Detail produktu
Světová zdravotnická organizace (WHO) uvádí, že rychlé diagnostické testy detekující antigen (Ag-RDR) mohou nabídnout rychlejší a levnější způsob diagnostiky aktivní infekce SARS-CoV-2 než testy amplifikace nukleových kyselin (NAATs), a WHO také doporučuje že Ag-RDT splňující minimální požadavky na výkon lze použít pro primární detekci případů, sledování kontaktů, během vyšetřování ohnisek a ke sledování trendů výskytu onemocnění v komunitách.
Funkce
● Komplexní:V jednom testu jsou detekovány tři cílové geny
● kompatibilní:Adaptivní pro běžné zařízení s kanály CY5, FAM, VIC/HEX.
● Vynikající výkon:Vysoká citlivost a specificita, LOD = 200 kopií/ml.
Technický parametr
| Specifikace balení | 50 testů/sada, 100 testů/sada |
| Cílová oblast | ORF1ab, N, E |
| Použitelný vzorek | Sputum, orofaryngeální výtěr |
| Limit detekce | 200 kopií/ml |
| Celková míra náhodnosti | 99,55 % |
| Hodnota Ct (CV, %) | ≤ 5,0 % |
| Pozitivní míra náhody | 99,12 % |
| Negativní míra náhodnosti | 100% |
| Podmínky skladování a datum expirace | Skladováno při -20±5℃ a je prozatímně platné 12 měsíců. |
| Interní kontrola | Ano |
| Katalogové číslo | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Osvědčení | CE |
| Vzorky | Výtěr z nosohltanu, orofaryngeální výtěr, tekutina z alveolární laváže, sliny a sputum |
| Použitelný nástroj | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR System |
Testovací postup
1. Extrakce nukleové kyseliny
Obsluha by měla být provedena podle návodu k extrakční sadě.
2. Příprava systému:
1) Vyjměte činidlo a úplně jej rozmrazte.Směs obraťte a ihned odstřeďte.N testovacích reakcí (N = počet vzorků k testování + pozitivní kontrola + negativní kontrola + 1) se připraví pro reakční systémy následovně.
| Vomponentss | Objem pro 1 reakční systém | Objem pro N reakční systém |
| Směs reakčního roztoku pro amplifikaci nukleové kyseliny (A7793YF) | 18 ul | 18 ul * N |
| Směs enzymů | 2 ul | 2 µL * N |
| Celkový objem | 20 ul | 20 ul * N |
2) Distribuce reakce: Reakční roztok byl promíchán a odstředěn a každá zkumavka byla rozdělena v množství 20 μl do PCR zkumavky vhodné pro fluorescenční PCR přístroj.
3. Načítání
Do reakčních systémů se přidá 5 μl extrahované nukleové kyseliny vzorku, nukleové kyseliny pro pozitivní kontrolu a nukleové kyseliny pro negativní kontrolu a celkový reakční objem je 25 μl.Upevněte kryt zkumavky a po několika sekundách centrifugace jej přesuňte do oblasti amplifikačního testu.
4. PCR amplifikační test
1) Vložte zkumavku s PCR reakcí do fluorescenčního amplifikačního přístroje pro amplifikaci.
2) Nastavení parametrů cyklu:
| Program | Počet cyklů | Teplota | Reakční čas | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sec | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sec | |
| 60℃ | 30 sec | Kolekce fluorescence | ||
3) Nastavení detekce:
Detekční kanály jsou nastaveny na FAM, VIC, ROX a CY5, odpovídající ORF1ab, genu N a genu E, vnitřní kontrole RNázy P, v daném pořadí."Quencher Dye" a "Passive Reference" jsou pro přístroj ABI 7500 nastaveny na "None".Nastavte Positive Control, Negative Control a Sample (Unknown) v pořadí, ve kterém si vzorky odpovídají, a ve sloupci „Sample Name“ nastavte název vzorku.
Pro X-POCH16 jsou operace a program následující:
1) Po dokončení autotestu otevřete víko a vložte reakční zkumavky PCR do určených pozic v přístroji.
2) Začněte výběrem „Exper“.volba.Vyberte možnost "Vše" nebo ručně vyberte reakční oblast na levé straně obrazovky.
3) Vyberte možnost „NAČÍST“;vyberte testovací program;klikněte na „HOTOVO“ a na „Spustit“.Dokončení programu trvá 30 minut 42 s.
Detekční kanály výchozího programu jsou nastaveny na FAM, VIC, ROX a CY5, odpovídající ORF1ab, genu N a genu E, vnitřní kontrole RNázy P, v daném pořadí.
Parametry cyklu výchozího programu jsou následující:
| Program | Počet | Teplota | Reakční čas |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sekund |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 sekundy |
| 60℃ | 13 sekund | Fluorescence |
5. Nastavení prahu
Podle analyzovaného snímku upravte počáteční hodnotu, koncovou hodnotu základní linie a prahovou hodnotu (doporučuje se nastavit počáteční hodnotu na 3 a koncovou hodnotu 15 a křivka zesílení negativní kontroly je upravena tak, aby byla plochá resp. nižší než prahová čára), klikněte na Analýza pro automatické získání hodnoty Ct vzorku pro analýzu.Zobrazit výsledky v rozhraní sestav.
6. Standard kontroly kvality
Každá kontrola soupravy musí splňovat následující požadavky s křivkou „S“, jinak je experiment neplatný.
| Detekční kanály | Negativní kontrola | Pozitivní kontrola |
| FAM(ORF1ab) | Ne Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ne Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ne Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ne Ct | Ct≤38 |
【Mezní hodnota】
Podle výsledků 100 vzorků orofaryngeálních výtěrů a 100 vzorků sputa a pomocí metody ROC křivky jsou hodnoty cut-off genů E OFR1ab, N této soupravy Ct = 38
FAQ
V této sadě jsou primery a sondy technologie fluorescenční PCR v reálném čase navrženy pro konzervované a specifické oblasti genu ORF1ab, N a E 2019-nCoV.Během PCR amplifikace se sonda naváže na templát a reportérová skupina na 5' konci sondy je odštěpena enzymem Taq (5'→3' exonukleázová aktivita), čímž se odkloní od zhášecí skupiny a vytvoří fluorescenční signál .Amplifikační křivka v reálném čase se automaticky vynese na základě detekovaného fluorescenčního signálu a vypočítá se hodnota Ct vzorku.Fluorofory FAM, VIC a ROX jsou značeny sondami genu ORF1ab, genu N a genu E.Pomocí jednoho testu lze současně provést kvalitativní detekci výše uvedených tří genů 2019-nCoV.
Souprava je vybavena vnitřní kontrolou cílenou na gen RNázy P pro monitorování odběru klinických vzorků, manipulace s nimi, extrakce a procesu RT-PCR, aby se zabránilo falešně negativním výsledkům.Vnitřní kontrola je označena fluorescenční skupinou CY5.
1. Analyzujte a interpretujte výsledky testu, když je přístroj normální a pozitivní kontrola, negativní kontrola a výsledek testu vnitřní kontroly splňují standard kontroly kvality.
2. Amplifikační křivka vnitřní kontroly (CY5) ukazuje typickou S křivku a Ct ≤ 38, interpretace výsledků cílových genů je podrobena následujícím podmínkám.
| Detekční kanály | Interpretace výsledků cílových genů | ||
| FMA | VIC (N gen) | ROX (gen E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | S typickou S amplifikační křivkou je hodnota Ct ≤ 38, odpovídající cílový gen je pozitivní. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | S typickou S amplifikační křivkou znovu otestujte odpovídající cílový gen vzorku. Pokud je hodnota Ct < 40 s typickou křivkou amplifikace S, je odpovídající cílový gen pozitivní;pokud je hodnota Ct≥40, odpovídající cílový gen je negativní |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Odpovídající cílový gen je negativní |
Interpretace výsledků za rok 2019-nCoV:
Podle výsledků ORF1ab, genu N a genu E interpretace takto:
1) Pokud jsou DVA nebo TŘI geny detekovaných genů pozitivní, 2019-nCoV je pozitivní;
2) Pokud je POUZE JEDEN nebo ŽÁDNÝ z detekovaných genů pozitivní, 2019-nCoV je negativní.
Poznámka: Amplifikační křivka pozitivního vzorku by měla mít typickou S křivku.Pokud je však cílová koncentrace příliš vysoká, kontrola vnitřního standardu nemusí být amplifikována a vzorek může být přímo posouzen jako pozitivní.Pokud kterékoli dva z cílových genů dostanou Ct≤38, 2019-nCoV je pozitivní.Pokud kterékoli dva z cílových genů dostanou Ct≥40, 2019-nCoV je negativní.Pokud Ct≥40 nebo nevykazují žádnou hodnotu, je interpretace výsledků cílového genu negativní.
3. Pokud jsou všechny hodnoty Ct kanálů FAM, VIC, ROX a Cy5 větší než 38 nebo neexistuje žádná zřejmá typická křivka zesílení S:
1) Ve vzorku je/jsou látky, které inhibují PCR reakci.Pro opětovné testování se doporučuje vzorek naředit.
2) Proces extrakce nukleové kyseliny je abnormální, proto se doporučuje reextrahovat
nukleové kyseliny pro opětovné testování.
3) Tento vzorek NEBYL v době odběru kvalifikovaným vzorkem nebo byl degradován
při přepravě a skladování.
Jsou to 2 způsoby, jak můžeme detekovat tyto situace: NAAT a Antigen.
(Pochází z CDC z Los Angeles)
