Termék leírás
Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) útmutatásai szerint az antigén-detektáló gyorsdiagnosztikai tesztek (Ag-RDR-ek) gyorsabb és olcsóbb módszert kínálnak az aktív SARS-CoV-2 fertőzés diagnosztizálására, mint a nukleinsav-amplifikációs tesztek (NAAT), és a WHO azt is javasolja. hogy a minimális teljesítménykövetelményeket teljesítő Ag-RDT-k felhasználhatók elsődleges esetek felderítésére, érintkezés nyomon követésére, járványkivizsgálás során, valamint a közösségekben előforduló betegségek megfigyelésére.
Jellemzők
● Átfogó:Egy tesztben három célgént észlel
● kompatibilis:Alkalmazkodó általános CY5, FAM, VIC/HEX csatornákkal rendelkező berendezésekhez.
● Kiváló teljesítmény:Nagy érzékenység és specifitás, LOD = 200 kópia/ml.
Műszaki paraméter
| Csomagolási specifikáció | 50 teszt/készlet, 100 teszt/készlet |
| Célrégió | ORF1ab, N, E |
| Alkalmazható minta | Köpet, Oropharyngealis tampon |
| Észlelési határ | 200 példány/ml |
| Teljes egybeesési arány | 99,55% |
| Ct érték (CV,%) | ≤5,0% |
| Pozitív egybeesési arány | 99,12% |
| Negatív véletlenek aránya | 100% |
| Tárolási feltételek és lejárati idő | -20±5°C-on tárolva, ideiglenesen 12 hónapig érvényes. |
| Belső irányítás | Igen |
| Katalógusszám | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Tanúsítvány | CE |
| Példányok | Orrgarat tampon, Oropharyngeális tampon, Alveoláris mosófolyadék, Nyál és köpet |
| Alkalmazható eszköz | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P valós idejű PCR rendszer |
Tesztelési eljárás
1. Nukleinsav-kivonás
A műveletet az elszívókészlet kézikönyve szerint kell végrehajtani.
2. Rendszer előkészítés:
1) Vegye ki a reagenst, és olvassa fel teljesen.Fordítsa meg a keveréket, és azonnal centrifugálja.N tesztreakciót (N = a vizsgálandó minták száma + pozitív kontroll + negatív kontroll + 1) készítünk el a reakciórendszerekhez, az alábbiak szerint.
| Vomponentss | 1 reakciórendszer térfogata | Az N reakciórendszer térfogata |
| Nukleinsavamplifikációs reakcióoldat keverék (A7793YF) | 18 µl | 18 µl * N |
| Enzim keverék | 2 µl | 2 µl * N |
| Teljes hangerő | 20 µl | 20 µl * N |
2) A reakcióeloszlás: A reakcióoldatot összekevertük és centrifugáltuk, és minden csövet 20 µl mennyiségben adagoltunk egy fluoreszcens PCR készülékhez alkalmas PCR csőbe.
3. Betöltés
Az extrahált minta nukleinsavat, pozitív kontroll nukleinsavat és negatív kontroll nukleinsavat 5 μl-t adunk a reakciórendszerekhez, és a teljes reakciótérfogat 25 µl.Rögzítse a cső fedelét, és néhány másodperces centrifugálás után vigye az amplifikációs vizsgálati területre.
4. PCR amplifikációs vizsgálat
1) Helyezze a PCR reakciócsövet a fluoreszcens PCR amplifikációs műszerbe az amplifikáció kimutatásához.
2) Ciklusparaméterek beállítása:
| Program | Ciklusok száma | Hőfok | Reakció idő | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 perc | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 mp | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 mp | |
| 60℃ | 30 mp | Fluoreszcencia Gyűjtemény | ||
3) Érzékelési beállítások:
Az észlelési csatornák FAM, VIC, ROX és CY5 értékre vannak beállítva, amelyek megfelelnek az ORF1ab, N gén és E gén, RNáz P belső kontrollnak.A "Quencher Dye" és a "Passive Reference" beállítása "Nincs" az ABI 7500 műszerhez.Állítsa be a pozitív kontrollt, a negatív kontrollt és a mintát (ismeretlen) a minták megfelelő sorrendjében, és állítsa be a minta nevét a „Sample Name” oszlopban.
Az X-POCH16 esetében a művelet és a program a következő:
1) Az önteszt befejezése után nyissa ki a fedelet, és helyezze a PCR reakciócsöveket a műszer kijelölt helyeire.
2) Kezdje a "Exper" kiválasztásával.választási lehetőség.Válassza az "Összes" lehetőséget, vagy válassza ki manuálisan a reakcióterületet a képernyő bal oldalán.
3) Válassza a "LOAD" opciót;válassza ki a tesztprogramot;kattintson a „KÉSZ” és a „RUN” gombra.A program végrehajtása 30 perc 42 másodpercet vesz igénybe.
Az Alapértelmezett program észlelési csatornái FAM, VIC, ROX és CY5 értékre vannak állítva, amelyek megfelelnek az ORF1ab, N gén és E Gene, RNase P belső kontrollnak.
Az alapértelmezett program ciklusparaméterei a következők:
| Program | Száma | Hőfok | Reakció idő |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 perc |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 mp |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 mp |
| 60℃ | 13 mp | Fluoreszcencia |
5. Küszöb beállítása
Az elemzett képnek megfelelően állítsa be a kezdőértéket, az alapvonal végértékét és a küszöbértéket (a kezdőértéket és a végértéket ajánlatos 3-ra, illetve 15-re állítani, a negatív kontroll erősítési görbéjét pedig laposra, ill. alacsonyabb, mint a küszöbvonal), kattintson az Elemzés lehetőségre, hogy az elemzés automatikusan megkapja a minta Ct értékét.Tekintse meg az eredményeket a Jelentés felületen.
6. Minőség-ellenőrzési szabvány
A készlet minden egyes kontrolljának meg kell felelnie az alábbi „S” görbével ellátott követelményeknek, ellenkező esetben a kísérlet érvénytelen.
| Észlelési csatornák | Negatív kontroll | Pozitív kontroll |
| FAM (ORF1ab) | Nincs Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Nincs Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Nincs Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Nincs Ct | Ct≤38 |
【Lezárási érték】
100 oropharyngealis tamponminta és 100 köpetminta eredményei alapján, valamint a ROC görbe módszerrel ennek a kitnek az OFR1ab, N gének E génjének Cut-off értéke Ct = 38
GYIK
Ebben a készletben a valós idejű fluoreszcens PCR technológia primerjeit és próbáit a 2019-nCoV ORF1ab, N és E génjének konzervált és specifikus régióihoz tervezték.A PCR-amplifikáció során a próba a templáthoz kötődik, és a próba 5'-végi riportercsoportját a Taq enzim hasítja (5'→3' exonukleáz aktivitás), ezáltal eltávolodva a kioltó csoporttól fluoreszcens jelet generál. .A valós idejű amplifikációs görbe a detektált fluoreszcenciajel alapján automatikusan felrajzolódik, és kiszámításra kerül a minta Ct értéke.A FAM, VIC és ROX fluoroforok ORF1ab gén, N gén és E gén próbákkal vannak megjelölve.Egy teszt használatával a 2019-nCoV fenti három génjének kvalitatív kimutatása egyidejűleg elvégezhető.
A készlethez tartozik egy belső kontroll, amely az RNáz P gént célozza meg a klinikai minták gyűjtésének, kezelésének, extrakciójának és RT-PCR folyamatának nyomon követésére a hamis negatív eredmények elkerülése érdekében.A belső kontroll egy CY5 fluoreszcens csoporttal van jelölve.
1. Elemezze és értelmezze a teszteredményeket, ha a műszer normális, és a pozitív kontroll, a negatív kontroll és a belső kontroll teszt eredménye megfelel a minőség-ellenőrzési szabványnak.
2. A belső kontroll (CY5) amplifikációs görbéje egy tipikus S görbét mutat, és Ct ≤ 38, a célgének eredményeit a következő feltételeknek vetjük alá.
| Észlelési csatornák | A célgének eredményeinek értelmezése | ||
| FMA | VIC (N gén) | ROX (E gén) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Egy tipikus S amplifikációs görbe esetén a Ct érték ≤38, a megfelelő célgén pozitív. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Egy tipikus S amplifikációs görbével tesztelje újra a minta megfelelő célgénjét. Ha a Ct érték ＜ 40 tipikus S amplifikációs görbével, akkor a megfelelő célgén pozitív;ha a Ct érték ≥40, akkor a megfelelő célgén negatív |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | A megfelelő célgén negatív |
A 2019-nCoV eredményeinek értelmezése:
Az ORF1ab, az N gén és az E gén eredményei szerint a következő értelmezés:
1) Ha a kimutatott gének KÉT vagy HÁROM génje pozitív, a 2019-nCoV pozitív;
2) Ha a kimutatott gének közül CSAK EGY vagy EGYIK sem pozitív, a 2019-nCoV negatív.
Megjegyzés: A pozitív minta amplifikációs görbéjének tipikus S görbével kell lennie.Ha azonban a célkoncentráció túl magas, előfordulhat, hogy a belső standard kontroll nem amplifikálódik, és a minta közvetlenül pozitívnak ítélhető meg.Ha bármelyik két célgén Ct≤38-at kap, a 2019-nCoV pozitív.Ha bármelyik két célgén Ct≥40-et kap, a 2019-nCoV negatív.Ha Ct≥40, vagy nem mutat értéket, az értelmezés szerint a célgén eredménye negatív.
3. Ha a FAM, VIC, ROX és Cy5 csatornák összes Ct értéke 38-nál nagyobb, vagy nincs nyilvánvaló tipikus S erősítési görbe:
1) A PCR-reakciót gátló anyag(ok) van(nak) a mintában.Az újbóli vizsgálathoz a minta hígítása javasolt.
2) A nukleinsav extrakció folyamata kóros, ezért javasolt az újbóli extrakció
nukleinsav újbóli vizsgálatra.
3) Ez a minta NEM volt minősített minta a mintavétel időpontjában, vagy leromlott
szállítás és tárolás során.
Kétféle módon észlelhetjük ezeket a helyzeteket: NAAT és Antigén.
(A Los Angeles-i CDC-től származik)
