Produktuaren xehetasuna
Osasunaren Mundu Erakundeak (OME) gidatzen du antigenoak detektatzeko diagnostiko azkarreko probak (Ag-RDRs) SARS-CoV-2 infekzio aktiboa diagnostikatzeko modu azkarrago eta merkeago eskain dezaketela azido nukleikoen anplifikazio-probak (NAATs) baino, eta OMEk ere gomendatzen du. Ag-RDT-ak gutxieneko errendimendu-baldintzak betetzen dituzten lehen kasuak detektatzeko, kontaktuen jarraipena egiteko, agerraldien ikerketetan eta gaixotasunen intzidentziaren joerak kontrolatzeko erabil daitezkeela.
Ezaugarriak
● Integrala:Hiru helburu gene detektatzen dira proba batean
● bateragarriak:CY5, FAM, VIC/HEX kanalekin ekipamendu arruntetara egokitzeko.
● Errendimendu bikaina:Sentsibilitate eta espezifikotasun handia, LOD = 200 kopia/ml.
Parametro teknikoa
| Enbalatzeko zehaztapena | 50 proba/kit, 100 proba/kit |
| Helburuko Eskualdea | ORF1ab, N, E |
| Lagin aplikagarria | Esputoa, Orofaringea |
| Detekzio muga | 200 kopia/ml |
| Kointzidentzia-tasa osoa | %99,55 |
| Ct balioa (CV,%) | ≤%5,0 |
| Kointzidentzia-tasa positiboa | %99,12 |
| Kointzidentzia-tasa negatiboa | % 100 |
| Biltegiratze-baldintzak eta iraungitze-data | -20±5 ℃-tan gordetzen da, eta 12 hilabeterako balio du behin-behinean. |
| Barne Kontrola | Bai |
| Katalogo zenbakia | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Ziurtapena | CE |
| Aleak | Nasofaringea, Orofaringea, Albeolarraren garbiketa-likidoa, Listua eta esputoa |
| Tresna aplikagarria | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Denbora errealeko PCR sistema |
Prozedura Prozedura
1. Azido Nukleikoen Erauzketa
Eragiketa erauzketa-kitaren eskuliburuaren arabera egin behar da.
2. Sistemaren prestaketa:
1) Atera erreaktiboa eta desizoztu erreaktiboa guztiz.Alderantzikatu nahasketa eta zentrifugatu berehala.N proba-erreakzio (N = probatu beharreko lagin kopurua + kontrol positiboa + kontrol negatiboa + 1) erreakzio-sistemetarako prestatzen dira, hurrenez hurren, honela.
| Voponenteak | 1 erreakzio-sistemarako bolumena | N erreakzio-sistemaren bolumena |
| Azido nukleikoa anplifikatzeko erreakzio-soluzioa Nahasketa (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Entzima nahastea | 2 µL | 2 µL * N |
| Bolumen osoa | 20 µL | 20 µL * N |
2) Erreakzioaren banaketa: erreakzio-soluzioa nahastu eta zentrifugatu zen, eta hodi bakoitza 20μL-ko kopuru batean banatu zen fluoreszentzia PCR aparatu baterako egokia den PCR hodi batean.
3. Kargatzea
Erauzitako laginaren azido nukleikoaren 5μL, kontrol positiboaren azido nukleikoaren eta kontrol negatiboen azido nukleikoaren erreakzio-sistemetara gehitzen dira eta erreakzio-bolumena guztira 25μL da.Lotu hodiaren estalkia eta eraman ezazu anplifikazio-probaren eremura zentrifugazio segundo batzuk igaro ondoren.
4. PCR Anplifikazio Saia
1) Jarri PCR erreakzio-hodia PCR anplifikazio-tresna fluoreszentean anplifikazioa detektatzeko.
2) Zikloaren parametroen ezarpena:
| Programa | Ziklo kopurua | Tenperatura | Erreakzio denbora | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 seg | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 seg | |
| 60℃ | 30 seg | Fluoreszentzia Bilduma | ||
3) Detekzio ezarpenak:
Detekzio-kanalak FAM, VIC, ROX eta CY5-en ezarrita daude, ORF1ab, N gene eta E Gene, RNase P barne-kontrolari dagozkionak, hurrenez hurren."Quencher Dye" eta "Passive Reference" "None" moduan ezarrita daude ABI 7500 tresnarako.Ezarri Kontrol positiboa, Kontrol negatiboa eta Lagina (Ezezaguna) laginak bat datozen ordenan, eta ezarri laginaren izena "Laginaren izena" zutabean.
X-POCH16-rako, funtzionamendua eta programa hauek dira:
1) Autotesta amaitu ondoren, ireki tapa eta jarri PCR erreakzio-hodiak tresnan izendatutako posizioetan.
2) Hasi "Exper" hautatuz.aukera.Hautatu "Guztiak" aukera edo eskuz hautatu pantailaren ezkerreko erreakzio-eremua.
3) Hautatu "KARGATU" aukera;hautatu proba programa;sakatu "DONA" eta "RUN".Programak 30min42s behar ditu burutzeko.
Default programaren detekzio-kanalak FAM, VIC, ROX eta CY5-en ezarrita daude, ORF1ab, N gene eta E Gene, RNase P barne-kontrolari dagozkionak, hurrenez hurren.
Lehenetsitako programaren ziklo-parametroak hauek dira:
| Programa | Kopurua | Tenperatura | Erreakzio denbora |
| 1 | 1 | 50℃ | 2min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30seg |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 seg |
| 60℃ | 13seg | Fluoreszentzia |
5. Atalasearen ezarpena
Aztertutako irudiaren arabera, egokitu hasierako balioa, oinarri-lerroaren amaiera-balioa eta atalase-balioa (Hasierako balioa eta amaierako balioa 3 eta 15 izatea gomendatzen da hurrenez hurren, eta kontrol negatiboaren anplifikazio-kurba laua edo laua izan dadin). atalasearen Lerroa baino txikiagoa), sakatu Analisia analisia laginaren Ct balioa automatikoki lortzeko.Ikusi emaitzak Txostenen interfazean.
6. Kalitate Kontrol Araua
Kitaren kontrol bakoitzak honako baldintza hauek bete behar ditu 'S' kurbarekin, bestela esperimentua baliogabea izango da.
| Detektatzeko bideak | Kontrol negatiboa | Kontrol positiboa |
| FAM(ORF1ab) | Ez Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ez Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ez Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ez Ct | Ct≤38 |
【Ebakitzeko balioa】
Orofaringeko 100 lagin eta 100 esputo laginen emaitzen arabera, eta ROC kurbaren metodoarekin, kit honen OFR1ab, N geneen E Genearen Ebaki-balioa Ct = 38 dira.
ohiko galderak
Kit honetan, 2019-nCoV-ren ORF1ab, N eta E genearen eskualde kontserbatu eta espezifikoetarako denbora errealeko PCR teknologia fluoreszentearen abiarazleak eta zundak diseinatzen dira.PCR anplifikatzean, zunda txantiloiarekin lotzen da, eta Taq entzimak (5'→3' exonukleasa jarduera) zundaren 5' muturreko berriemaile-taldea mozten du, horrela itzaltze-taldetik urrunduz seinale fluoreszente bat sortzeko. .Denbora errealeko anplifikazio-kurba automatikoki markatzen da detektaturiko fluoreszentzia-seinalean oinarrituta, eta laginaren Ct balioa kalkulatzen da.FAM, VIC eta ROX fluoroforoak ORF1ab genea, N genea eta E genearen zundekin markatzen dira.Proba bat erabiliz, 2019-nCoV-ren goiko hiru geneen detekzio kualitatiboa aldi berean egin daiteke.
Kitak RNase P geneari zuzendutako barne-kontrola du, lagin klinikoen bilketa, manipulazioa, erauzketa eta RT-PCR prozesua kontrolatzeko, emaitza faltsu-negatiborik ez izateko.Barne-kontrola CY5 talde fluoreszente batekin etiketatuta dago.
1. Aztertu eta interpretatu proben emaitzak tresna normala denean, eta kontrol positiboak, kontrol negatiboak eta barne-kontroleko probaren emaitzak kalitate-kontroleko estandarra betetzen dute.
2. Barne-kontrolaren anplifikazio-kurbak (CY5) S kurba tipikoa erakusten du eta Ct ≤ 38, xede-geneen emaitzen interpretazioa baldintza hauen menpe dago.
| Detektatzeko bideak | Xede-geneen emaitzak interpretatzea | ||
| FMA | VIC (N genea) | ROX (E genea) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | S anplifikazio-kurba tipiko batekin, Ct balioa ≤38 da, dagokion xede-genea positiboa da. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | S anplifikazio-kurba tipiko batekin, berriro probatu laginaren xede-genea berriro. Ct balioa < 40 bada S anplifikazio-kurba tipiko batekin, dagokion xede-genea positiboa da;Ct balioa ≥40 bada, dagokion xede-genea negatiboa da |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Dagokion xede genea negatiboa da |
2019-nCoVren emaitzen interpretazioa:
ORF1ab, N gene eta E genearen emaitzen arabera, honela interpretatzen da:
1) Detektatutako geneen BI edo HIRU gene positiboak badira, 2019-nCoV positiboa da;
2) Detektaturiko geneetatik BAKARRIK edo EZ BAKARRIK positiboa bada, 2019-nCoV negatiboa da.
Oharra: lagin positiboaren anplifikazio-kurbak S kurba tipiko batekin egon behar du.Hala ere, xede-kontzentrazioa altuegia bada, baliteke barne-kontrol estandarra handitu ez izatea eta lagina zuzenean positibotzat jo daiteke.Xede-geneetako bik Ct≤38 lortzen badute, 2019-nCoV positiboa da.Xede-geneetako bik Ct≥40 lortzen badute, 2019-nCoV negatiboa da.Ct≥40 bada, edo baliorik erakusten ez badu, interpretazioa xede genearen emaitzak negatiboak dira.
3. FAM, VIC, ROX eta Cy5 kanalen Ct balio guztiak 38 baino gehiago badira edo S anplifikazio-kurba tipiko nabaririk ez badago:
1) Laginean PCR erreakzioa inhibitzen duten substantzia(k) daude.Berriro probatzeko lagina diluitzea gomendatzen da.
2) Azido nukleikoen erauzketa prozesua anormala da, beraz, berriro ateratzea proposatzen da
azido nukleikoa berriro proba egiteko.
3) Lagin hau EZ zen lagin kualifikatua laginketa egiteko unean, edo degradatu egin zen
garraiatzeko eta biltegiratzeko garaian.
Egoera hauek detektatzeko 2 modu dira: NAAT eta Antigenoa.
(Los Angeleseko CDCtik dator)
