جزئیات محصول
سازمان جهانی بهداشت (WHO) راهنمایی می‌کند که آزمایش‌های تشخیصی سریع آنتی‌ژن (Ag-RDRs) می‌توانند روشی سریع‌تر و کم‌هزینه‌تر برای تشخیص عفونت فعال SARS-CoV-2 نسبت به آزمایش‌های تقویت اسید نوکلئیک (NAATs) ارائه دهند، و WHO همچنین توصیه می‌کند. که Ag-RDTهایی که حداقل الزامات عملکرد را برآورده می‌کنند، می‌توانند برای تشخیص موارد اولیه، ردیابی تماس، در طول بررسی‌های شیوع بیماری و نظارت بر روند بروز بیماری در جوامع استفاده شوند.
امکانات
● جامع:سه ژن هدف در یک آزمایش شناسایی می شود
● سازگار:سازگار با تجهیزات رایج با کانال های CY5، FAM، VIC/HEX.
● عملکرد عالی:حساسیت و ویژگی بالا، LOD = 200 کپی در میلی لیتر.
پارامتر فنی
| مشخصات بسته بندی | 50 تست / کیت، 100 تست / کیت |
| منطقه هدف | ORF1ab، N، E |
| نمونه قابل اجرا | خلط، سواب اوروفارنکس |
| حد تشخیص | 200 نسخه در میلی لیتر |
| نرخ تصادفی کل | 99.55٪ |
| مقدار Ct (CV،%) | ≤5.0٪ |
| نرخ تصادفی مثبت | 99.12٪ |
| نرخ تصادفی منفی | 100% |
| شرایط نگهداری و تاریخ انقضا | ذخیره شده در -20±5℃، و به طور موقت برای 12 ماه معتبر است. |
| کنترل داخلی | آره |
| شماره کاتالوگ | A7793YF-50T، A7793YF-100T |
| گواهینامه | CE |
| نمونه ها | سواب نازوفارنکس، سواب اوروفارنکس، مایع شستشوی آلوئولار، بزاق و خلط |
| ابزار قابل اجرا | ABI 7500، Roche Light Cycler 480Ⅱ، Roche Cobas z 480، سیستم PCR بلادرنگ SLAN-96P |
روش تست
1. استخراج اسید نوکلئیک
عملیات باید طبق دفترچه راهنمای کیت استخراج انجام شود.
2. آماده سازی سیستم:
1) معرف را خارج کرده و معرف را کاملا ذوب کنید.مخلوط را برعکس کنید و بلافاصله سانتریفیوژ کنید.واکنش های تست N (N = تعداد نمونه های مورد آزمایش + کنترل مثبت + کنترل منفی + 1) به ترتیب برای سیستم های واکنش به شرح زیر تهیه می شود.
| Vomponentss | حجم برای 1 سیستم واکنش | حجم برای سیستم واکنش N |
| مخلوط محلول واکنش تقویت اسید نوکلئیک (A7793YF) | 18 میکرولیتر | 18 میکرولیتر * N |
| مخلوط آنزیمی | 2 میکرولیتر | 2 میکرولیتر * N |
| حجم کل | 20 میکرولیتر | 20 میکرولیتر * N |
2) توزیع واکنش: محلول واکنش مخلوط و سانتریفیوژ شد و هر لوله به مقدار 20 میکرولیتر در یک لوله PCR مناسب برای دستگاه PCR فلورسانس توزیع شد.
3. بارگذاری
5 میکرولیتر از اسید نوکلئیک نمونه استخراج شده، اسید نوکلئیک کنترل مثبت و اسید نوکلئیک کنترل منفی به سیستم های واکنش اضافه می شود و حجم کل واکنش 25 میکرولیتر است.پوشش لوله را ببندید و پس از چند ثانیه سانتریفیوژ کردن، آن را به منطقه آزمایش تقویت کنید.
4. سنجش تقویت PCR
1) لوله واکنش PCR را برای تشخیص تقویت در ابزار تقویت PCR فلورسنت قرار دهید.
2) تنظیم پارامتر چرخه:
| برنامه | تعداد چرخه ها | درجه حرارت | زمان پاسخ | |
| 1 | 1 | 50 درجه سانتیگراد | 10 دقیقه | |
| 2 | 1 | 95 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه | |
| 3 | 45 | 95 درجه سانتیگراد | 5 ثانیه | |
| 60 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه | مجموعه فلورسانس | ||
3) تنظیمات تشخیص:
کانال های تشخیص به ترتیب روی FAM، VIC، ROX و CY5 تنظیم شده اند که به ترتیب مربوط به ORF1ab، ژن N و E Gene، RNase P کنترل داخلی است."Quencher Dye" و "Passive Reference" برای دستگاه ABI 7500 روی "None" تنظیم شده اند.کنترل مثبت، کنترل منفی و نمونه (ناشناس) را به ترتیب مطابقت نمونه ها تنظیم کنید و نام نمونه را در ستون "Sample Name" تنظیم کنید.
برای X-POCH16، عملیات و برنامه به شرح زیر است:
1) پس از تکمیل خودآزمایی، درب را باز کرده و لوله های واکنش PCR را در موقعیت های تعیین شده در دستگاه قرار دهید.
2) با انتخاب "Exper" شروع کنید.گزینه.گزینه «همه» را انتخاب کنید یا به صورت دستی ناحیه واکنش را در سمت چپ صفحه انتخاب کنید.
3) گزینه "LOAD" را انتخاب کنید.برنامه آزمایشی را انتخاب کنید؛روی "DONE" و "RUN" کلیک کنید.این برنامه 30 دقیقه و 42 ثانیه طول می کشد تا کامل شود.
کانال‌های تشخیص برنامه پیش‌فرض به ترتیب روی FAM، VIC، ROX و CY5 تنظیم شده‌اند که به ترتیب مربوط به ORF1ab، ژن N و E Gene، RNase P کنترل داخلی است.
پارامتر چرخه برنامه پیش فرض به شرح زیر است:
| برنامه | تعداد | درجه حرارت | زمان پاسخ |
| 1 | 1 | 50 درجه سانتیگراد | 2 دقیقه |
| 2 | 1 | 95 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه |
| 3 | 41 | 95 درجه سانتیگراد | 2 ثانیه |
| 60 درجه سانتیگراد | 13 ثانیه | فلورسانس |
5. تنظیم آستانه
با توجه به تصویر تجزیه و تحلیل شده، مقدار شروع، مقدار پایان خط پایه و مقدار آستانه را تنظیم کنید (مقدار شروع و پایان به ترتیب 3 و 15 توصیه می شود و منحنی تقویت کنترل منفی به صورت مسطح یا مسطح تنظیم می شود. پایین تر از خط آستانه)، روی تجزیه و تحلیل کلیک کنید تا به طور خودکار تجزیه و تحلیل مقدار نمونه Ct را دریافت کنید.نتایج را در رابط گزارش مشاهده کنید.
6. استاندارد کنترل کیفیت
هر کنترل کیت باید شرایط زیر را با منحنی 'S' برآورده کند، در غیر این صورت آزمایش نامعتبر است.
| کانال های تشخیص | کنترل منفی | کنترل مثبت |
| FAM (ORF1ab) | بدون Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | بدون Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | بدون Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | بدون Ct | Ct≤38 |
【مقدار قطعی】
با توجه به نتایج 100 نمونه سواب اوروفارنکس و 100 نمونه خلط و با روش منحنی ROC، مقدار Cut-off ژن OFR1ab، N ژن E این کیت Ct = 38 است.
سوالات متداول
در این کیت، پرایمرها و پروب های فناوری PCR فلورسنت بلادرنگ به ترتیب برای مناطق حفاظت شده و خاص ژن ORF1ab، N و E 2019-nCoV طراحی شده اند.در طی تقویت PCR، پروب به الگو متصل می شود و گروه گزارشگر انتهای 5 پروب توسط آنزیم Taq (فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3') جدا می شود، در نتیجه از گروه خاموش کننده دور می شود تا سیگنال فلورسنت تولید کند. .منحنی تقویت زمان واقعی به طور خودکار بر اساس سیگنال فلورسانس شناسایی شده رسم می شود و مقدار Ct نمونه محاسبه می شود.فلوروفورهای FAM، VIC و ROX به پروب‌های ژن ORF1ab، ژن N و ژن E نشاندار می‌شوند.با استفاده از یک آزمایش، تشخیص کیفی سه ژن فوق 2019-nCoV را می توان به طور همزمان انجام داد.
این کیت با یک کنترل داخلی ارائه شده است که ژن RNase P را هدف قرار می دهد تا بر جمع آوری نمونه های بالینی، جابجایی، استخراج و فرآیند RT-PCR نظارت کند تا از نتایج منفی کاذب جلوگیری شود.کنترل داخلی با یک گروه فلورسنت CY5 برچسب گذاری شده است.
1. تجزیه و تحلیل و تفسیر نتایج آزمایش زمانی که ابزار نرمال است، و کنترل مثبت، کنترل منفی و نتیجه آزمایش کنترل داخلی مطابق با استاندارد کنترل کیفیت است.
2. منحنی تقویت کنترل داخلی (CY5) منحنی S معمولی و Ct ≤ 38 را نشان می دهد، تفسیر نتایج ژن های هدف تحت شرایط زیر قرار می گیرد.
| کانال های تشخیص | تفسیر نتایج ژن های هدف | ||
| FMA | VIC (ژن N) | ROX (ژن E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | با یک منحنی تقویت S معمولی، مقدار Ct ≤38 است، ژن هدف مربوطه مثبت است. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | با یک منحنی تکثیر S معمولی، ژن هدف مربوطه نمونه را دوباره آزمایش کنید. اگر مقدار Ct ＜ 40 با منحنی تکثیر S معمولی باشد، ژن هدف مربوطه مثبت است.اگر مقدار Ct≥40 باشد، ژن هدف مربوطه منفی است |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | ژن هدف مربوطه منفی است |
تفسیر نتایج برای 2019-nCoV:
با توجه به نتایج ORF1ab، ژن N و ژن E، تفسیر به شرح زیر است:
1) اگر دو یا سه ژن از ژن های شناسایی شده مثبت باشد، 2019-nCoV مثبت است.
2) اگر فقط یک یا هیچ یک از ژن های شناسایی شده مثبت باشد، nCoV 2019 منفی است.
نکته: منحنی تقویت نمونه مثبت باید با منحنی S معمولی باشد.با این حال، اگر غلظت هدف بیش از حد بالا باشد، کنترل استاندارد داخلی ممکن است تقویت نشود و نمونه می‌تواند مستقیما مثبت ارزیابی شود.اگر هر دو ژن هدف Ct≤38 دریافت کنند، nCoV 2019 مثبت است.اگر هر دو ژن هدف Ct≥40 دریافت کنند، nCoV 2019 منفی است.اگر Ct≥40 یا مقداری نشان نداد، تفسیر نتایج ژن هدف منفی است.
3. اگر تمام مقادیر Ct کانال های FAM، VIC، ROX و Cy5 بیش از 38 باشد یا منحنی تقویت S معمولی مشخصی وجود نداشته باشد:
1) ماده(هایی) در نمونه وجود دارد که واکنش PCR را مهار می کند.توصیه می شود نمونه را برای آزمایش مجدد رقیق کنید.
2) فرآیند استخراج اسید نوکلئیک غیرطبیعی است، بنابراین استخراج مجدد پیشنهاد می شود
اسید نوکلئیک برای آزمایش مجدد
3) این نمونه در زمان نمونه گیری، نمونه واجد شرایط نبود، یا تخریب شد
در طول حمل و نقل و ذخیره سازی
آنها 2 راه برای تشخیص این موقعیت ها هستند: NAAT و آنتی ژن.
(از CDC لس آنجلس می آید)
