Detalji o proizvodu
Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) navodi da brzi dijagnostički testovi za otkrivanje antigena (Ag-RDR) mogu ponuditi brži i jeftiniji način za dijagnosticiranje aktivne SARS-CoV-2 infekcije od testova amplifikacije nukleinske kiseline (NAAT), a SZO također preporučuje da se Ag-RDT koji ispunjavaju minimalne zahtjeve za performanse mogu koristiti za primarno otkrivanje slučajeva, praćenje kontakata, tokom istraga epidemije i za praćenje trendova incidencije bolesti u zajednicama.
Karakteristike
● Sveobuhvatno:Tri ciljna gena detektuju se u jednom testu
● kompatibilan:Prilagodljiv na uobičajenu opremu sa CY5, FAM, VIC/HEX kanalima.
● Odlične performanse:Visoka osjetljivost i specifičnost, LOD = 200 kopija/ml.
Technical Parameter
| Specifikacija pakovanja | 50 testova/komplet, 100 testova/komplet |
| Ciljna regija | ORF1ab, N, E |
| Primjenjiv uzorak | Sputum, orofaringealni bris |
| Limit of Detection | 200 kopija/ml |
| Ukupna stopa koincidencija | 99,55% |
| Ct vrijednost (CV,%) | ≤5,0% |
| Stopa pozitivne koincidencije | 99,12% |
| Negativna stopa koincidencija | 100% |
| Uslovi skladištenja i rok trajanja | Čuva se na -20±5℃ i privremeno važi 12 meseci. |
| Unutrašnja kontrola | Da |
| Kataloški broj | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certifikat | CE |
| Specimens | Bris nazofarinksa, bris orofarinksa, tečnost iz alveolarnog ispiranja, pljuvačka i sputum |
| Primjenjivi instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P PCR sistem u realnom vremenu |
Procedura testiranja
1. Ekstrakcija nukleinske kiseline
Rad bi trebao biti izveden prema priručniku kompleta za ekstrakciju.
2. Priprema sistema:
1) Izvadite reagens i potpuno ga odmrznite.Okrenite smjesu i odmah centrifugirajte.N test reakcija (N = broj uzoraka za testiranje + pozitivna kontrola + negativna kontrola + 1) pripremaju se za reakcione sisteme, na sledeći način.
| Vomponentss | Volumen za 1 reakcioni sistem | Volumen za N reakcijski sistem |
| Mješavina reakcije amplifikacije nukleinske kiseline (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Mešavina enzima | 2 µL | 2 µL * N |
| Ukupna zapremina | 20 µL | 20 µL * N |
2) Raspodjela reakcije: Reakciona otopina je pomiješana i centrifugirana, a svaka epruveta je dozirana u količini od 20 μL u PCR epruveti pogodnoj za fluorescentni PCR aparat.
3. Učitavanje
Reakcionim sistemima se dodaje 5 μL nukleinske kiseline iz ekstrahovanog uzorka, nukleinske kiseline pozitivne kontrole i nukleinske kiseline negativne kontrole, a ukupna zapremina reakcije je 25 μL.Pričvrstite poklopac epruvete i premjestite ga u područje za testiranje amplifikacije nakon nekoliko sekundi centrifugiranja.
4. PCR test amplifikacije
1) Stavite PCR reakcijsku epruvetu u fluorescentni instrument za PCR amplifikaciju za detekciju amplifikacije.
2) Postavljanje parametara ciklusa:
| Program | Broj ciklusa | Temperatura | Vrijeme reakcije | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sec | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sek | |
| 60℃ | 30 sec | Fluorescence Collection | ||
3) Postavke detekcije:
Kanali za detekciju su postavljeni na FAM, VIC ,ROX i CY5, što odgovara ORF1ab, N genu i E genu, internoj kontroli RNase P."Quencher Dye" i "Passive Reference" su postavljeni na "None" za ABI 7500 instrument.Postavite pozitivnu kontrolu, negativnu kontrolu i uzorak (nepoznato) redoslijedom kojim uzorci odgovaraju i postavite naziv uzorka u kolonu “Naziv uzorka”.
Za X-POCH16 rad i program su sljedeći:
1) Nakon što je samotestiranje završeno, otvorite poklopac i stavite epruvete za PCR reakciju na naznačene pozicije u instrumentu.
2) Započnite odabirom "Exper".opcija.Odaberite opciju "Sve" ili ručno odaberite područje reakcije na lijevoj strani ekrana.
3) Odaberite opciju "LOAD";izaberite program za testiranje;kliknite na “DONE” i “RUN”.Program traje 30 minuta 42 s da se završi.
Kanali za detekciju zadanog programa su postavljeni na FAM, VIC, ROX i CY5, što odgovara ORF1ab, N genu i E genu, internoj kontroli RNase P, respektivno.
Parametar ciklusa zadanog programa je sljedeći:
| Program | Broj | Temperatura | Vrijeme reakcije |
| 1 | 1 | 50℃ | 2min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30sec |
| 3 | 41 | 95℃ | 2sec |
| 60℃ | 13sec | Fluorescencija |
5. Postavljanje praga
Prema analiziranoj slici, podesite početnu vrijednost, krajnju vrijednost osnovne i granične vrijednosti (preporučuje se postavljanje početne i krajnje vrijednosti na 3 i 15, a krivulja pojačanja negativne kontrole je podešena da bude ravna ili niže od granične linije), kliknite na Analiza da automatski dobijete analizu Ct vrijednosti uzorka.Pogledajte rezultate u sučelju izvještaja.
6. Standard kontrole kvaliteta
Svaka kontrola kompleta mora ispunjavati sljedeće zahtjeve sa 'S' krivom, inače je eksperiment nevažeći.
| Kanali za detekciju | Negativna kontrola | Pozitivna kontrola |
| FAM(ORF1ab) | No Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | No Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | No Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | No Ct | Ct≤38 |
【Granična vrijednost】
Prema rezultatima 100 uzoraka orofaringealnog brisa i 100 uzoraka sputuma, te metodom ROC krivulje, granična vrijednost gena OFR1ab, N gena E ovog kompleta je Ct = 38
FAQ
U ovom kompletu, prajmeri i sonde fluorescentne PCR tehnologije u realnom vremenu dizajnirane su za očuvane i specifične regije ORF1ab, N i E gena 2019-nCoV respektivno.Tokom PCR amplifikacije, sonda se veže za šablon, a reporterska grupa na 5'-kraju sonde se cijepa od strane Taq enzima (5'→3' egzonukleazna aktivnost), čime se udaljava od grupe za gašenje i stvara fluorescentni signal .Kriva pojačanja u realnom vremenu se automatski iscrtava na osnovu detektovanog fluorescentnog signala i izračunava se vrednost uzorka Ct.FAM, VIC i ROX fluorofori su označeni za ORF1ab gen, N gen i E gen sonde.Korištenjem jednog testa može se istovremeno izvršiti kvalitativna detekcija gornja tri gena 2019-nCoV.
Komplet ima internu kontrolu koja cilja na RNase P gen za praćenje prikupljanja kliničkih uzoraka, rukovanja, ekstrakcije i RT-PCR procesa kako bi se izbjegli lažno negativni rezultati.Unutrašnja kontrola je označena fluorescentnom grupom CY5.
1. Analizirajte i interpretirajte rezultate testa kada je instrument normalan, a pozitivna kontrola, negativna kontrola i rezultat testa interne kontrole ispunjavaju standard kontrole kvaliteta.
2. Kriva amplifikacije interne kontrole (CY5) pokazuje tipičnu S krivu i Ct ≤ 38, interpretacija rezultata ciljnih gena je podvrgnuta sljedećim uslovima.
| Kanali za detekciju | Interpretacija rezultata ciljnih gena | ||
| FMA | VIC (N gen) | ROX (E gen) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Uz tipičnu krivu S amplifikacije, vrijednost Ct je ≤38, odgovarajući ciljni gen je pozitivan. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Sa tipičnom krivom S amplifikacije, ponovo testirajte odgovarajući ciljni gen uzorka. Ako je Ct vrijednost < 40 sa tipičnom krivom S amplifikacije, odgovarajući ciljni gen je pozitivan;ako je Ct vrijednost≥40, odgovarajući ciljni gen je negativan |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Odgovarajući ciljni gen je negativan |
Tumačenje rezultata za 2019-nCoV:
Prema rezultatima ORF1ab, N gena i E gena, interpretacija je sljedeća:
1) Ako su DVA ili TRI gena otkrivenih gena pozitivna, 2019-nCoV je pozitivan;
2) Ako je SAMO JEDAN ili NIJEDAN od otkrivenih gena pozitivan, 2019-nCoV je negativan.
Napomena: Kriva amplifikacije pozitivnog uzorka treba da bude sa tipičnom S krivom.Međutim, ako je ciljna koncentracija previsoka, kontrola internog standarda možda neće biti pojačana i uzorak se može direktno ocijeniti pozitivnim.Ako bilo koja dva ciljana gena dobiju Ct≤38, 2019-nCoV je pozitivan.Ako bilo koja dva ciljana gena dobiju Ct≥40, 2019-nCoV je negativan.Ako Ct≥40, ili ne pokazuju nikakvu vrijednost, interpretacija rezultata ciljnog gena je negativna.
3. Ako su sve vrijednosti Ct kanala FAM, VIC, ROX i Cy5 veće od 38 ili nema očigledne tipične krivulje S amplifikacije:
1) U uzorku postoje supstance koje inhibiraju PCR reakciju.Preporučuje se da se uzorak razblaži za ponovno ispitivanje.
2) Proces ekstrakcije nukleinske kiseline je abnormalan, pa se predlaže ponovno ekstrahovanje
nukleinske kiseline za ponovni test.
3) Ovaj uzorak NIJE bio kvalifikovan uzorak u vrijeme uzorkovanja ili degradiran
tokom transporta i skladištenja.
To su 2 načina na koje možemo otkriti ove situacije: NAAT i Antigen.
(Dolazi iz CDC-a iz Los Angelesa)
