Detall del producte
L'Organització Mundial de la Salut (OMS) indica que les proves de diagnòstic ràpid de detecció d'antígens (Ag-RDR) poden oferir una manera més ràpida i menys costosa de diagnosticar la infecció activa per SARS-CoV-2 que les proves d'amplificació d'àcids nucleics (NAAT), i l'OMS també recomana que els Ag-RDT que compleixin els requisits mínims de rendiment es poden utilitzar per a la detecció de casos primaris, el seguiment de contactes, durant les investigacions de brots i per controlar les tendències de la incidència de malalties a les comunitats.

Característiques
● Integral:Es detecten tres gens diana en una prova
● compatible:Adaptable a equips comuns amb canals CY5, FAM, VIC/HEX.
● Excel·lent rendiment:Alta sensibilitat i especificitat, LOD = 200 còpies/ml.
Paràmetre tècnic
Especificació d'embalatge | 50 proves/kit, 100 proves/kit |
Regió objectiu | ORF1ab, N, E |
Mostra aplicable | Esput, hisop orofarínge |
Límit de detecció | 200 còpies/ml |
Taxa total de coincidències | 99,55% |
Valor Ct (CV,%) | ≤5,0% |
Taxa de coincidència positiva | 99,12% |
Taxa de coincidència negativa | 100% |
Condicions d'emmagatzematge i data de caducitat | Emmagatzemat a -20 ± 5 ℃ i és vàlid provisionalment durant 12 mesos. |
Control intern | Sí |
Número de catàleg | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
Certificació | CE |
Espècimens | Hisop nasofarínge, hisop orofaríngi, líquid de rentat alveolar, saliva i esputo |
Instrument aplicable | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Sistema PCR en temps real |
Procediment de prova

1. Extracció d'àcids nucleics
L'operació s'ha de dur a terme segons el manual del kit d'extracció.
2. Preparació del sistema:
1) Traieu el reactiu i descongeleu-lo completament.Invertiu la mescla i centrifugueu immediatament.N reaccions de prova (N = nombre de mostres a provar + control positiu + control negatiu + 1) es preparen per als sistemes de reacció, respectivament, de la següent manera.
Vomponentss | Volum per a 1 sistema de reacció | Volum per al sistema de reacció N |
Mescla de solució de reacció d'amplificació d'àcids nucleics (A7793YF) | 18 µl | 18 µL * N |
Mescla d'enzims | 2 µl | 2 µL * N |
Volum total | 20 µl | 20 µL * N |
2) Distribució de la reacció: la solució de reacció es va barrejar i es va centrifugar, i cada tub es va dispensar en una quantitat de 20 μL en un tub de PCR adequat per a un aparell de PCR de fluorescència.
3. Càrrega
S'afegeixen 5 μL de l'àcid nucleic de la mostra extreta, l'àcid nucleic de control positiu i l'àcid nucleic de control negatiu als sistemes de reacció i el volum de reacció total és de 25 μL.Fixeu la coberta del tub i traslladeu-la a la zona de prova d'amplificació després d'uns segons de centrifugació.
4. Assaig d'amplificació per PCR
1) Col·loqueu el tub de reacció de PCR a l'instrument d'amplificació de PCR fluorescent per a la detecció de l'amplificació.
2) Configuració de paràmetres de cicle:
Programa | Nombre de cicles | Temperatura | Temps de reacció | |
1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
2 | 1 | 95℃ | 30 segons | |
3 | 45 | 95℃ | 5 segons | |
60℃ | 30 segons | Col·lecció de fluorescència |
3) Configuració de detecció:
Els canals de detecció es configuren a FAM, VIC, ROX i CY5, corresponents a ORF1ab, gen N i E Gene, control intern RNasa P, respectivament."Quencher Dye" i "Passive Reference" s'estableixen a "Cap" per a l'instrument ABI 7500.Establiu el control positiu, el control negatiu i la mostra (desconegut) en l'ordre en què corresponen les mostres i establiu el nom de la mostra a la columna "Nom de la mostra".
Per a X-POCH16, el funcionament i el programa són els següents:
1) Un cop finalitzada l'autoprova, obriu la tapa i poseu els tubs de reacció de PCR a les posicions designades a l'instrument.
2) Comenceu seleccionant "Exper".opció.Seleccioneu l'opció "Tots" o seleccioneu manualment l'àrea de reacció a la part esquerra de la pantalla.
3) Seleccioneu l'opció "CARREGAR";seleccionar el programa de prova;feu clic a "FET" i a "RUN".El programa triga 30 min 42 segons a completar-se.
Els canals de detecció del programa predeterminat s'estableixen a FAM, VIC, ROX i CY5, corresponents al control intern ORF1ab, N gen i E Gene, RNase P, respectivament.
Els paràmetres de cicle del programa per defecte són els següents:
Programa | Nombre de | Temperatura | Temps de reacció |
1 | 1 | 50℃ | 2 min |
2 | 1 | 95℃ | 30 segons |
3 | 41 | 95℃ | 2 seg |
60℃ | 13 segons | Fluorescència |
5. Configuració del llindar
D'acord amb la imatge analitzada, ajusteu el valor inicial, el valor final de la línia de base i el valor llindar (es recomana que el valor inicial i el valor final siguin 3 i 15, respectivament, i la corba d'amplificació del control negatiu s'ajusta perquè sigui plana o inferior a la línia de llindar), feu clic a Anàlisi per obtenir automàticament l'anàlisi del valor Ct de mostra.Consulteu els resultats a la interfície de l'informe.
6. Norma de control de qualitat
Cada control del kit ha de complir els requisits següents amb la corba "S", en cas contrari, l'experiment no és vàlid.
Canals de detecció | Control negatiu | Control positiu |
FAM(ORF1ab) | No Ct | Ct≤38 |
VIC(N) | No Ct | Ct≤38 |
ROX(E) | No Ct | Ct≤38 |
CY5(RP) | No Ct | Ct≤38 |
【Valor de tall】
Segons els resultats de 100 mostres de hisop orofarínge i 100 mostres d'esput, i amb el mètode de la corba ROC, el valor de tall del gen OFR1ab, N gens E d'aquest kit és Ct = 38
PMF
En aquest kit, els primers i les sondes de la tecnologia de PCR fluorescent en temps real estan dissenyats per a les regions conservades i específiques del gen ORF1ab, N i E de 2019-nCoV respectivament.Durant l'amplificació per PCR, la sonda s'uneix a la plantilla i el grup informador de l'extrem 5' de la sonda és escindit per l'enzim Taq (activitat exonucleasa 5'→3'), allunyant-se així del grup d'extinció per generar un senyal fluorescent. .La corba d'amplificació en temps real es representa automàticament en funció del senyal de fluorescència detectat i es calcula el valor Ct de la mostra.Els fluoròfors FAM, VIC i ROX estan marcats amb sondes del gen ORF1ab, del gen N i del gen E.Mitjançant una prova, es pot realitzar simultàniament la detecció qualitativa dels tres gens anteriors de 2019-nCoV.
El kit inclou un control intern dirigit al gen RNasa P per controlar la recollida, manipulació, extracció i procés de RT-PCR de mostres clíniques per evitar resultats falsos negatius.El control intern està etiquetat amb un grup fluorescent CY5.
1. Analitzar i interpretar els resultats de la prova quan l'instrument és normal i el control positiu, el control negatiu i el resultat de la prova de control intern compleixen l'estàndard de control de qualitat.
2. La corba d'amplificació de control intern (CY5) mostra una corba S típica i Ct ≤ 38, la interpretació dels resultats dels gens diana està sotmès a les condicions següents.
Canals de detecció | Interpretació dels resultats dels gens diana | ||
FMA | VIC (gen N) | ROX (gen E) | |
Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Amb una corba d'amplificació S típica, el valor Ct és ≤38, el gen objectiu corresponent és positiu. |
38 < Ct < 40 | 38 < Ct < 40 | 38 < Ct < 40 | Amb una corba d'amplificació S típica, torneu a provar el gen objectiu corresponent de la mostra de nou. Si el valor Ct < 40 amb una corba d'amplificació S típica, el gen objectiu corresponent és positiu;si el valor Ct ≥40, el gen objectiu corresponent és negatiu |
Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | El gen objectiu corresponent és negatiu |
Interpretació dels resultats del 2019-nCoV:
Segons els resultats de l'ORF1ab, el gen N i el gen E, la interpretació és la següent:
1) Si DOS o TRES gens dels gens detectats són positius, el 2019-nCoV és positiu;
2) Si NOMÉS UN o CAP dels gens detectats és positiu, el 2019-nCoV és negatiu.
Nota: La corba d'amplificació de la mostra positiva hauria de ser amb una corba S típica.Tanmateix, si la concentració objectiu és massa alta, és possible que el control de l'estàndard intern no s'amplifi i la mostra es pot jutjar directament com a positiva.Si dos gens objectiu qualsevol obtenen Ct≤38, el 2019-nCoV és positiu.Si dos gens objectiu qualsevol obtenen Ct≥40, el 2019-nCoV és negatiu.Si Ct≥40, o no mostra cap valor, la interpretació dels resultats del gen objectiu és negatiu.
3. Si tots els valors de Ct dels canals FAM, VIC, ROX i Cy5 són superiors a 38 o no hi ha una corba d'amplificació S típica evident:
1) Hi ha/hi ha substàncies a la mostra que inhibeixen la reacció de PCR.Es recomana diluir la mostra per tornar-la a provar.
2) El procés d'extracció d'àcids nucleics és anormal, per la qual cosa es suggereix tornar-lo a extreure
àcid nucleic per tornar a provar.
3) Aquesta mostra NO era una mostra qualificada en el moment del mostreig, ni estava degradada
durant el transport i l'emmagatzematge.
Són 2 maneres de detectar aquestes situacions: NAAT i Antigen.
(Prové del CDC de Los Angeles)