वास्तु की बारीकी
विश्व स्वास्थ्य संगठन (WHO) गाइड करता है कि एंटीजन-डिटेक्टिंग रैपिड डायग्नोस्टिक टेस्ट (Ag-RDRs) न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन टेस्ट (NAATs) की तुलना में सक्रिय SARS-CoV-2 संक्रमण का निदान करने के लिए एक तेज़ और कम खर्चीला तरीका पेश कर सकता है, और WHO भी सिफारिश करता है न्यूनतम प्रदर्शन आवश्यकताओं को पूरा करने वाले एजी-आरडीटी का उपयोग प्राथमिक मामले का पता लगाने, संपर्क का पता लगाने, प्रकोप की जांच के दौरान और समुदायों में बीमारी की घटनाओं की प्रवृत्ति की निगरानी के लिए किया जा सकता है।
विशेषताएँ
● व्यापक:एक परीक्षण में तीन लक्ष्य जीन का पता चलता है
● संगत:CY5, FAM, VIC/HEX चैनलों के साथ सामान्य उपकरणों के अनुकूल।
● उत्कृष्ट प्रदर्शन:उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता, एलओडी = 200 प्रतियां / एमएल।
तकनीकी मापदण्ड
| पैकिंग विशिष्टता | 50 टेस्ट/किट, 100 टेस्ट/किट |
| लक्ष्य क्षेत्र | ORF1ab, एन, ई |
| लागू नमूना | थूक, ओरोफरीन्जियल स्वैब |
| पता लगाने की सीमा | 200 प्रतियां / मिली |
| कुल संयोग दर | 99.55% |
| सीटी मान (सीवी,%) | ≤5.0% |
| सकारात्मक संयोग दर | 99.12% |
| नकारात्मक संयोग दर | 100% |
| भंडारण की स्थिति और समाप्ति तिथि | -20±5℃ पर संग्रहीत, और 12 महीनों के लिए अनंतिम रूप से वैध है। |
| आंतरिक नियंत्रण | हाँ |
| कैटलॉग संख्या | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| प्रमाणीकरण | CE |
| नमूनों | नासॉफिरिन्जियल स्वैब, ओरोफरीन्जियल स्वैब, एल्वोलर लैवेज द्रव, लार और थूक |
| लागू साधन | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P रीयल-टाइम PCR सिस्टम |
परीक्षण प्रक्रिया
1. न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण
निष्कर्षण किट के मैनुअल के अनुसार ऑपरेशन किया जाना चाहिए।
2. सिस्टम की तैयारी:
1) अभिकर्मक को बाहर निकालें और अभिकर्मक को पूरी तरह से पिघला लें।मिश्रण को पलटें और तुरंत सेंट्रीफ्यूज करें।एन परीक्षण प्रतिक्रियाएं (एन = परीक्षण किए जाने वाले नमूनों की संख्या + सकारात्मक नियंत्रण + नकारात्मक नियंत्रण + 1) प्रतिक्रिया प्रणालियों के लिए क्रमशः निम्नानुसार तैयार की जाती हैं।
| वोमपोनेंट्स | 1 प्रतिक्रिया प्रणाली के लिए वॉल्यूम | एन प्रतिक्रिया प्रणाली के लिए वॉल्यूम |
| न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रतिक्रिया समाधान मिक्स (A7793YF) | 18 µ एल | 18 μL * एन |
| एंजाइम मिश्रण | 2 µ एल | 2 μL * एन |
| कुल मात्रा | 20 µ l | 20 μL * एन |
2) प्रतिक्रिया वितरण: प्रतिक्रिया समाधान मिश्रित और सेंट्रीफ्यूग किया गया था, और प्रत्येक ट्यूब को प्रतिदीप्ति पीसीआर तंत्र के लिए उपयुक्त पीसीआर ट्यूब में 20μL की मात्रा में वितरित किया गया था।
3. लोड हो रहा है
निकाले गए नमूना न्यूक्लिक एसिड के 5μL, सकारात्मक नियंत्रण न्यूक्लिक एसिड और नकारात्मक नियंत्रण न्यूक्लिक एसिड को प्रतिक्रिया प्रणालियों में जोड़ा जाता है, और कुल प्रतिक्रिया मात्रा 25μL है।ट्यूब कवर को फास्ट करें और सेंट्रीफ्यूगेशन के कुछ सेकंड के बाद इसे प्रवर्धन परीक्षण क्षेत्र में ले जाएं।
4. पीसीआर प्रवर्धन परख
1) प्रवर्धन पहचान के लिए पीसीआर रिएक्शन ट्यूब को फ्लोरोसेंट पीसीआर प्रवर्धन उपकरण में डालें।
2) साइकिल पैरामीटर सेटिंग:
| कार्यक्रम | चक्रों की संख्या | तापमान | समय की प्रतिक्रिया | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | दस मिनट | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 सेकंड | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 सेकंड | |
| 60 ℃ | 30 सेकंड | प्रतिदीप्ति संग्रह | ||
3) जांच सेटिंग:
पता लगाने वाले चैनल क्रमशः ORF1ab, N जीन और E जीन, RNase P आंतरिक नियंत्रण के अनुरूप FAM, VIC, ROX और CY5 पर सेट हैं।एबीआई 7500 उपकरण के लिए "क्वेंचर डाई" और "निष्क्रिय संदर्भ" "कोई नहीं" पर सेट हैं।सकारात्मक नियंत्रण, नकारात्मक नियंत्रण और नमूना (अज्ञात) को उस क्रम में सेट करें जिसमें नमूने मेल खाते हैं, और "नमूना नाम" कॉलम में नमूना नाम सेट करें।
X-POCH16 के लिए, संचालन और कार्यक्रम इस प्रकार हैं:
1) सेल्फ-टेस्ट पूरा होने के बाद, ढक्कन खोलें और पीसीआर रिएक्शन ट्यूब्स को इंस्ट्रूमेंट में निर्दिष्ट स्थिति में रखें।
2) "विशेषज्ञ" का चयन करके प्रारंभ करें।विकल्प।"सभी" विकल्प का चयन करें या मैन्युअल रूप से स्क्रीन के बाईं ओर प्रतिक्रिया क्षेत्र का चयन करें।
3) "लोड" विकल्प चुनें;परीक्षण कार्यक्रम का चयन करें;"पूर्ण" और "भागो" पर क्लिक करें।कार्यक्रम को पूरा होने में 30min42s लगते हैं।
डिफ़ॉल्ट प्रोग्राम के डिटेक्शन चैनल क्रमशः FAM, VIC, ROX और CY5 पर सेट होते हैं, जो क्रमशः ORF1ab, N जीन और E Gene, RNase P आंतरिक नियंत्रण के अनुरूप होते हैं।
डिफ़ॉल्ट प्रोग्राम का चक्र पैरामीटर इस प्रकार है:
| कार्यक्रम | की संख्या | तापमान | समय की प्रतिक्रिया |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 मिनट |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30सेकंड |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 सेकेंड्स |
| 60 ℃ | 13सेकंड | रोशनी |
5. दहलीज सेटिंग
विश्लेषित छवि के अनुसार, प्रारंभ मान, आधार रेखा का अंतिम मान और थ्रेशोल्ड मान समायोजित करें (प्रारंभ मान और अंत मान को क्रमशः 3 और 15 पर सेट करने की अनुशंसा की जाती है, और नकारात्मक नियंत्रण के प्रवर्धन वक्र को समतल या समायोजित किया जाता है थ्रेशोल्ड लाइन से कम), नमूना सीटी मान का विश्लेषण स्वचालित रूप से प्राप्त करने के लिए विश्लेषण पर क्लिक करें।रिपोर्ट इंटरफ़ेस में परिणाम देखें।
6. गुणवत्ता नियंत्रण मानक
किट के प्रत्येक नियंत्रण को 'एस' वक्र के साथ निम्नलिखित आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए, अन्यथा प्रयोग अमान्य है।
| जांच चैनल | नकारात्मक नियंत्रण | सकारात्मक नियंत्रण |
| परिवार (ORF1ab) | नहीं सीटी | सीटी≤38 |
| विक (एन) | नहीं सीटी | सीटी≤38 |
| रॉक्स (ई) | नहीं सीटी | सीटी≤38 |
| सीवाई5(आरपी) | नहीं सीटी | सीटी≤38 |
【घटा मूल्य】
100 ऑरोफरीन्जियल स्वैब सैंपल और 100 थूक के सैंपल के परिणामों के अनुसार, और आरओसी कर्व विधि के साथ, इस किट के ओएफआर1एबी, एन जीन ई जीन का कट-ऑफ वैल्यू सीटी = 38 है
सामान्य प्रश्न
इस किट में, रीयल-टाइम फ्लोरोसेंट पीसीआर तकनीक के प्राइमर और प्रोब क्रमशः 2019-nCoV के ORF1ab, N और E जीन के संरक्षित और विशिष्ट क्षेत्रों के लिए डिज़ाइन किए गए हैं।पीसीआर प्रवर्धन के दौरान, जांच टेम्पलेट से बंध जाती है, और जांच के 5'-अंत रिपोर्टर समूह को टाक एंजाइम (5'→3' एक्सोन्यूक्लिएज गतिविधि) द्वारा साफ किया जाता है, जिससे एक फ्लोरोसेंट संकेत उत्पन्न करने के लिए शमन समूह से दूर चला जाता है। .रीयल-टाइम प्रवर्धन वक्र स्वचालित रूप से ज्ञात फ्लोरेसेंस सिग्नल के आधार पर प्लॉट किया जाता है, और नमूना सीटी मान की गणना की जाती है।FAM, VIC और ROX फ्लोरोफोरस को ORF1ab जीन, N जीन और E जीन जांच के लिए लेबल किया जाता है।एक परीक्षण का उपयोग करके, 2019-nCoV के उपरोक्त तीन जीनों का एक साथ गुणात्मक पता लगाया जा सकता है।
झूठे-नकारात्मक परिणामों से बचने के लिए नैदानिक नमूने संग्रह, हैंडलिंग, निष्कर्षण और आरटी-पीसीआर प्रक्रिया की निगरानी के लिए किट को आरएनएएस पी जीन को लक्षित करने वाले आंतरिक नियंत्रण के साथ प्रदान किया जाता है।आंतरिक नियंत्रण को CY5 फ्लोरोसेंट समूह के साथ लेबल किया गया है।
1. उपकरण सामान्य होने पर परीक्षण परिणामों का विश्लेषण और व्याख्या करें, और सकारात्मक नियंत्रण, नकारात्मक नियंत्रण और आंतरिक नियंत्रण परीक्षण परिणाम गुणवत्ता नियंत्रण मानक को पूरा करते हैं।
2. आंतरिक नियंत्रण का प्रवर्धन वक्र (CY5) एक विशिष्ट S वक्र और सीटी ≤ 38 दिखाता है, लक्ष्य जीन के परिणामों की व्याख्या निम्नलिखित शर्तों के अधीन है।
| जांच चैनल | लक्ष्य जीन के परिणामों की व्याख्या | ||
| एफएमए | विक (एन जीन) | रॉक्स (ई जीन) | |
| सीटी≤38 | सीटी≤38 | सीटी≤38 | एक विशिष्ट एस प्रवर्धन वक्र के साथ, सीटी मान ≤38 है, संबंधित लक्ष्य जीन सकारात्मक है। |
| 38 < सीटी < 40 | 38 < सीटी < 40 | 38 < सीटी < 40 | एक विशिष्ट एस प्रवर्धन वक्र के साथ, नमूने के संबंधित लक्ष्य जीन का फिर से परीक्षण करें। यदि विशिष्ट एस प्रवर्धन वक्र के साथ सीटी मान <40 है, तो संबंधित लक्ष्य जीन सकारात्मक है;यदि सीटी मान≥40, संबंधित लक्ष्य जीन ऋणात्मक है |
| सीटी≥40 | सीटी≥40 | सीटी≥40 | संबंधित लक्ष्य जीन नकारात्मक है |
2019-nCoV के परिणामों की व्याख्या:
ORF1ab, N जीन और E जीन के परिणामों के अनुसार व्याख्या इस प्रकार है:
1) यदि पहचाने गए जीनों में से दो या तीन जीन सकारात्मक हैं, तो 2019-nCoV सकारात्मक है;
2) यदि पहचाने गए जीनों में से केवल एक या कोई भी सकारात्मक नहीं है, तो 2019-nCoV नकारात्मक है।
नोट: धनात्मक नमूने का प्रवर्धन वक्र एक विशिष्ट S वक्र के साथ होना चाहिए।हालाँकि, यदि लक्ष्य सांद्रता बहुत अधिक है, तो आंतरिक मानक नियंत्रण को बढ़ाया नहीं जा सकता है और नमूने को सीधे सकारात्मक के रूप में आंका जा सकता है।यदि कोई दो लक्ष्य जीन Ct≤38 प्राप्त करते हैं, तो 2019-nCoV सकारात्मक है।यदि कोई दो लक्ष्य जीन Ct≥40 प्राप्त करते हैं, तो 2019-nCoV नकारात्मक है।यदि सीटी≥40, या कोई मूल्य नहीं दिखाता है, तो लक्ष्य जीन के परिणाम की व्याख्या नकारात्मक है।
3. यदि FAM, VIC, ROX और Cy5 चैनलों के सभी Ct मान 38 से अधिक हैं या कोई स्पष्ट विशिष्ट S प्रवर्धन वक्र नहीं है:
1) नमूने में पदार्थ है/हैं जो पीसीआर प्रतिक्रिया को रोकता है।पुन: परीक्षण के लिए नमूने को पतला करने की सिफारिश की जाती है।
2) न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की प्रक्रिया असामान्य है, इसलिए इसे फिर से निकालने का सुझाव दिया जाता है
पुन: परीक्षण के लिए न्यूक्लिक एसिड।
3) यह नमूना नमूनाकरण के समय योग्य नमूना नहीं था, या खराब हो गया था
परिवहन और भंडारण के दौरान।
वे 2 तरीके हैं जिनसे हम इस स्थितियों का पता लगा सकते हैं: एनएएटी और एंटीजन।
(लॉस एंजिल्स के सीडीसी से आता है)
