Дэталь прадукту
Сусветная арганізацыя аховы здароўя (СААЗ) сцвярджае, што экспрэс-дыягнастычныя тэсты, якія выяўляюць антыген (Ag-RDR), могуць прапанаваць больш хуткі і менш дарагі спосаб дыягностыкі актыўнай інфекцыі SARS-CoV-2, чым тэсты ампліфікацыі нуклеінавых кіслот (NAAT), і СААЗ таксама рэкамендуе што Ag-RDT, якія адпавядаюць мінімальным патрабаванням да прадукцыйнасці, можна выкарыстоўваць для першаснага выяўлення выпадкаў, адсочвання кантактаў, падчас расследавання ўспышак і для маніторынгу тэндэнцый захворвання ў супольнасцях.
Асаблівасці
● Комплексная:У адным тэсце выяўляюцца тры мэтавых гена
● сумяшчальны:Адаптыўны да звычайнага абсталявання з каналамі CY5, FAM, VIC/HEX.
● Выдатная прадукцыйнасць:Высокая адчувальнасць і спецыфічнасць, LOD = 200 копій / мл.
Тэхнічны параметр
| Спецыфікацыя ўпакоўкі | 50 тэстаў/набор, 100 тэстаў/набор |
| Мэтавы рэгіён | ORF1ab, N, E |
| Прыдатны ўзор | Мокрота, мазок з ротоглотки |
| Мяжа выяўлення | 200 копій/мл |
| Агульны каэфіцыент супадзенняў | 99,55% |
| Значэнне Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Паказчык станоўчых супадзенняў | 99,12% |
| Каэфіцыент адмоўных супадзенняў | 100% |
| Умовы захоўвання і тэрмін прыдатнасці | Захоўваецца пры тэмпературы -20±5℃ і дзейнічае часова на працягу 12 месяцаў. |
| Унутраны кантроль | так |
| Нумар па каталогу | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Атэстацыя | CE |
| Узоры | Мазок з насаглоткі, мазок з ротоглотки, альвеалярны лаваж, сліна і мокрота |
| Прыдатны інструмент | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, сістэма ПЦР у рэальным часе SLAN-96P |
Працэдура выпрабаванняў
1. Экстракцыя нуклеінавых кіслот
Аперацыя павінна выконвацца ў адпаведнасці з інструкцыяй да камплекта экстракцыі.
2. Падрыхтоўка сістэмы:
1) Дастаньце рэагент і цалкам яго размарозіце.Перавярніце сумесь і неадкладна адцэнтрыфугуйце.N тэставых рэакцый (N = колькасць узораў, якія трэба праверыць + станоўчы кантроль + адмоўны кантроль + 1) рыхтуюць для рэакцыйных сістэм, адпаведна, наступным чынам.
| Vomponentss | Аб'ём для 1 рэакцыйнай сістэмы | Аб'ём для рэакцыйнай сістэмы N |
| Сумесь раствора для рэакцыі ампліфікацыі нуклеінавых кіслот (A7793YF) | 18 мкл | 18 мкл * N |
| Ферментная сумесь | 2 мкл | 2 мкл * N |
| Агульны аб'ём | 20 мкл | 20 мкл * N |
2) Размеркаванне рэакцыі: рэакцыйны раствор змешваюць і цэнтрыфугуюць, а кожную прабірку дадаюць у колькасці 20 мкл у прабірку для ПЦР, прыдатную для флуарэсцэнтнага ПЦР-апарата.
3. Загрузка
5 мкл нуклеінавай кіслаты экстрагаванага ўзору, нуклеінавай кіслаты станоўчага кантролю і нуклеінавай кіслаты адмоўнага кантролю дадаюць у рэакцыйныя сістэмы, і агульны аб'ём рэакцыі складае 25 мкл.Замацуеце крышку прабіркі і перамясціце яе ў зону тэставання ампліфікацыі пасля некалькіх секунд цэнтрыфугавання.
4. Аналіз ампліфікацыі ПЦР
1) Змесціце прабірку для рэакцыі ПЦР у прыбор для ампліфікацыі флуоресцентной ПЦР для выяўлення ампліфікацыі.
2) Налада параметраў цыкла:
| праграма | Колькасць цыклаў | тэмпература | Час рэакцыі | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 хв | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 сек | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 сек | |
| 60 ℃ | 30 сек | Калекцыя флуарэсцэнцыі | ||
3) Налады выяўлення:
Каналы выяўлення настроены на FAM, VIC, ROX і CY5, што адпавядае ORF1ab, гену N, і гену E, унутранаму кантролю РНКазы P адпаведна.Для "Quencher Dye" і "Passive Reference" для прыбора ABI 7500 устаноўлены значэнне "None".Усталюйце станоўчы кантроль, адмоўны кантроль і ўзор (невядома) у тым парадку, у якім адпавядаюць узоры, і ўсталюйце назву ўзору ў слупку «Назва ўзору».
Для X-POCH16 аперацыя і праграма наступныя:
1) Пасля завяршэння самаправеркі адкрыйце вечка і пастаўце прабіркі для рэакцыі ПЦР у прызначаныя месцы ў прыборы.
2) Пачніце з выбару «Exper».варыянт.Выберыце опцыю «Усе» або ўручную выберыце вобласць рэакцыі ў левай частцы экрана.
3) Абярыце опцыю «ЗАГРУЗІЦЬ»;выбраць тэставую праграму;націсніце «ГАТОВА» і «ВЫПУСК».Выкананне праграмы займае 30 хвілін 42 секунды.
Каналы выяўлення праграмы па змаўчанні настроены на FAM, VIC, ROX і CY5, што адпавядае ORF1ab, гену N, і гену E, унутранаму кантролю РНКазы P адпаведна.
Параметр цыкла праграмы па змаўчанні наступны:
| праграма | Колькасць | тэмпература | Час рэакцыі |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 хвіліны |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 сек |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 сек |
| 60 ℃ | 13 сек | Флуарэсцэнцыя |
5. Налада парога
У адпаведнасці з прааналізаваным малюнкам адрэгулюйце пачатковае значэнне, канчатковае значэнне базавай лініі і парогавае значэнне (пачатковае значэнне і канчатковае значэнне рэкамендуецца ўсталёўваць роўнымі 3 і 15 адпаведна, а крывую ампліфікацыі адмоўнага кантролю адрэгулююць так, каб яна была плоскай або ніжэй за парогавую лінію), націсніце «Аналіз», каб аўтаматычна атрымаць значэнне Ct для аналізу ўзору.Праглядзіце вынікі ў інтэрфейсе справаздачы.
6. Стандарт кантролю якасці
Кожны кантроль з набору павінен адпавядаць наступным патрабаванням з крывой "S", у адваротным выпадку эксперымент несапраўдны.
| Каналы выяўлення | Адмоўны кантроль | Станоўчы кантроль |
| FAM(ORF1ab) | Няма Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Няма Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Няма Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Няма Ct | Ct≤38 |
【Гранічнае значэнне】
У адпаведнасці з вынікамі 100 узораў мазкоў з ротаглоткі і 100 узораў мокроты, а таксама метадам крывой ROC, гранічнае значэнне OFR1ab, N генаў E Gene гэтага набору складае Ct = 38
FAQ
У гэтым наборы праймеры і зонды тэхналогіі флуарэсцэнтнай ПЦР у рэальным часе прызначаны для кансерватыўных і спецыфічных рэгіёнаў гена ORF1ab, N і E 2019-nCoV адпаведна.Падчас ПЦР-ампліфікацыі зонд звязваецца з матрыцай, і 5'-канец рэпарцёрнай групы зонда расшчапляецца ферментам Taq (экзануклеазная актыўнасць 5'→3'), тым самым адыходзячы ад гашаючай групы для генерацыі флуоресцентного сігналу .Крывая ампліфікацыі ў рэальным часе будуецца аўтаматычна на аснове выяўленага сігналу флуарэсцэнцыі, і разлічваецца значэнне Ct ўзору.Флуарафоры FAM, VIC і ROX пазначаны як зонды гена ORF1ab, гена N і гена E.З дапамогай аднаго тэсту можна адначасова правесці якаснае выяўленне трох вышэйзгаданых генаў 2019-nCoV.
Набор забяспечваецца ўнутраным кантролем, нацэленым на ген РНКазы P для маніторынгу збору клінічных узораў, апрацоўкі, экстракцыі і працэсу RT-PCR, каб пазбегнуць прытворнаадмоўных вынікаў.Унутраны кантроль пазначаны флуоресцентной групай CY5.
1. Прааналізуйце і інтэрпрэтуйце вынікі тэстаў, калі прыбор спраўны, а вынікі станоўчага кантролю, адмоўнага кантролю і ўнутранага кантролю адпавядаюць стандарту кантролю якасці.
2. Крывая ампліфікацыі ўнутранага кантролю (CY5) паказвае тыповую крывую S і Ct ≤ 38, інтэрпрэтацыя вынікаў мэтавых генаў падвяргаецца наступным умовам.
| Каналы выяўлення | Інтэрпрэтацыя вынікаў генаў-мішэняў | ||
| ФМА | ВІК (ген N) | РОКС (ген E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Пры тыповай крывой ампліфікацыі S， значэнне Ct складае ≤38, адпаведны мэтавы ген станоўчы. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | З тыповай крывой ампліфікацыі S， паўторна праверце адпаведны ген-мішэнь узору. Калі значэнне Ct < 40 з тыповай крывой ампліфікацыі S, адпаведны мэтавы ген з'яўляецца станоўчым;калі значэнне Ct≥40, адпаведны ген-мішэнь адмоўны |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Адпаведны ген-мішэнь адмоўны |
Інтэрпрэтацыя вынікаў па 2019-nCoV:
Па выніках ORF1ab, гена N і гена E інтэрпрэтацыя наступная:
1) Калі ДВА ці ТРЫ гены з выяўленых генаў станоўчыя, 2019-nCoV станоўчы;
2) Калі ТОЛЬКІ АДЗІН або НІводзін з выяўленых генаў не з'яўляецца станоўчым, 2019-nCoV з'яўляецца адмоўным.
Заўвага: крывая ампліфікацыі станоўчага ўзору павінна мець тыповую крывую S.Аднак, калі мэтавая канцэнтрацыя занадта высокая, кантроль унутранага стандарту можа не быць узмоцнены, і ўзор можна адразу прызнаць станоўчым.Калі любыя два мэтавых гена атрымліваюць Ct≤38, 2019-nCoV з'яўляецца станоўчым.Калі любыя два з мэтавых генаў атрымліваюць Ct≥40, 2019-nCoV з'яўляецца адмоўным.Калі Ct≥40 або не паказвае значэння, вынікі інтэрпрэтацыі мэтавага гена адмоўныя.
3. Калі ўсе значэнні Ct каналаў FAM, VIC, ROX і Cy5 больш за 38 або няма відавочнай тыповай крывой узмацнення S:
1) Ва ўзоры прысутнічае рэчыва(я), якое інгібіруе рэакцыю ПЦР.Рэкамендуецца разбавіць пробу для паўторнага аналізу.
2) Працэс экстракцыі нуклеінавых кіслот ненармальны, таму прапануецца правесці паўторную экстракцыю
нуклеінавай кіслаты для паўторнага тэсту.
3) Гэты ўзор НЕ з'яўляўся кваліфікаваным узорам на момант адбору або пагоршыўся
пры транспарціроўцы і захоўванні.
Мы можам выявіць гэтыя сітуацыі двума спосабамі: NAAT і антыген.
(Паходзіць з CDC Лос-Анджэлеса)
