Produktdetaljer
Verdenssundhedsorganisationen (WHO) vejleder om, at antigen-detekterende hurtige diagnostiske test (Ag-RDR'er) kan tilbyde en hurtigere og billigere måde at diagnosticere aktiv SARS-CoV-2-infektion på end nukleinsyreamplifikationstest (NAAT'er), og WHO anbefaler også at Ag-RDT'er, der opfylder minimumskrav til ydeevne, kan bruges til primær sagsopsporing, kontaktsporing, under udbrudsundersøgelser og til at overvåge tendenser for sygdomsforekomst i samfund.
Funktioner
● Omfattende:Tre målgen detekterer i én test
● kompatibel:Adaptiv til almindeligt udstyr med CY5, FAM, VIC/HEX kanaler.
● Fremragende ydeevne:Høj sensitivitet og specificitet, LOD = 200 kopier/ml.
Teknisk parameter
| Pakningsspecifikation | 50 tests/sæt, 100 tests/sæt |
| Målregion | ORF1ab, N, E |
| Gældende prøve | Sputum, Orofaryngeal podning |
| Detektionsgrænse | 200 eksemplarer/ml |
| Samlet tilfældighedsrate | 99,55 % |
| Ct-værdi (CV,%) | ≤5,0 % |
| Positiv tilfældighedsrate | 99,12 % |
| Negativ tilfældighedsrate | 100 % |
| Opbevaringsbetingelser og udløbsdato | Opbevares ved -20±5℃ og er foreløbigt gyldig i 12 måneder. |
| Intern kontrol | Ja |
| Katalognummer | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificering | CE |
| Prøver | Nasopharyngeal podning, Oropharyngeal podning, Alveolær skyllevæske, spyt og opspyt |
| Gældende instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR System |
Test procedure
1. Nukleinsyreekstraktion
Betjening skal udføres i henhold til manualen til ekstraktionssættet.
2. Systemforberedelse:
1) Tag reagenset ud og optø reagenset fuldstændigt.Vend blandingen og centrifuger straks.N testreaktioner (N = antal prøver, der skal testes + positiv kontrol + negativ kontrol + 1) fremstilles for reaktionssystemer henholdsvis som følger.
| Komponenter | Volumen for 1 reaktionssystem | Volumen for N-reaktionssystem |
| Nukleinsyreamplifikationsreaktionsopløsning Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Enzymblanding | 2 µL | 2 µL * N |
| Samlet volumen | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reaktionsfordeling: Reaktionsopløsningen blev blandet og centrifugeret, og hvert rør blev dispenseret i en mængde på 20μL i et PCR-rør egnet til et fluorescens-PCR-apparat.
3. Indlæsning
5μL af den ekstraherede prøvenukleinsyre, positiv kontrolnukleinsyre og negativ kontrolnukleinsyre tilsættes til reaktionssystemerne, og det samlede reaktionsvolumen er 25μL.Fastgør rørdækslet og flyt det til amplifikationstestområdet efter et par sekunders centrifugering.
4. PCR-amplifikationsassay
1) Sæt PCR-reaktionsrøret i det fluorescerende PCR-amplifikationsinstrument til amplifikationsdetektion.
2) Cyklus parameterindstilling:
| Program | Antal cyklusser | Temperatur | Reaktionstid | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sek | |
| 60℃ | 30 sek | Fluorescens samling | ||
3) Registreringsindstillinger:
Detektionskanalerne er indstillet til FAM, VIC,ROX og CY5, svarende til henholdsvis ORF1ab, N-gen og E-gen, RNase P intern kontrol."Quencher Dye" og "Passive Reference" er indstillet til "None" for ABI 7500-instrumentet.Indstil positiv kontrol, negativ kontrol og prøve (ukendt) i den rækkefølge, som prøverne svarer til, og indstil prøvenavnet i kolonnen "Prøvenavn".
For X-POCH16 er betjeningen og programmet som følger:
1) Når selvtesten er fuldført, åbnes låget og PCR-reaktionsrørene placeres i de angivne positioner i instrumentet.
2) Start med at vælge "Exper."mulighed.Vælg indstillingen "Alle", eller vælg manuelt reaktionsområdet i venstre side af skærmen.
3) Vælg "LOAD" mulighed;vælg testprogrammet;klik på "DONE" og "RUN".Programmet tager 30min42s at gennemføre.
Detektionskanalerne for standardprogrammet er indstillet til FAM, VIC, ROX og CY5, svarende til henholdsvis ORF1ab, N-gen og E-gen, RNase P intern kontrol.
Cyklusparameteren for standardprogrammet er som følger:
| Program | Antallet af | Temperatur | Reaktionstid |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 sek |
| 60℃ | 13 sek | Fluorescens |
5. Indstilling af tærskelværdi
I henhold til det analyserede billede skal du justere startværdien, slutværdien for baseline og tærskelværdien (startværdi og slutværdi anbefales at indstilles til henholdsvis 3 og 15, og forstærkningskurven for den negative kontrol justeres til at være flad eller lavere end tærskellinjen), klik på Analysis for automatisk at få analysen til prøvens Ct-værdi.Se resultaterne i rapportgrænsefladen.
6. Kvalitetskontrolstandard
Hver kontrol af sættet skal opfylde følgende krav med 'S'-kurve, ellers er eksperimentet ugyldigt.
| Detektionskanaler | Negativ kontrol | Positiv kontrol |
| FAM(ORF1ab) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ingen Ct | Ct≤38 |
【Skæringsværdi】
Ifølge resultaterne af 100 orofaryngeale podningsprøver og 100 sputumprøver og med ROC-kurvemetoden er cut-off-værdien for OFR1ab, N gener E-genet i dette kit Ct = 38
FAQ
I dette kit er primere og prober af real-time fluorescerende PCR-teknologi designet til de bevarede og specifikke regioner af ORF1ab, N og E genet af henholdsvis 2019-nCoV.Under PCR-amplifikation binder proben til skabelonen, og probens 5'-endereportergruppe spaltes af Taq-enzymet (5'→3' exonukleaseaktivitet) og bevæger sig derved væk fra quenching-gruppen for at generere et fluorescerende signal .Realtidsamplifikationskurven plottes automatisk baseret på det detekterede fluorescenssignal, og prøvens Ct-værdi beregnes.FAM-, VIC- og ROX-fluoroforer er mærket til ORF1ab-gen-, N-gen- og E-genprober.Ved at bruge én test kan kvalitativ påvisning af de ovennævnte tre gener af 2019-nCoV udføres samtidigt.
Sættet er forsynet med en intern kontrol rettet mod RNase P-genet til at overvåge klinisk prøveindsamling, håndtering, ekstraktion og RT-PCR-proces for at undgå falsk-negative resultater.Den interne kontrol er mærket med en CY5 fluorescerende gruppe.
1. Analyser og fortolk testresultater, når instrumentet er normalt, og den positive kontrol, den negative kontrol og det interne kontroltestresultat opfylder kvalitetskontrolstandarden.
2. Amplifikationskurven for intern kontrol (CY5) viser en typisk S-kurve og Ct ≤ 38, fortolkning resultaterne af målgener er udsat for følgende betingelser.
| Detektionskanaler | Fortolkning af resultaterne af målgener | ||
| FMA | VIC (N-gen) | ROX (E-gen) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Med en typisk S-amplifikationskurve er Ct-værdien ≤38, det tilsvarende målgen er positivt. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Med en typisk S-amplifikationskurve, test prøvens tilsvarende målgen igen. Hvis Ct-værdien ＜ 40 med en typisk S-amplifikationskurve, er det tilsvarende målgen positivt;hvis Ct-værdien ≥40, er det tilsvarende målgen negativt |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Det tilsvarende målgen er negativt |
Fortolkning af resultater for 2019-nCoV:
Ifølge resultaterne af ORF1ab, N-gen og E-gen, fortolkning som følger:
1) Hvis TO eller TRE gener af de påviste gener er positive, er 2019-nCoV positiv;
2) Hvis KUN ET eller INGEN af de påviste gener er positive, er 2019-nCoV negativ.
Bemærk: Amplifikationskurven for den positive prøve skal være med en typisk S-kurve.Men hvis målkoncentrationen er for høj, kan den interne standardkontrol muligvis ikke amplificeres, og prøven kan direkte bedømmes som positiv.Hvis to af målgener får Ct≤38, er 2019-nCoV positiv.Hvis to af målgener får Ct≥40, er 2019-nCoV negativ.Hvis Ct≥40, eller viser ingen værdi, fortolkning resultaterne af målgenet er negative.
3. Hvis alle Ct-værdierne for FAM-, VIC-, ROX- og Cy5-kanaler er mere end 38, eller der ikke er nogen tydelig typisk S-amplifikationskurve:
1) Der er stoffer i prøven, som hæmmer PCR-reaktionen.Det anbefales at fortynde prøven til gentestning.
2) Processen med nukleinsyreekstraktion er unormal, så det foreslås at ekstrahere igen
nukleinsyre til gentest.
3) Denne prøve var IKKE en kvalificeret prøve på prøveudtagningstidspunktet eller nedbrudt
under transport og opbevaring.
De er 2 måder, vi kan opdage denne situation på: NAAT og antigen.
(Kommer fra CDC i Los Angeles)
