Detalle del producto
La Organización Mundial de la Salud (OMS) indica que las pruebas de diagnóstico rápido de detección de antígenos (Ag-RDR) pueden ofrecer una forma más rápida y menos costosa de diagnosticar la infección activa por SARS-CoV-2 que las pruebas de amplificación de ácido nucleico (NAAT), y la OMS también recomienda que las Ag-RDT que cumplan con los requisitos mínimos de rendimiento se pueden usar para la detección primaria de casos, el rastreo de contactos, durante las investigaciones de brotes y para monitorear las tendencias de incidencia de enfermedades en las comunidades.
Características
● Integral:Tres genes diana detectan en una prueba
● compatibles:Adaptable a equipos comunes con canales CY5, FAM, VIC/HEX.
● Excelente rendimiento:Alta sensibilidad y especificidad, LOD = 200 copias/ml.
Parámetro técnico
| Especificación de embalaje | 50 pruebas/kit, 100 pruebas/kit |
| Región objetivo | ORF1ab, N, E |
| Muestra aplicable | Esputo, frotis orofaríngeo |
| Límite de detección | 200 copias/ml |
| Tasa de coincidencia total | 99,55% |
| Valor Ct (CV,%) | ≤5.0% |
| Tasa de coincidencia positiva | 99,12% |
| Tasa de coincidencia negativa | 100% |
| Condiciones de almacenamiento y fecha de caducidad | Almacenado a -20±5℃, y es válido provisionalmente por 12 meses. |
| Control interno | Sí |
| Número de catalogo | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificación | CE |
| especímenes | Hisopo nasofaríngeo, hisopo orofaríngeo, líquido de lavado alveolar, saliva y esputo |
| Instrumento aplicable | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Sistema de PCR en tiempo real |
Procedimiento de prueba
1. Extracción de ácido nucleico
La operación debe realizarse de acuerdo con el manual del kit de extracción.
2. Preparación del sistema:
1) Saque el reactivo y descongélelo por completo.Invertir la mezcla y centrifugar inmediatamente.Se preparan N reacciones de prueba (N = número de muestras a analizar + control positivo + control negativo + 1) para los sistemas de reacción, respectivamente, de la siguiente manera.
| componentes | Volumen para 1 sistema de reacción | Volumen para el sistema de reacción de N |
| Mezcla de solución de reacción de amplificación de ácido nucleico (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Mezcla de enzimas | 2 µL | 2 µL * N |
| Volumen total | 20 µL | 20 µL * N |
2) Distribución de la reacción: la solución de reacción se mezcló y centrifugó, y cada tubo se dispensó en una cantidad de 20 μL en un tubo de PCR adecuado para un aparato de PCR de fluorescencia.
3. Cargando
Se agregan 5 μL del ácido nucleico de muestra extraído, el ácido nucleico de control positivo y el ácido nucleico de control negativo a los sistemas de reacción, y el volumen total de reacción es de 25 μL.Fije la tapa del tubo y muévalo al área de prueba de amplificación después de unos segundos de centrifugado.
4. Ensayo de amplificación por PCR
1) Coloque el tubo de reacción de PCR en el instrumento de amplificación de PCR fluorescente para la detección de amplificación.
2) Configuración de parámetros de ciclo:
| Programa | Número de ciclos | Temperatura | Tiempo de reacción | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 minutos | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 segundos | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 seg | |
| 60℃ | 30 segundos | Colección de fluorescencia | ||
3) Configuración de detección:
Los canales de detección se establecen en FAM, VIC, ROX y CY5, correspondientes a ORF1ab, gen N y gen E, control interno de RNasa P, respectivamente."Quencher Dye" y "Passive Reference" están configurados en "Ninguno" para el instrumento ABI 7500.Configure el control positivo, el control negativo y la muestra (desconocida) en el orden en que correspondan las muestras y configure el nombre de la muestra en la columna "Nombre de la muestra".
Para X-POCH16, la operación y el programa son los siguientes:
1) Una vez completada la autocomprobación, abra la tapa y coloque los tubos de reacción de PCR en las posiciones designadas en el instrumento.
2) Comience seleccionando el "Experto".opción.Seleccione la opción "Todos" o seleccione manualmente el área de reacción en el lado izquierdo de la pantalla.
3) Seleccione la opción "CARGAR";seleccione el programa de prueba;haga clic en "HECHO" y "EJECUTAR".El programa tarda 30min42s en completarse.
Los canales de detección del programa predeterminado se establecen en FAM, VIC, ROX y CY5, correspondientes a ORF1ab, gen N y gen E, control interno de RNasa P, respectivamente.
Los parámetros de ciclo del programa predeterminado son los siguientes:
| Programa | Número de | Temperatura | Tiempo de reacción |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 minutos |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 segundos |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 segundos |
| 60℃ | 13 seg | Fluorescencia |
5. Configuración del umbral
De acuerdo con la imagen analizada, ajuste el valor de inicio, el valor final de la línea de base y el valor de umbral (se recomienda establecer el valor de inicio y el valor final en 3 y 15 respectivamente, y la curva de amplificación del control negativo se ajusta para que sea plana o plana). inferior a la línea de umbral), haga clic en Análisis para obtener automáticamente el análisis del valor Ct de la muestra.Vea los resultados en la interfaz de Informe.
6. Estándar de control de calidad
Cada control del kit debe cumplir con los siguientes requisitos con la curva 'S', de lo contrario, el experimento no es válido.
| Canales de detección | Control negativo | Control positivo |
| FAM(ORF1ab) | sin CT | Ct≤38 |
| VIC(N) | sin CT | Ct≤38 |
| ROX(ES) | sin CT | Ct≤38 |
| CY5(PR) | sin CT | Ct≤38 |
【Descuento del valor】
De acuerdo con los resultados de 100 muestras de hisopos orofaríngeos y 100 muestras de esputo, y con el método de la curva ROC, el valor de corte de OFR1ab, N genes E Gene de este kit es Ct = 38
Preguntas más frecuentes
En este kit, se diseñan cebadores y sondas de tecnología de PCR fluorescente en tiempo real para las regiones conservadas y específicas del gen ORF1ab, N y E de 2019-nCoV respectivamente.Durante la amplificación por PCR, la sonda se une a la plantilla y la enzima Taq escinde el grupo indicador del extremo 5' de la sonda (actividad de exonucleasa 5'→3'), alejándose así del grupo de extinción para generar una señal fluorescente. .La curva de amplificación en tiempo real se traza automáticamente en función de la señal de fluorescencia detectada y se calcula el valor Ct de la muestra.Los fluoróforos FAM, VIC y ROX están marcados en las sondas del gen ORF1ab, el gen N y el gen E.Mediante el uso de una prueba, la detección cualitativa de los tres genes anteriores de 2019-nCoV se puede realizar simultáneamente.
El kit se proporciona con un control interno dirigido al gen RNase P para monitorear la recolección, manejo, extracción y proceso de RT-PCR de muestras clínicas para evitar resultados falsos negativos.El control interno está marcado con un grupo fluorescente CY5.
1. Analice e interprete los resultados de la prueba cuando el instrumento es normal y el control positivo, el control negativo y el resultado de la prueba de control interno cumplen con el estándar de control de calidad.
2. La curva de amplificación del control interno (CY5) muestra una curva S típica y Ct ≤ 38, la interpretación de los resultados de los genes diana está sujeta a las siguientes condiciones.
| Canales de detección | Interpretación de los resultados de los genes diana | ||
| FMA | VIC (gen N) | ROX (gen E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Con una curva de amplificación S típica, el valor de Ct es≤38, el gen diana correspondiente es positivo. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Con una curva de amplificación S típica, vuelva a probar el gen objetivo correspondiente de la muestra nuevamente. Si el valor de Ct < 40 con una curva de amplificación S típica, el gen diana correspondiente es positivo;si el valor de Ct≥40, el gen diana correspondiente es negativo |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | El gen diana correspondiente es negativo. |
Interpretación de resultados para 2019-nCoV:
De acuerdo con los resultados de ORF1ab, gen N y gen E, interpretación de la siguiente manera:
1) Si DOS o TRES genes de los genes detectados son positivos, el 2019-nCoV es positivo;
2) Si SÓLO UNO o NINGUNO de los genes detectados es positivo, el 2019-nCoV es negativo.
Nota: La curva de amplificación de la muestra positiva debe ser con una curva S típica.Sin embargo, si la concentración objetivo es demasiado alta, es posible que el control estándar interno no se amplifique y que la muestra se considere directamente positiva.Si dos de los genes objetivo obtienen Ct≤38, el 2019-nCoV es positivo.Si dos de los genes objetivo obtienen Ct≥40, el 2019-nCoV es negativo.Si Ct≥40, o no muestra ningún valor, la interpretación de los resultados del gen objetivo es negativa.
3. Si todos los valores de Ct de los canales FAM, VIC, ROX y Cy5 son superiores a 38 o no hay una curva de amplificación S típica obvia:
1) Hay sustancia(s) en la muestra que inhiben la reacción de PCR.Se recomienda diluir la muestra para volver a analizarla.
2) El proceso de extracción de ácido nucleico es anormal, por lo que se sugiere volver a extraer
ácido nucleico para volver a realizar la prueba.
3) Esta muestra NO era una muestra calificada en el momento del muestreo o degradada
durante el transporte y almacenamiento.
Hay 2 formas en que podemos detectar estas situaciones: NAAT y Antigen.
(Viene de CDC de Los Ángeles)
