Detalle do produto
A Organización Mundial da Saúde (OMS) indica que as probas de diagnóstico rápido de detección de antíxenos (Ag-RDR) poden ofrecer un xeito máis rápido e menos custoso de diagnosticar a infección activa por SARS-CoV-2 que as probas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT), e a OMS tamén recomenda que os Ag-RDT que cumpren os requisitos mínimos de rendemento poden utilizarse para a detección de casos primarios, o rastrexo de contactos, durante as investigacións de brotes e para controlar as tendencias da incidencia de enfermidades nas comunidades.
características
● Integral:Tres xenes diana detectados nunha proba
● compatible:Adaptable a equipos comúns con canles CY5, FAM, VIC/HEX.
● Excelente rendemento:Alta sensibilidade e especificidade, LOD = 200 copias/ml.
Parámetro técnico
| Especificación de embalaxe | 50 probas/kit, 100 probas/kit |
| Rexión obxectivo | ORF1ab, N, E |
| Mostra aplicable | Esputo, hisopo orofarínxeo |
| Límite de detección | 200 copias/ml |
| Taxa total de coincidencias | 99,55 % |
| Valor Ct (CV,%) | ≤5,0 % |
| Taxa de coincidencia positiva | 99,12 % |
| Taxa de coincidencia negativa | 100 % |
| Condicións de almacenamento e data de caducidade | Almacenado a -20 ± 5 ℃ e é válido provisionalmente durante 12 meses. |
| Control Interno | Si |
| Número de catálogo | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificado | CE |
| Exemplares | Hisopo nasofarínxeo, hisopo orofarínxeo, líquido de lavado alveolar, saliva e esputo |
| Instrumento aplicable | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Sistema de PCR en tempo real |
Procedemento da proba
1. Extracción de ácidos nucleicos
A operación debe realizarse segundo o manual do kit de extracción.
2. Preparación do sistema:
1) Saca o reactivo e desconxela o reactivo completamente.Inverte a mestura e centrifugue inmediatamente.Prepáranse N reaccións de proba (N = número de mostras a probar + control positivo + control negativo + 1) para os sistemas de reacción, respectivamente, como segue.
| Vomponentes | Volume para 1 sistema de reacción | Volume para sistema de reacción N |
| Solución de reacción de amplificación de ácidos nucleicos Mix (A7793YF) | 18 µl | 18 µl * N |
| Mestura enzimática | 2 µl | 2 µl * N |
| Volume total | 20 µl | 20 µl * N |
2) Distribución da reacción: mesturouse e centrifugouse a solución de reacción, e cada tubo dispensouse nunha cantidade de 20 μL nun tubo de PCR axeitado para un aparello de PCR de fluorescencia.
3. Cargando
5 μL da mostra extraída de ácido nucleico, ácido nucleico de control positivo e ácido nucleico de control negativo engádense aos sistemas de reacción e o volume de reacción total é de 25 μL.Fixe a tapa do tubo e móvaa á zona de proba de amplificación despois duns segundos de centrifugación.
4. Ensaio de amplificación por PCR
1) Coloque o tubo de reacción de PCR no instrumento de amplificación de PCR fluorescente para a detección da amplificación.
2) Configuración de parámetros de ciclo:
| Programa | Número de ciclos | Temperatura | Tempo de reacción | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 seg | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 seg | |
| 60℃ | 30 seg | Colección de fluorescencia | ||
3) Configuración de detección:
As canles de detección están configuradas en FAM, VIC, ROX e CY5, correspondentes a ORF1ab, xene N e xene E, control interno da RNase P, respectivamente."Quencher Dye" e "Passive Reference" están configurados en "None" para o instrumento ABI 7500.Establece o control positivo, o control negativo e a mostra (descoñecida) na orde na que se corresponden as mostras e establece o nome da mostra na columna "Nome da mostra".
Para X-POCH16, o funcionamento e o programa son os seguintes:
1) Despois de completar a autoproba, abra a tapa e coloque os tubos de reacción de PCR nas posicións designadas no instrumento.
2) Comeza seleccionando o "Exper".opción.Seleccione a opción "Todos" ou seleccione manualmente a área de reacción no lado esquerdo da pantalla.
3) Seleccione a opción "CARGAR";seleccione o programa de proba;prema en "FEITO" e en "RUN".O programa leva 30 min 42 segundos en completarse.
As canles de detección do programa Default están configuradas en FAM, VIC, ROX e CY5, correspondentes ao control interno ORF1ab, xene N e xene E, RNase P, respectivamente.
Os parámetros de ciclo do programa predeterminado son os seguintes:
| Programa | Número de | Temperatura | Tempo de reacción |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 seg |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 seg |
| 60℃ | 13 seg | Fluorescencia |
5. Configuración do limiar
Segundo a imaxe analizada, axuste o valor inicial, o valor final da liña de base e o valor umbral (recoméndase que o valor inicial e o valor final se configuren en 3 e 15 respectivamente, e a curva de amplificación do control negativo axústase para ser plana ou plana). inferior á liña de umbral), faga clic en Análise para obter automaticamente a análise o valor Ct da mostra.Consulta os resultados na interface do informe.
6. Norma de control de calidade
Cada control do kit debe cumprir os seguintes requisitos coa curva "S", se non, o experimento non é válido.
| Canles de detección | Control negativo | Control positivo |
| FAM(ORF1ab) | Non Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Non Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Non Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Non Ct | Ct≤38 |
【Valor de corte】
Segundo os resultados de 100 mostras de hisopo orofarínxeo e 100 mostras de esputo, e co método da curva ROC, o valor de corte do xene OFR1ab, N xenes E deste kit é Ct = 38
FAQ
Neste kit, deseñan cebadores e sondas da tecnoloxía de PCR fluorescente en tempo real para as rexións conservadas e específicas do xene ORF1ab, N e E de 2019-nCoV respectivamente.Durante a amplificación da PCR, a sonda únese ao molde e o grupo indicador do extremo 5' da sonda é escindido polo encima Taq (actividade exonuclease 5'→3'), afastándose así do grupo de extinción para xerar un sinal fluorescente. .A curva de amplificación en tempo real trazarase automaticamente en función do sinal de fluorescencia detectado e calcúlase o valor Ct da mostra.Os fluoróforos FAM, VIC e ROX están marcados con sondas do xene ORF1ab, do xene N e do xene E.Usando unha proba, pódese realizar simultaneamente a detección cualitativa dos tres xenes anteriores de 2019-nCoV.
O kit inclúe un control interno dirixido ao xene da RNase P para supervisar a recollida, manipulación, extracción e proceso de RT-PCR de mostras clínicas para evitar resultados falsos negativos.O control interno está marcado cun grupo fluorescente CY5.
1. Analiza e interpreta os resultados da proba cando o instrumento é normal e o control positivo, o control negativo e o resultado da proba de control interno cumpren o estándar de control de calidade.
2. A curva de amplificación de control interno (CY5) mostra unha curva S típica e Ct ≤ 38, a interpretación dos resultados dos xenes diana está sometido ás seguintes condicións.
| Canles de detección | Interpretación dos resultados dos xenes diana | ||
| FMA | VIC (Xene N) | ROX (Xene E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Cunha curva de amplificación S típica, o valor Ct é ≤38, o xene diana correspondente é positivo. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Cunha curva de amplificación S típica, volva a probar o xene diana correspondente da mostra de novo. Se o valor Ct < 40 cunha curva de amplificación S típica, o xene diana correspondente é positivo;se o valor Ct ≥40, o xene diana correspondente é negativo |
| Ct ≥40 | Ct ≥40 | Ct ≥40 | O xene diana correspondente é negativo |
Interpretación dos resultados do 2019-nCoV:
Segundo os resultados de ORF1ab, xene N e xene E, a interpretación da seguinte forma:
1) Se DOUS ou TRES xenes dos xenes detectados son positivos, o 2019-nCoV é positivo;
2) Se SÓ UN ou NINGÚN dos xenes detectados é positivo, o 2019-nCoV é negativo.
Nota: a curva de amplificación da mostra positiva debe estar cunha curva S típica.Non obstante, se a concentración obxectivo é demasiado alta, é posible que o control do estándar interno non se amplíe e a mostra pódese xulgar directamente como positiva.Se dous dos xenes obxectivo obteñen Ct≤38, o 2019-nCoV é positivo.Se dous dos xenes obxectivo obteñen Ct≥40, o 2019-nCoV é negativo.Se Ct≥40, ou non mostra ningún valor, a interpretación dos resultados do xene diana é negativo.
3. Se todos os valores de Ct das canles FAM, VIC, ROX e Cy5 son superiores a 38 ou non hai unha curva de amplificación S típica obvia:
1) Hai/hai substancia(s) na mostra que inhiben a reacción de PCR.Recoméndase diluír a mostra para ser probada de novo.
2) O proceso de extracción de ácidos nucleicos é anormal, polo que se suxire volver extraer
ácido nucleico para volver a probar.
3) Esta mostra NON era unha mostra cualificada no momento da toma de mostras nin estaba degradada
durante o transporte e almacenamento.
Son 2 formas en que podemos detectar estas situacións: NAAT e Antíxeno.
(Vén do CDC de Los Ángeles)
