrupu Taq fermenti (5'→3' ekzonukleaz aktivliyi) tərəfindən parçalanır və bununla da flüoresan siqnal yaratmaq üçün söndürmə qrupundan uzaqlaşır. .Real vaxtda gücləndirmə əyrisi aşkar edilmiş flüoresan siqnal əsasında avtomatik olaraq qurulur və nümunənin Ct dəyəri hesablanır.FAM, VIC və ROX flüoroforları ORF1ab geni, N geni və E gen zondları ilə etiketlənir.Bir testdən istifadə etməklə, 2019-nCoV-nin yuxarıda göstərilən üç geninin keyfiyyətcə aşkarlanması eyni vaxtda həyata keçirilə bilər.
Dəst, yalan-mənfi nəticələrin qarşısını almaq üçün klinik nümunələrin toplanması, işlənməsi, çıxarılması və RT-PCR prosesini izləmək üçün RNase P genini hədəfləyən daxili nəzarətlə təmin edilir.Daxili nəzarət CY5 flüoresan qrupu ilə etiketlənmişdir.
1. Alət normal olduqda və müsbət nəzarət, mənfi nəzarət və daxili nəzarət test nəticəsi keyfiyyətə nəzarət standartına uyğun olduqda test nəticələrini təhlil edin və şərh edin.
2. Daxili nəzarətin gücləndirmə əyrisi (CY5) tipik S əyrisini və Ct ≤ 38-i göstərir, hədəf genlərin nəticələrinin şərhi aşağıdakı şərtlərə məruz qalır.
| Aşkarlama kanalları | Hədəf genlərin nəticələrinin şərhi | ||
| FMA | VIC (N geni) | ROX (E geni) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Tipik bir S gücləndirmə əyrisi ilə， Ct dəyəri≤38-dir, müvafiq hədəf gen müsbətdir. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Tipik bir S gücləndirmə əyrisi ilə, nümunənin müvafiq hədəf genini yenidən sınaqdan keçirin. Tipik S gücləndirmə əyrisi ilə Ct dəyəri＜ 40 olarsa, müvafiq hədəf gen müsbətdir;Ct dəyəri≥40 olarsa, müvafiq hədəf gen mənfidir |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Müvafiq hədəf gen mənfidir |
2019-nCoV üçün nəticələrin şərhi:
ORF1ab, N geni və E geninin nəticələrinə görə şərh aşağıdakı kimidir:
1) Aşkar edilmiş genlərin İKİ və ya ÜÇ geni müsbət olarsa, 2019-nCoV müsbətdir;
2) Aşkar edilmiş genlərdən YALNIZ BİRİ və ya HEÇ BİRİ müsbət deyilsə, 2019-nCoV mənfidir.
Qeyd: Müsbət nümunənin gücləndirmə əyrisi tipik S əyrisi ilə olmalıdır.Bununla belə, hədəf konsentrasiyası çox yüksək olarsa, daxili standart nəzarət gücləndirilə bilməz və nümunə birbaşa müsbət kimi qiymətləndirilə bilər.Hədəf genlərdən hər hansı ikisi Ct≤38 alırsa, 2019-nCoV müsbətdir.Hədəf genlərdən hər hansı ikisi Ct≥40 alırsa, 2019-nCoV mənfidir.Əgər Ct≥40 və ya heç bir dəyər göstərmirsə, təfsir hədəf genin nəticələri mənfi olur.
3. FAM, VIC, ROX və Cy5 kanallarının bütün Ct dəyərləri 38-dən çox olarsa və ya aşkar tipik S gücləndirmə əyrisi yoxdursa:
1) Nümunədə PCR reaksiyasını maneə törədən maddə(lər) var/var.Yenidən sınaqdan keçmək üçün nümunəni seyreltmək tövsiyə olunur.
2) Nuklein turşusunun çıxarılması prosesi anormaldır, ona görə də təkrar ekstraksiya təklif olunur
təkrar sınaq üçün nuklein turşusu.
3) Bu nümunə nümunə götürmə zamanı uyğun olmayan nümunə deyildi və ya pisləşdi
daşınma və saxlama zamanı.
Bunlar bu vəziyyətləri aşkar edə biləcəyimiz 2 yoldur: NAAT və Antigen.
(Los Angeles CDC-dən gəlir)
