Подробности за продукта
Световната здравна организация (СЗО) ръководи, че бързите диагностични тестове за откриване на антигени (Ag-RDRs) могат да предложат по-бърз и по-евтин начин за диагностициране на активна SARS-CoV-2 инфекция от тестовете за усилване на нуклеинова киселина (NAATs), и СЗО също препоръчва че Ag-RDT, отговарящи на минималните изисквания за ефективност, могат да се използват за първично откриване на случаи, проследяване на контакти, по време на разследване на огнища и за наблюдение на тенденциите на заболеваемост в общностите.
Характеристика
● Изчерпателно:Три целеви гена се откриват в един тест
● съвместим:Адаптивен към общо оборудване с CY5, FAM, VIC/HEX канали.
● Отлично представяне:Висока чувствителност и специфичност, LOD = 200 копия/ml.
Технически параметър
| Спецификация на опаковката | 50 теста/комплект, 100 теста/комплект |
| Целеви регион | ORF1ab, N, E |
| Приложима проба | Храчки, орофарингеален тампон |
| Граница на откриване | 200 копия/мл |
| Общ процент на съвпадение | 99,55% |
| Ct стойност (CV,%) | ≤5,0% |
| Процент на положителни съвпадения | 99,12% |
| Процент на отрицателни съвпадения | 100% |
| Условия за съхранение и срок на годност | Съхранява се при -20±5℃ и е валиден временно за 12 месеца. |
| Вътрешен контрол | да |
| Каталожен номер | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Сертификация | CE |
| Екземпляри | Назофарингеален тампон, орофарингеален тампон, алвеоларен лаваж, слюнка и храчка |
| Приложим инструмент | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P PCR система в реално време |
Процедура за изпитване
1. Извличане на нуклеинова киселина
Операцията трябва да се извършва съгласно ръководството на комплекта за извличане.
2. Подготовка на системата:
1) Извадете реагента и го размразете напълно.Обърнете сместа и веднага центрофугирайте.N тестови реакции (N = брой проби за тестване + положителна контрола + отрицателна контрола + 1) се подготвят съответно за реакционни системи, както следва.
| Vomponentss | Обем за 1 реакционна система | Обем за N реакционна система |
| Реакционен разтвор за амплификация на нуклеинова киселина Смес (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Ензимна смес | 2 µL | 2 µL * N |
| Общ обем | 20 µL | 20 µL * N |
2) Разпределение на реакцията: Реакционният разтвор се смесва и центрофугира и всяка епруветка се разпределя в количество от 20 μL в PCR епруветка, подходяща за флуоресцентен PCR апарат.
3. Зареждане
5 μL от екстрахираната проба нуклеинова киселина, нуклеинова киселина с положителна контрола и нуклеинова киселина с отрицателна контрола се добавят към реакционните системи и общият обем на реакцията е 25 μL.Закрепете капака на епруветката и я преместете в зоната за тест за амплификация след няколко секунди центрофугиране.
4. PCR анализ на амплификация
1) Поставете епруветката за реакция на PCR във флуоресцентния инструмент за амплификация на PCR за откриване на амплификация.
2) Настройка на параметъра на цикъла:
| програма | Брой цикли | температура | Време за реакция | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 мин | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 сек | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 сек | |
| 60 ℃ | 30 сек | Флуоресцентна колекция | ||
3) Настройки за откриване:
Каналите за откриване са настроени на FAM, VIC, ROX и CY5, съответстващи съответно на ORF1ab, N ген и Е ген, RNase P вътрешен контрол.„Quencher Dye“ и „Passive Reference“ са зададени на „None“ за инструмента ABI 7500.Задайте положителна контрола, отрицателна контрола и проба (неизвестна) в реда, в който пробите съответстват, и задайте името на пробата в колоната „Име на пробата“.
За X-POCH16 операцията и програмата са както следва:
1) След като самотестът приключи, отворете капака и поставете епруветките за PCR реакция в определените позиции в инструмента.
2) Започнете, като изберете "Expert."опция.Изберете опцията „Всички“ или изберете ръчно зоната за реакция от лявата страна на екрана.
3) Изберете опцията "ЗАРЕДИ";изберете тестовата програма;щракнете върху „ГОТОВО“ и върху „ИЗПЪТНИ“.Изпълнението на програмата отнема 30 минути 42 секунди.
Каналите за откриване на програмата по подразбиране са настроени на FAM, VIC, ROX и CY5, съответстващи съответно на ORF1ab, N ген и E Gene, RNase P вътрешен контрол.
Параметърът на цикъла на програмата по подразбиране е както следва:
| програма | Брой | температура | Време за реакция |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 мин |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 сек |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 сек |
| 60 ℃ | 13 сек | Флуоресценция |
5. Настройка на праг
Според анализираното изображение, коригирайте началната стойност, крайната стойност на базовата линия и праговата стойност (препоръчва се началната стойност и крайната стойност да бъдат зададени съответно на 3 и 15, а кривата на усилване на отрицателната контрола се регулира да бъде плоска или по-ниска от праговата линия), щракнете върху Анализ, за да получите автоматично анализ на стойността на Ct на пробата.Вижте резултатите в интерфейса за отчет.
6. Стандарт за контрол на качеството
Всяка контрола от комплекта трябва да отговаря на следните изисквания с 'S' крива, в противен случай експериментът е невалиден.
| Канали за откриване | Отрицателна контрола | Положителна контрола |
| FAM(ORF1ab) | Няма Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Няма Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Няма Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Няма Ct | Ct≤38 |
【Гранична стойност】
Според резултатите от 100 проби от орофарингеален тампон и 100 проби от храчки и с метода на ROC кривата, граничната стойност на OFR1ab, N гените E Gene на този комплект са Ct = 38
ЧЗВ
В този комплект праймерите и пробите на флуоресцентна PCR технология в реално време са предназначени за запазените и специфични региони на ORF1ab, N и E гена съответно на 2019-nCoV.По време на PCR амплификация сондата се свързва с шаблона и 5'-крайната репортерна група на сондата се разцепва от ензима Taq (5'→3' екзонуклеазна активност), като по този начин се отдалечава от охлаждащата група, за да генерира флуоресцентен сигнал .Кривата на усилване в реално време се изчертава автоматично въз основа на открития флуоресцентен сигнал и се изчислява Ct стойността на пробата.FAM, VIC и ROX флуорофорите са белязани към ORF1ab ген, N ген и Е генни сонди.С помощта на един тест може да се извърши едновременно качествено откриване на горните три гена на 2019-nCoV.
Комплектът е снабден с вътрешен контрол, насочен към гена RNase P за наблюдение на събирането на клинични проби, обработката, екстракцията и процеса на RT-PCR, за да се избегнат фалшиво-отрицателни резултати.Вътрешната контрола е етикетирана с CY5 флуоресцентна група.
1. Анализирайте и интерпретирайте резултатите от теста, когато инструментът е нормален и резултатите от теста за положителната контрола, отрицателната контрола и вътрешния контрол отговарят на стандарта за контрол на качеството.
2. Кривата на амплификация на вътрешния контрол (CY5) показва типична S крива и Ct ≤ 38, тълкуването на резултатите от целевите гени е подложено на следните условия.
| Канали за откриване | Интерпретиране на резултатите от целевите гени | ||
| FMA | VIC (N ген) | ROX (Е ген) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | С типична S крива на усилване, стойността на Ct е ≤38, съответният целеви ген е положителен. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | С типична S крива на амплификация, тествайте отново съответния целеви ген на пробата отново. Ако стойността на Ct < 40 с типична S крива на амплификация, съответният целеви ген е положителен;ако стойността на Ct≥40, съответният целеви ген е отрицателен |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Съответният целеви ген е отрицателен |
Тълкуване на резултатите за 2019-nCoV:
Според резултатите от ORF1ab, N ген и Е ген, интерпретация, както следва:
1) Ако ДВА или ТРИ гена от откритите гени са положителни, 2019-nCoV е положителен;
2) Ако САМО ЕДИН или НИТО един от откритите гени не е положителен, 2019-nCoV е отрицателен.
Забележка: Кривата на усилване на положителната проба трябва да бъде с типична S крива.Въпреки това, ако целевата концентрация е твърде висока, вътрешната стандартна контрола може да не бъде усилена и пробата може директно да се оцени като положителна.Ако всеки два от целевите гени получат Ct≤38, 2019-nCoV е положителен.Ако всеки два от целевите гени получат Ct≥40, 2019-nCoV е отрицателен.Ако Ct≥40 или не показва стойност, резултатите от интерпретацията на целевия ген са отрицателни.
3. Ако всички стойности на Ct на FAM, VIC, ROX и Cy5 каналите са повече от 38 или няма очевидна типична S крива на усилване:
1) В пробата има вещество(а), което инхибира PCR реакцията.Препоръчва се пробата да се разреди за повторно изследване.
2) Процесът на извличане на нуклеинова киселина е необичаен, така че се предлага повторно извличане
нуклеинова киселина за повторен тест.
3) Тази проба НЕ е квалифицирана проба по време на вземането на пробата или е влошена
по време на транспортиране и съхранение.
Това са 2 начина, по които можем да открием тези ситуации: NAAT и антиген.
(Идва от CDC на Лос Анджелис)
