Detall del producte
L'Organització Mundial de la Salut (OMS) indica que les proves de diagnòstic ràpid de detecció d'antígens (Ag-RDR) poden oferir una manera més ràpida i menys costosa de diagnosticar la infecció activa per SARS-CoV-2 que les proves d'amplificació d'àcids nucleics (NAAT), i l'OMS també recomana que els Ag-RDT que compleixin els requisits mínims de rendiment es poden utilitzar per a la detecció de casos primaris, el seguiment de contactes, durant les investigacions de brots i per controlar les tendències de la incidència de malalties a les comunitats.
Característiques
● Integral:Es detecten tres gens diana en una prova
● compatible:Adaptable a equips comuns amb canals CY5, FAM, VIC/HEX.
● Excel·lent rendiment:Alta sensibilitat i especificitat, LOD = 200 còpies/ml.
Paràmetre tècnic
| Especificació d'embalatge | 50 proves/kit, 100 proves/kit |
| Regió objectiu | ORF1ab, N, E |
| Mostra aplicable | Esput, hisop orofarínge |
| Límit de detecció | 200 còpies/ml |
| Taxa total de coincidències | 99,55% |
| Valor Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Taxa de coincidència positiva | 99,12% |
| Taxa de coincidència negativa | 100% |
| Condicions d'emmagatzematge i data de caducitat | Emmagatzemat a -20 ± 5 ℃ i és vàlid provisionalment durant 12 mesos. |
| Control intern | Sí |
| Número de catàleg | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificació | CE |
| Espècimens | Hisop nasofarínge, hisop orofaríngi, líquid de rentat alveolar, saliva i esputo |
| Instrument aplicable | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Sistema PCR en temps real |
Procediment de prova
1. Extracció d'àcids nucleics
L'operació s'ha de dur a terme segons el manual del kit d'extracció.
2. Preparació del sistema:
1) Traieu el reactiu i descongeleu-lo completament.Invertiu la mescla i centrifugueu immediatament.N reaccions de prova (N = nombre de mostres a provar + control positiu + control negatiu + 1) es preparen per als sistemes de reacció, respectivament, de la següent manera.
| Vomponentss | Volum per a 1 sistema de reacció | Volum per al sistema de reacció N |
| Mescla de solució de reacció d'amplificació d'àcids nucleics (A7793YF) | 18 µl | 18 µL * N |
| Mescla d'enzims | 2 µl | 2 µL * N |
| Volum total | 20 µl | 20 µL * N |
2) Distribució de la reacció: la solució de reacció es va barrejar i es va centrifugar, i cada tub es va dispensar en una quantitat de 20 μL en un tub de PCR adequat per a un aparell de PCR de fluorescència.
3. Càrrega
S'afegeixen 5 μL de l'àcid nucleic de la mostra extreta, l'àcid nucleic de control positiu i l'àcid nucleic de control negatiu als sistemes de reacció i el volum de reacció total és de 25 μL.Fixeu la coberta del tub i traslladeu-la a la zona de prova d'amplificació després d'uns segons de centrifugació.
4. Assaig d'amplificació per PCR
1) Col·loqueu el tub de reacció de PCR a l'instrument d'amplificació de PCR fluorescent per a la detecció de l'amplificació.
2) Configuració de paràmetres de cicle:
| Programa | Nombre de cicles | Temperatura | Temps de reacció | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 segons | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 segons | |
| 60℃ | 30 segons | Col·lecció de fluorescència | ||
3) Configuració de detecció:
Els canals de detecció es configuren a FAM, VIC, ROX i CY5, corresponents a ORF1ab, gen N i E Gene, control intern RNasa P, respectivament."Quencher Dye" i "Passive Reference" s'estableixen a "Cap" per a l'instrument ABI 7500.Establiu el control positiu, el control negatiu i la mostra (desconegut) en l'ordre en què corresponen les mostres i establiu el nom de la mostra a la columna "Nom de la mostra".
Per a X-POCH16, el funcionament i el programa són els següents:
1) Un cop finalitzada l'autoprova, obriu la tapa i poseu els tubs de reacció de PCR a les posicions designades a l'instrument.
2) Comenceu seleccionant "Exper".opció.Seleccioneu l'opció "Tots" o seleccioneu manualment l'àrea de reacció a la part esquerra de la pantalla.
3) Seleccioneu l'opció "CARREGAR";seleccionar el programa de prova;feu clic a "FET" i a "RUN".El programa triga 30 min 42 segons a completar-se.
Els canals de detecció del programa predeterminat s'estableixen a FAM, VIC, ROX i CY5, corresponents al control intern ORF1ab, N gen i E Gene, RNase P, respectivament.
Els paràmetres de cicle del programa per defecte són els següents:
| Programa | Nombre de | Temperatura | Temps de reacció |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 segons |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 seg |
| 60℃ | 13 segons | Fluorescència |
5. Configuració del llindar
D'acord amb la imatge analitzada, ajusteu el valor inicial, el valor final de la línia de base i el valor llindar (es recomana que el valor inicial i el valor final siguin 3 i 15, respectivament, i la corba d'amplificació del control negatiu s'ajusta perquè sigui plana o inferior a la línia de llindar), feu clic a Anàlisi per obtenir automàticament l'anàlisi del valor Ct de mostra.Consulteu els resultats a la interfície de l'informe.
6. Norma de control de qualitat
Cada control del kit ha de complir els requisits següents amb la corba "S", en cas contrari, l'experiment no és vàlid.
| Canals de detecció | Control negatiu | Control positiu |
| FAM(ORF1ab) | No Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | No Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | No Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | No Ct | Ct≤38 |
【Valor de tall】
Segons els resultats de 100 mostres de hisop orofarínge i 100 mostres d'esput, i amb el mètode de la corba ROC, el valor de tall del gen OFR1ab, N gens E d'aquest kit és Ct = 38
PMF
En aquest kit, els primers i les sondes de la tecnologia de PCR fluorescent en temps real estan dissenyats per a les regions conservades i específiques del gen ORF1ab, N i E de 2019-nCoV respectivament.Durant l'amplificació per PCR, la sonda s'uneix a la plantilla i el grup informador de l'extrem 5' de la sonda és escindit per l'enzim Taq (activitat exonucleasa 5'→3'), allunyant-se així del grup d'extinció per generar un senyal fluorescent. .La corba d'amplificació en temps real es representa automàticament en funció del senyal de fluorescència detectat i es calcula el valor Ct de la mostra.Els fluoròfors FAM, VIC i ROX estan marcats amb sondes del gen ORF1ab, del gen N i del gen E.Mitjançant una prova, es pot realitzar simultàniament la detecció qualitativa dels tres gens anteriors de 2019-nCoV.
El kit inclou un control intern dirigit al gen RNasa P per controlar la recollida, manipulació, extracció i procés de RT-PCR de mostres clíniques per evitar resultats falsos negatius.El control intern està etiquetat amb un grup fluorescent CY5.
1. Analitzar i interpretar els resultats de la prova quan l'instrument és normal i el control positiu, el control negatiu i el resultat de la prova de control intern compleixen l'estàndard de control de qualitat.
2. La corba d'amplificació de control intern (CY5) mostra una corba S típica i Ct ≤ 38, la interpretació dels resultats dels gens diana està sotmès a les condicions següents.
| Canals de detecció | Interpretació dels resultats dels gens diana | ||
| FMA | VIC (gen N) | ROX (gen E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Amb una corba d'amplificació S típica, el valor Ct és ≤38, el gen objectiu corresponent és positiu. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Amb una corba d'amplificació S típica, torneu a provar el gen objectiu corresponent de la mostra de nou. Si el valor Ct < 40 amb una corba d'amplificació S típica, el gen objectiu corresponent és positiu;si el valor Ct ≥40, el gen objectiu corresponent és negatiu |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | El gen objectiu corresponent és negatiu |
Interpretació dels resultats del 2019-nCoV:
Segons els resultats de l'ORF1ab, el gen N i el gen E, la interpretació és la següent:
1) Si DOS o TRES gens dels gens detectats són positius, el 2019-nCoV és positiu;
2) Si NOMÉS UN o CAP dels gens detectats és positiu, el 2019-nCoV és negatiu.
Nota: La corba d'amplificació de la mostra positiva hauria de ser amb una corba S típica.Tanmateix, si la concentració objectiu és massa alta, és possible que el control de l'estàndard intern no s'amplifi i la mostra es pot jutjar directament com a positiva.Si dos gens objectiu qualsevol obtenen Ct≤38, el 2019-nCoV és positiu.Si dos gens objectiu qualsevol obtenen Ct≥40, el 2019-nCoV és negatiu.Si Ct≥40, o no mostra cap valor, la interpretació dels resultats del gen objectiu és negatiu.
3. Si tots els valors de Ct dels canals FAM, VIC, ROX i Cy5 són superiors a 38 o no hi ha una corba d'amplificació S típica evident:
1) Hi ha/hi ha substàncies a la mostra que inhibeixen la reacció de PCR.Es recomana diluir la mostra per tornar-la a provar.
2) El procés d'extracció d'àcids nucleics és anormal, per la qual cosa es suggereix tornar-lo a extreure
àcid nucleic per tornar a provar.
3) Aquesta mostra NO era una mostra qualificada en el moment del mostreig, ni estava degradada
durant el transport i l'emmagatzematge.
Són 2 maneres de detectar aquestes situacions: NAAT i Antigen.
(Prové del CDC de Los Angeles)
