Toote üksikasjad
Maailma Terviseorganisatsioon (WHO) juhib tähelepanu sellele, et antigeeni tuvastavad kiirdiagnostika testid (Ag-RDR) võivad pakkuda kiiremat ja odavamat võimalust aktiivse SARS-CoV-2 nakkuse diagnoosimiseks kui nukleiinhappe amplifikatsioonitestid (NAAT) ning WHO soovitab ka et minimaalsetele jõudlusnõuetele vastavaid Ag-RDT-sid saab kasutada esmaseks juhtumite tuvastamiseks, kontaktide jälgimiseks, haiguspuhangu uurimise ajal ja haiguste esinemissageduse suundumuste jälgimiseks kogukondades.
Funktsioonid
● Põhjalik:Ühe testiga tuvastatakse kolm sihtgeeni
● ühilduv:Kohandub tavaliste CY5, FAM, VIC/HEX kanalitega seadmetega.
● Suurepärane jõudlus:Kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus, LOD = 200 koopiat/ml.
Tehniline parameeter
| Pakendi spetsifikatsioon | 50 testi/komplekt, 100 testi/komplekt |
| Sihtpiirkond | ORF1ab, N, E |
| Kohaldatav näidis | Röga, Orofarüngeaalne tampoon |
| Avastamise piir | 200 koopiat/ml |
| Kokkusattumuste määr | 99,55% |
| Ct väärtus (CV,%) | ≤5,0% |
| Positiivne kokkusattumuste määr | 99,12% |
| Negatiivne kokkusattumuste määr | 100% |
| Säilitamistingimused ja aegumiskuupäev | Säilitatakse temperatuuril -20±5 ℃ ja kehtib ajutiselt 12 kuud. |
| Sisekontroll | Jah |
| Kataloogi number | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifitseerimine | CE |
| Eksemplarid | Nasofarüngeaalne tampoon, Orofarüngeaalne tampoon, Alveolaarne loputusvedelik, Sülg ja röga |
| Kohaldatav instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P reaalajas PCR-süsteem |
Testimisprotseduur
1. Nukleiinhapete ekstraheerimine
Töö tuleb läbi viia vastavalt väljatõmbekomplekti juhendile.
2. Süsteemi ettevalmistamine:
1) Võtke reaktiiv välja ja sulatage reaktiiv täielikult üles.Pöörake segu ümber ja tsentrifuugige kohe.N testreaktsiooni (N = testitavate proovide arv + positiivne kontroll + negatiivne kontroll + 1) valmistatakse reaktsioonisüsteemide jaoks ette vastavalt järgmiselt.
| Vomponentss | Maht 1 reaktsioonisüsteemi jaoks | N reaktsioonisüsteemi maht |
| Nukleiinhappe amplifikatsiooni reaktsioonilahuse segu (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Ensüümi segu | 2 µL | 2 µL * N |
| Kogumaht | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reaktsiooni jaotus: reaktsioonilahus segati ja tsentrifuugiti ning iga katsuti jaotati koguses 20 µl fluorestsents-PCR-seadme jaoks sobivasse PCR-tuubi.
3. Laadimine
Reaktsioonisüsteemidesse lisatakse 5 μL ekstraheeritud proovi nukleiinhapet, positiivset kontrollnukleiinhapet ja negatiivset kontrolli nukleiinhapet ning reaktsiooni kogumaht on 25 μL.Kinnitage katseklaasi kaas ja viige see pärast mõnesekundilist tsentrifuugimist amplifikatsioonitesti piirkonda.
4. PCR amplifikatsioonianalüüs
1) Asetage PCR-i reaktsioonitoru amplifikatsiooni tuvastamiseks fluorestseeruvasse PCR-i amplifikatsiooniinstrumenti.
2) Tsükli parameetrite seadistus:
| Programm | Tsüklite arv | Temperatuur | Reaktsiooniaeg | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sek | |
| 60℃ | 30 sek | Fluorestsentsi kollektsioon | ||
3) Tuvastamisseaded:
Tuvastuskanaliteks on seatud FAM, VIC, ROX ja CY5, mis vastavad vastavalt ORF1ab, N geenile ja E geenile, RNaas P sisekontrollile."Quencher Dye" ja "Passive Reference" on ABI 7500 instrumendi jaoks seatud väärtusele "Puudub".Määrake positiivse kontrolli, negatiivse kontrolli ja proovi (tundmatu) järjekord, milles proovid vastavad, ja määrake proovi nimi veerus „Proovi nimi”.
X-POCH16 puhul on toiming ja programm järgmised:
1) Kui enesetest on lõppenud, avage kaas ja asetage PCR-reaktsioonituubid instrumendis ettenähtud kohtadesse.
2) Alustage valiku "Ekspert" valimisega.valik.Valige suvand "Kõik" või valige käsitsi reaktsiooniala ekraani vasakus servas.
3) Valige suvand "LOAD";vali testprogramm;klõpsake nuppu "VALMIS" ja "RUN".Programmi läbimiseks kulub 30min42s.
Vaikimisi programmi tuvastuskanaliteks on seatud FAM, VIC, ROX ja CY5, mis vastavad vastavalt ORF1ab, N geenile ja E geenile, RNaas P sisekontrollile.
Vaikeprogrammi tsükliparameetrid on järgmised:
| Programm | Mitu | Temperatuur | Reaktsiooniaeg |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 sek |
| 60℃ | 13 sek | Fluorestsents |
5. Läve seadistus
Vastavalt analüüsitud pildile reguleerige algväärtust, lähteväärtust lõppväärtust ja läviväärtust (algusväärtus ja lõppväärtus on soovitatav määrata vastavalt 3 ja 15 ning negatiivse kontrolli võimenduskõver tasaseks või madalam kui lävijoon), klõpsake Analysis, et saada analüüsi automaatselt proovi Ct väärtus.Vaadake tulemusi aruande liideses.
6. Kvaliteedikontrolli standard
Iga komplekti kontroll peab vastama järgmistele S-kõveraga nõuetele, vastasel juhul on katse kehtetu.
| Tuvastamiskanalid | Negatiivne kontroll | Positiivne kontroll |
| FAM (ORF1ab) | Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | Ct | Ct≤38 |
【Lõppväärtus】
Vastavalt 100 orofarüngeaalse tampooniproovi ja 100 rögaproovi tulemustele ning ROC kõvera meetodil on selle komplekti OFR1ab, N geenide E geeni piirväärtus Ct = 38
KKK
Selles komplektis on reaalajas fluorestseeruva PCR-tehnoloogia praimerid ja sondid kavandatud vastavalt 2019-nCoV ORF1ab, N ja E geeni konserveerunud ja spetsiifilistele piirkondadele.PCR amplifikatsiooni käigus seostub sond matriitsiga ja sondi 5'-otsa reporterrühm lõhustatakse Taq ensüümi poolt (5'→3' eksonukleaasi aktiivsus), eemaldudes seeläbi summutusrühmast, et tekitada fluorestsentssignaal. .Reaalajas amplifikatsioonikõver joonistatakse automaatselt tuvastatud fluorestsentssignaali põhjal ja proovi Ct väärtus arvutatakse.FAM, VIC ja ROX fluorofoorid on märgistatud ORF1ab geeni, N geeni ja E geeni sondidega.Ühe testi abil saab 2019-nCoV ülaltoodud kolme geeni kvalitatiivselt tuvastada samaaegselt.
Komplekt on varustatud sisemise kontrolliga, mis on suunatud RNase P geenile, et jälgida kliiniliste proovide kogumist, käsitsemist, ekstraheerimist ja RT-PCR protsessi, et vältida valenegatiivseid tulemusi.Sisekontroll on märgistatud CY5 fluorestseeruva rühmaga.
1. Analüüsige ja tõlgendage testitulemusi, kui seade on normaalne ning positiivne kontroll, negatiivne kontroll ja sisekontrolli testi tulemus vastavad kvaliteedikontrolli standardile.
2. Sisekontrolli amplifikatsioonikõver (CY5) näitab tüüpilist S kõverat ja Ct ≤ 38, sihtgeenide tulemuste tõlgendamine allutatakse järgmistele tingimustele.
| Tuvastamiskanalid | Sihtgeenide tulemuste tõlgendamine | ||
| FMA | VIC (N geen) | ROX (E geen) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Tüüpilise S amplifikatsioonikõvera korral on Ct väärtus ≤38, vastav sihtgeen on positiivne. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Tüüpilise S-amplifikatsioonikõveraga testige uuesti proovi vastavat sihtgeeni. Kui tüüpilise S amplifikatsioonikõveraga Ct väärtus＜ 40, on vastav sihtgeen positiivne;kui Ct väärtus ≥40, on vastav sihtgeen negatiivne |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Vastav sihtgeen on negatiivne |
2019-nCoV tulemuste tõlgendamine:
Vastavalt ORF1ab, N geeni ja E geeni tulemustele tõlgendatakse järgmiselt:
1) Kui tuvastatud geenidest on KAKS või KOLM geeni positiivsed, on 2019-nCoV positiivne;
2) Kui AINULT ÜKS või ÜKSKI tuvastatud geen on positiivne, on 2019-nCoV negatiivne.
Märkus. Positiivse proovi amplifikatsioonikõver peaks olema tüüpilise S-kõveraga.Kui aga sihtkontsentratsioon on liiga kõrge, ei pruugita sisestandardi kontrolli amplifitseerida ja proovi võib hinnata otse positiivseks.Kui mis tahes kaks sihtgeeni saavad Ct≤38, on 2019-nCoV positiivne.Kui mis tahes kaks sihtgeeni saavad Ct≥40, on 2019-nCoV negatiivne.Kui Ct≥40 või väärtus puudub, on tõlgendus sihtgeeni tulemused negatiivsed.
3. Kui kõik FAM, VIC, ROX ja Cy5 kanalite Ct väärtused on suuremad kui 38 või puudub ilmne tüüpiline S võimenduskõver:
1) Proovis on aine(d), mis pärsivad PCR reaktsiooni.Soovitatav on proovi uuesti testimiseks lahjendada.
2) Nukleiinhapete ekstraheerimise protsess on ebanormaalne, seetõttu on soovitatav seda uuesti ekstraheerida
nukleiinhape uuesti testimiseks.
3) See proov EI olnud proovi võtmise ajal kvalifitseeritud proov ega lagunenud
transportimise ja ladustamise ajal.
Nende olukordade tuvastamiseks on kaks võimalust: NAAT ja antigeen.
(Tuleb Los Angelese CDC-st)
