Detail di u produttu
L'Organizazione Mondiale di a Salute (OMS) guida chì i testi di diagnostichi rapidi di rilevazione di antigene (Ag-RDR) ponu offre un modu più veloce è menu caru per diagnosticà l'infezione attiva SARS-CoV-2 cà i testi di amplificazione di l'acidu nucleicu (NAAT), è l'OMS ricumanda ancu. chì l'Ag-RDT chì risponde à i requisiti minimi di prestazione pò esse aduprati per a rilevazione di casi primari, a traccia di cuntattu, durante l'investigazioni di u focu è per monitorà e tendenze di l'incidenza di e malatie in e cumunità.
Features
● Comprehensive:Trè geni di destinazione rilevanu in una prova
● cumpatibile:Adattabile à l'equipaggiu cumuni cù i canali CY5, FAM, VIC / HEX.
● Prestazione eccellente:Alta sensibilità è specificità, LOD = 200 copies/ml.
Parametru tecnicu
| Specifica di imballaggio | 50 teste/kit, 100 teste/kit |
| Regione di destinazione | ORF1ab, N, E |
| Campione Applicabile | Sputum, tampone orofaringeo |
| Limitu di Detezzione | 200 copie/ml |
| Tasso di Coincidenza Totale | 99,55% |
| Valeur Ct (CV, %) | ≤5,0% |
| Tasso di Coincidenza Positiva | 99,12% |
| Tasso di Coincidenza Negativa | 100% |
| Cundizioni di almacenamiento è data di scadenza | Conservatu à -20±5℃, è hè validu pruvisoriu per 12 mesi. |
| Cuntrollu internu | Iè |
| Numeru di catalogu | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificazione | CE |
| Specimens | Tampone nasofaringeo, tampone orofaringeo, liquido di lavaggio alveolare, saliva e sputo |
| Strumentu Applicabile | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Sistema PCR in tempu reale |
Prucedura di prova
1. Extraction d'acidu nucleicu
L'operazione deve esse realizatu secondu u manuale di u kit di estrazione.
2. Preparazione di u Sistema:
1) Caccià u reattivu è scongelu u reattivu cumpletamente.Invertite a mistura è centrifuga immediatamente.N reazzioni di teste (N = nùmeru di campioni per esse pruvatu + cuntrollu pusitivu + cuntrollu negativu + 1) sò preparati per i sistemi di reazzione, rispettivamente, cum'è seguita.
| Vomponenti | Volume per 1 sistema di reazione | Volume per sistema di reazione N |
| Soluzione di reazione di amplificazione di l'acidu nucleicu Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Mistura di enzimi | 2 µL | 2 µL * N |
| Volume tutale | 20 µL | 20 µL * N |
2) Distribuzione di a reazione: A suluzione di reazione hè stata mischjata è centrifugata, è ogni tubu hè statu dispensatu in una quantità di 20μL in un tubu PCR adattatu per un apparatu PCR di fluorescenza.
3. Carica
5μL di l'acidu nucleicu di mostra extracted, l'acidu nucleicu di cuntrollu pusitivu è l'acidu nucleicu di cuntrollu negativu sò aghjuntu à i sistemi di reazione, è u voluminu di reazione tutale hè 25μL.Fissate a tappa di u tubu è trasladallu à l'area di prova di amplificazione dopu uni pochi seconde di centrifugazione.
4. Assai di amplificazione PCR
1) Mettite u tubu di reazione PCR in u strumentu di amplificazione PCR fluorescente per a rilevazione di amplificazione.
2) Impostazione di i paràmetri di u ciclu:
| prugramma | Numero di ciculi | Temperature | Tempu di reazione | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sec | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sec | |
| 60 ℃ | 30 sec | Collezione di fluorescenza | ||
3) Impostazioni di rilevazione:
I canali di rilevazione sò stabiliti à FAM, VIC ,ROX è CY5, currispundenti à ORF1ab, gene N, è E Gene, RNase P cuntrollu internu, rispettivamente."Quencher Dye" è "Passive Reference" sò impostati à "None" per l'instrumentu ABI 7500.Pone u Cuntrolu Positivu, u Cuntrolu Negativu è u Sample (Unknown) in l'ordine in quale i campioni currispondenu, è stabilisce u nome di mostra in a colonna "Sample Name".
Per X-POCH16, l'operazione è u prugramma sò i seguenti:
1) Dopu chì l'autotest hè cumpletu, apre u coperchiu è mette i tubi di reazione PCR in i posti designati in u strumentu.
2) Start da sceglie u "Exper".opzione.Selezziunate l'opzione "Tutti" o selezziunate manualmente l'area di reazione à u latu manca di u screnu.
3) Selezziunà l'opzione "LOAD";selezziunà u prugramma di prova;cliccate "FATTU" è "RUN".U prugramma dura 30min42s per compie.
I canali di deteczione di u prugramma Default sò stabiliti à FAM, VIC, ROX è CY5, currispundenti à ORF1ab, N gene, è E Gene, RNase P cuntrollu internu, rispettivamente.
I paràmetri di u ciclu di u prugramma Default sò i seguenti:
| prugramma | Numaru di | Temperature | Tempu di reazione |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sec |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 sec |
| 60 ℃ | 13 sec | Fluorescenza |
5. Setting Threshold
Sicondu l'imaghjini analizati, aghjustate u valore iniziale, u valore finale di a linea di base è u valore di soglia (u valore iniziale è u valore finale hè cunsigliatu per esse 3 è 15 rispettivamente, è a curva di amplificazione di u cuntrollu negativu hè adattatu per esse flat o ). più bassu cà u threshold Line), cliccate Analysis pè ottene automaticamente l 'analisi u valore Ct campionu.Vede i risultati in l'interfaccia di Rapportu.
6. Standard di cuntrollu di qualità
Ogni cuntrollu di u kit deve risponde à i seguenti requisiti cù a curva "S", altrimenti l'esperimentu ùn hè micca validu.
| Canali di rilevazione | U cuntrollu negativu | U cuntrollu pusitivu |
| FAM (ORF1ab) | No Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | No Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | No Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | No Ct | Ct≤38 |
【Valore di cut-off】
Sicondu i risultati di 100 campioni di tamponi orofaringeali è 100 campioni di sputum, è cù u metudu di curva ROC, u valore Cut-off di l'OFR1ab, N genes E Gene di stu kit sò Ct = 38
FAQ
In questu kit, i primeri è e sonde di a tecnulugia PCR fluorescente in tempu reale sò pensati à e regioni cunservate è specifiche di u gene ORF1ab, N è E di 2019-nCoV rispettivamente.Durante l'amplificazione di PCR, a sonda si lega à u mudellu, è u gruppu di reporter 5'-end di a sonda hè scindatu da l'enzima Taq (attività exonuclease 5'→3'), alluntanendu cusì da u gruppu di quenching per generà un signalu fluorescente. .A curva di amplificazione in tempu reale hè tracciata automaticamente basatu annantu à u signale di fluoriscenza rilevatu, è u valore Ct di mostra hè calculatu.I fluorofori FAM, VIC è ROX sò marcati à u genu ORF1ab, u gene N è e sonde di gene E.Utilizendu una prova, a rilevazione qualitativa di i trè geni sopra di 2019-nCoV pò esse realizatu simultaneamente.
U kit hè furnitu cù un cuntrollu internu destinatu à u genu RNase P per monitorizà a raccolta di campioni clinichi, a manipulazione, l'estrazione è u prucessu RT-PCR per evità risultati falsi negativi.U cuntrollu internu hè marcatu cù un gruppu fluorescente CY5.
1. Analizà è interpretà i risultati di a prova quandu l'instrumentu hè normale, è u cuntrollu pusitivu, u cuntrollu negativu è u risultatu di a prova di cuntrollu internu risponde à u standard di cuntrollu di qualità.
2. A curva di amplificazione di u cuntrollu internu (CY5) mostra una curva S tipica è Ct ≤ 38, l'interpretazione di i risultati di i geni di destinazione hè sottumessu à e seguenti cundizioni.
| Canali di rilevazione | Interpretazione di i risultati di i geni target | ||
| FMA | VIC (genu N) | ROX (Gene E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Cù una curva di amplificazione S tipica, u valore Ct hè ≤38, u gene di destinazione currispundente hè pusitivu. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Cù una curva di amplificazione S tipica, prova di novu u gene di destinazione currispundente di a mostra. Se u valore Ct＜ 40 cù una curva di amplificazione S tipica, u genu di destinazione currispundente hè pusitivu;se u valore Ct≥40, u genu di destinazione currispundente hè negativu |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | U gene target currispundente hè negativu |
Interpretazione di i risultati per 2019-nCoV:
Sicondu i risultati di l'ORF1ab, u gene N è u genu E, l'interpretazione hè cusì:
1) Se DUE o TRÈ geni di i geni rilevati sò pusitivi, u 2019-nCoV hè pusitivu;
2) Se SOLO UNU o NESSUN di i geni rilevati hè pusitivu, u 2019-nCoV hè negativu.
Nota: A curva di amplificazione di a mostra positiva deve esse cù una curva S tipica.In ogni casu, se a cuncentrazione di destinazione hè troppu alta, u cuntrollu standard internu ùn pò micca esse amplificatu è a mostra pò esse ghjudicata direttamente cum'è pusitiva.Sì dui di i geni di destinazione ricevenu Ct≤38, u 2019-nCoV hè pusitivu.Sì dui di i geni di destinazione ricevenu Ct≥40, u 2019-nCoV hè negativu.Se Ct≥40, o ùn mostra micca valore, l'interpretazione di i risultati di u gene target hè negativu.
3. Se tutti i valori Ct di i canali FAM, VIC, ROX è Cy5 sò più di 38 o ùn ci hè micca una curva di amplificazione tipica S evidente:
1) Ci hè / sò sustanzi in u campione chì impediscenu a reazione PCR.Hè ricumandemu di dilute a mostra per esse ripruvata.
2) U prucessu di l'estrazione di l'acidu nucleicu hè anormale, per quessa, hè suggeritu di ritruvà
l'acidu nucleicu per a prova di novu.
3) Questa mostra ùn era micca una mostra qualificata à u mumentu di u campionamentu, o degradata
durante u trasportu è u almacenamentu.
Sò 2 modi chì pudemu detectà sta situazione: NAAT è Antigen.
(Vene da CDC di Los Angeles)
