Mion-fhiosrachadh toraidh
Tha Buidheann Slàinte na Cruinne (WHO) a’ stiùireadh gum faod deuchainnean breithneachaidh luath lorg antigen (Ag-RDRs) dòigh nas luaithe agus nas saoire a thabhann gus galar gnìomhach SARS-CoV-2 a lorg na deuchainnean leudachaidh searbhag niuclasach (NAATn), agus tha WHO cuideachd a’ moladh gum faodar Ag-RDTs a tha a’ coinneachadh ri riatanasan coileanaidh as ìsle a chleachdadh airson prìomh chùisean a lorg, lorg conaltraidh, rè sgrùdaidhean briseadh a-mach agus gus sùil a chumail air gluasadan tricead ghalaran ann an coimhearsnachdan.
Feartan
● Cuimseach:Lorgar trì gine targaid ann an aon deuchainn
● co-chòrdail:Freagarrach airson uidheamachd cumanta le seanalan CY5, FAM, VIC / HEX.
● Coileanadh sàr-mhath:Cugallachd àrd agus sònrachas, LOD = 200 leth-bhreac / ml.
Paramadair Teicnigeach
| Sònrachadh pacaidh | 50 deuchainn / pasgan, 100 deuchainn / pasgan |
| Roinn Targaid | ORF1ab, N, E |
| Sampall iomchaidh | Sputum, swab oropharyngeal |
| Crìochan Dearbhaidh | 200 leth-bhreac / ml |
| Ìre iomlan de cho-thuiteamas | 99.55% |
| Luach Ct (CV,%) | ≤5.0% |
| Ìre co-thuiteamas dearbhach | 99.12% |
| Ìre Co-thuiteamas Negative | 100% |
| Suidheachadh stòraidh agus ceann-latha crìochnachaidh | Air a stòradh aig -20 ± 5 ℃, agus tha e dligheach gu sealach airson 12 mìosan. |
| Smachd a-staigh | Tha |
| Àireamh catalog | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Teisteanas | CE |
| Sampaill | Swab nasopharyngeal, swab oropharyngeal, lionn lavage alveolar, saliva agus sputum |
| Ionnsramaid iomchaidh | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P Siostam PCR fìor-ùine |
Modh-obrach deuchainn
1. Earrann Nucleic Acid
Bu chòir obrachadh a dhèanamh a rèir leabhar-làimhe inneal às-tharraing.
2. Ullachadh siostam:
1) Thoir a-mach an reagent agus leag an reagent gu tur.Tionndaidh am measgachadh agus an centrifuge sa bhad.Tha ath-bheachdan deuchainn N (N = àireamh de shamhlaichean ri dhearbhadh + smachd adhartach + smachd àicheil + 1) air an ullachadh airson siostaman freagairt, fa leth, mar a leanas.
| Sùlairean | Volume airson 1 reaction siostam | Meud airson siostam freagairt N |
| Fuasgladh freagairt meudachaidh searbhag niuclasach measgachadh (A7793YF) | 18 µl | 18 µL * N |
| Enzyme measgachadh | 2 µl | 2 µL * N |
| Meud iomlan | 20 µl | 20 µL * N |
2) Sgaoileadh freagairt: Bha am fuasgladh ath-bhualadh measgaichte agus centrifuged, agus chaidh gach tiùb a chuir a-mach ann an tomhas de 20μL ann an tiùb PCR a bha freagarrach airson inneal fluorescence PCR.
3. A 'luchdachadh
Tha 5μL den sampall searbhag niuclasach a chaidh a thoirt a-mach, searbhag niuclasach smachd adhartach agus searbhag niuclasach smachd àicheil air a chur ris na siostaman ath-bhualadh, agus is e an tomhas freagairt iomlan 25μL.Ceangail an còmhdach tiùba agus gluais e chun raon deuchainn leudachaidh às deidh beagan dhiog de centrifugation.
4. Measadh Meudachadh PCR
1) Cuir an tiùb freagairt PCR a-steach don ionnstramaid leudachaidh PCR fluorescent airson lorg leudachaidh.
2) Suidheachadh paramadair baidhsagal:
| Prògram | An àireamh de chuairtean | Teòthachd | Ùine freagairt | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 mion | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 diog | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 diog | |
| 60 ℃ | 30 diog | Cruinneachadh fluorescence | ||
3) Roghainnean lorgaidh:
Tha na seanalan lorg air an suidheachadh gu FAM, VIC, ROX agus CY5, a rèir ORF1ab, N gine, agus E Gene, smachd a-staigh RNase P, fa leth.Tha “Quencher Dye” agus “Passive Reference” air an suidheachadh gu “Chan eil gin” airson an ionnstramaid ABI 7500.Suidhich an Smachd Deimhinneach, Smachd àicheil, agus sampall (Neo-aithnichte) anns an òrdugh anns a bheil na sampallan a ’freagairt, agus suidhich ainm an t-sampall anns a’ cholbh “Sampall Name”.
Airson X-POCH16, tha an obrachadh agus am prògram mar a leanas:
1) Às deidh an fèin-dheuchainn a bhith deiseil, fosgail am mullach agus cuir na tiùban freagairt PCR anns na h-àiteachan ainmichte san ionnstramaid.
2) Tòisich le bhith a 'taghadh an "Exper."roghainn.Tagh an roghainn "All" no tagh le làimh an raon freagairt air taobh clì na sgrìn.
3) Tagh an "LOAD" roghainn;tagh am prògram deuchainn;cliog air “DONE” agus an “RUN”.Bheir am prògram 30min42s airson a chrìochnachadh.
Tha na seanailean lorgaidh den phrògram Default air an suidheachadh gu FAM, VIC, ROX agus CY5, a rèir ORF1ab, N gine, agus E Gene, smachd a-staigh RNase P, fa leth.
Tha paramadair rothaireachd a’ phrògram Default mar a leanas:
| Prògram | Àireamh de | Teòthachd | Ùine freagairt |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 mhionaid |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 diog |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 diog |
| 60 ℃ | 13 diog | Fluaraiseachd |
5. Suidheachadh stairsnich
A rèir na h-ìomhaigh sgrùdaichte, atharraich an luach tòiseachaidh, luach deireannach luach Bun-loidhne agus Luach Threshold (Thathas a’ moladh luach tòiseachaidh agus luach deireannach a shuidheachadh gu 3 agus 15 fa leth, agus tha lùb leudachaidh an smachd àicheil air atharrachadh gus a bhith rèidh no nas ìsle na an stairsnich Loidhne), cliog Mion-sgrùdadh gus an luach sampall Ct fhaighinn gu fèin-ghluasadach.Seall na toraidhean ann an eadar-aghaidh Aithisg.
6. Inbhe Smachd Càileachd
Feumaidh gach smachd air a’ chidsin na riatanasan a leanas a choileanadh le lùb ‘S’, air neo tha an deuchainn neo-dhligheach.
| Sianalan lorgaidh | Smachd àicheil | Smachd adhartach |
| FAM(ORF1ab) | Chan eil Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Chan eil Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Chan eil Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Chan eil Ct | Ct≤38 |
【Luach gearraidh】
A rèir toraidhean 100 sampall swab oropharyngeal agus 100 sampall sputum, agus leis an dòigh lùb ROC, is e luach gearraidh an OFR1ab, N genes E Gene den uidheamachd seo Ct = 38
Ceistean Cumanta
Anns a ’phiseag seo, tha primers agus probes de theicneòlas fluorescent PCR fìor-ùine air an dealbhadh a rèir roinnean glèidhte agus sònraichte den ghine ORF1ab, N agus E de 2019-nCoV fa leth.Rè leudachadh PCR, bidh an probe a’ ceangal ris an teamplaid, agus tha am buidheann neach-aithris 5’-end den probe air a ghleusadh leis an enzyme Taq (5’ → 3’ gnìomhachd exonuclease), mar sin a’ gluasad air falbh bhon bhuidheann quenching gus comharra flùraiseach a ghineadh. .Tha an lùb leudachaidh fìor-ùine air a dhealbhadh gu fèin-ghluasadach stèidhichte air a’ chomharra fluorescence a chaidh a lorg, agus tha luach sampall Ct air a thomhas.Tha fluorophores FAM, VIC agus ROX air an ainmeachadh gu gine ORF1ab, gine N agus probes gine E.Le bhith a’ cleachdadh aon deuchainn, faodar lorg càileachdail de na trì ginean gu h-àrd de 2019-nCoV a dhèanamh aig an aon àm.
Tha smachd taobh a-staigh air a thoirt don uidheamachd a tha ag amas air gine RNase P gus sùil a chumail air cruinneachadh sampaill clionaigeach, làimhseachadh, às-tharraing agus pròiseas RT-PCR gus toraidhean meallta-àicheil a sheachnadh.Tha an smachd a-staigh air a chomharrachadh le buidheann fluorescent CY5.
1. Dèan sgrùdadh agus mìneachadh air toraidhean deuchainn nuair a tha an ionnstramaid àbhaisteach, agus tha an smachd adhartach, an smachd àicheil agus an toradh deuchainn smachd a-staigh a’ coinneachadh ris an ìre smachd càileachd.
2. Tha an lùb leudachaidh de smachd a-staigh (CY5) a 'sealltainn lùb àbhaisteach S agus Ct ≤ 38, tha mìneachadh air toraidhean ginean targaid fo na cumhaichean a leanas.
| Sianalan lorgaidh | Mìneachadh air toraidhean ghinean targaid | ||
| FMA | VIC (N gine) | ROX (E gine) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Le lùb leudachaidh S àbhaisteach, is e luach Ct ≤38, tha an gine targaid co-fhreagarrach deimhinneach. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Le lùb leudachaidh S àbhaisteach, dèan ath-dheuchainn air gine targaid co-fhreagarrach an t-sampall a-rithist. Ma tha an luach Ct＜ 40 le lùb leudachaidh àbhaisteach S, tha an gine targaid co-fhreagarrach dearbhach;ma tha an luach Ct≥40, tha an gine targaid co-fhreagarrach àicheil |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Tha an gine targaid co-fhreagarrach àicheil |
Mìneachadh thoraidhean airson 2019-nCoV:
A rèir toraidhean ORF1ab, gine N agus gine E, mìneachadh mar a leanas:
1) Ma tha DÀ no TRÌ ginean de na ginean a chaidh a lorg dearbhach, tha an 2019-nCoV deimhinneach;
2) Mura h-eil A-MHÀIN no AON de na ginean a chaidh a lorg dearbhach, tha an 2019-nCoV àicheil.
Nota: Bu chòir lùb leudachaidh an t-sampall adhartach a bhith le lùb S àbhaisteach.Ach, ma tha an dùmhlachd targaid ro àrd, is dòcha nach tèid an smachd àbhaisteach a-staigh a mheudachadh agus faodar an sampall a mheas gu dìreach mar rud adhartach.Ma gheibh dhà de ghinean targaid Ct≤38, tha an 2019-nCoV deimhinneach.Ma gheibh dhà de ghinean targaid Ct≥40, tha an 2019-nCoV àicheil.Mura h-eil Ct≥40, no mura h-eil luach ann, tha mìneachadh air toraidhean gine targaid àicheil.
3. Ma tha na luachan Ct gu lèir aig seanalan FAM, VIC, ROX agus Cy5 nas àirde na 38 no mura bheil lùb leudachaidh S àbhaisteach follaiseach ann:
1) Tha/tha stuth(an) anns an t-sampall a chuireas bacadh air freagairt PCR.Thathas a’ moladh an sampall a lagachadh airson ath-dheuchainn.
2) Tha am pròiseas às-tharraing searbhag niuclasach neo-àbhaisteach, agus mar sin thathas a’ moladh ath-tharraing
nucleic acid airson ath-dheuchainn.
3) CHAN EIL an sampall seo na shampall barrantaichte aig àm an samplachaidh, no air a dhol sìos
rè còmhdhail agus stòradh.
Tha iad nan dòighean 2 air an lorg sinn na suidheachaidhean seo: NAAT agus Antigen.
(A ’tighinn bho CDC Los Angeles)
