פירוט המוצר
ארגון הבריאות העולמי (WHO) מנחה שבדיקות אבחון מהירות לגילוי אנטיגן (Ag-RDRs) יכולות להציע דרך מהירה וזולה יותר לאבחן זיהום SARS-CoV-2 פעיל מאשר בדיקות הגברה של חומצת גרעין (NAATs), ו-WHO גם ממליץ ניתן להשתמש ב-Ag-RDT העומדים בדרישות הביצועים המינימליות לזיהוי מקרים ראשוניים, מעקב אחר מגע, במהלך חקירות התפרצות וכדי לנטר מגמות של שכיחות מחלות בקהילות.
מאפיינים
● מקיף:שלושה גני מטרה מזהים בבדיקה אחת
● תואם:מותאם לציוד נפוץ עם ערוצי CY5, FAM, VIC/HEX.
● ביצועים מעולים:רגישות וסגוליות גבוהות, LOD = 200 עותקים/מ"ל.
פרמטר טכני
| מפרט אריזה | 50 מבחנים/ערכה, 100 מבחנים/ערכה |
| אזור היעד | ORF1ab, N, E |
| מדגם ישים | כיח, ספוגית אורופ-לוע |
| מגבלת זיהוי | 200 עותקים/מ"ל |
| שיעור צירוף מקרים כולל | 99.55% |
| ערך Ct (CV,%) | ≤5.0% |
| שיעור צירוף מקרים חיובי | 99.12% |
| שיעור צירוף מקרים שלילי | 100% |
| תנאי אחסון ותאריך תפוגה | מאוחסן ב-20±5℃, והוא תקף באופן זמני למשך 12 חודשים. |
| שליטה פנימית | כן |
| מספר קטלוגי | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| תעודה | CE |
| דגימות | ספוגית אף, ספוגית אורופ-לוע, נוזל שטיפה אלביולרית, רוק וליחה |
| מכשיר ישים | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, מערכת PCR בזמן אמת SLAN-96P |
נוהל בדיקה
1. מיצוי חומצת גרעין
הפעולה צריכה להתבצע בהתאם למדריך של ערכת החילוץ.
2. הכנת המערכת:
1) הוצא את המגיב והפשר את המגיב לחלוטין.הפוך את התערובת וצנטריפוגה מיד.N תגובות בדיקה (N = מספר הדגימות לבדיקה + ביקורת חיובית + ביקורת שלילית + 1) מוכנות למערכות תגובה, בהתאמה, כדלקמן.
| רכיבים | נפח עבור מערכת תגובה אחת | נפח עבור מערכת תגובה N |
| תערובת תגובת הגברה של חומצת גרעין (A7793YF) | 18 μL | 18 µL * N |
| תערובת אנזים | 2 μL | 2 μL * N |
| נפח כולל | 20 μL | 20 µL * N |
2) פיזור התגובה: תמיסת התגובה עורבבה וצנטריפוגה, וכל צינור הוצא בכמות של 20μL בצינור PCR המתאים למנגנון PCR פלואורסצנטי.
3. טעינה
5μL של חומצת הגרעין המחולצת, חומצת גרעין בקרה חיובית וחומצת גרעין בקרה שלילית מתווספים למערכות התגובה, ונפח התגובה הכולל הוא 25μL.הדק את מכסה הצינור והעבר אותו לאזור בדיקת ההגברה לאחר מספר שניות של צנטריפוגה.
4. Assay Amplification PCR
1) הכניסו את צינור התגובה של PCR למכשיר ההגברה הפלורסנטי של PCR לזיהוי הגברה.
2) הגדרת פרמטר מחזור:
| תכנית | מספר מחזורים | טֶמפֶּרָטוּרָה | זמן תגובה | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 דק | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 שניות | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 שניות | |
| 60℃ | 30 שניות | קולקציית פלואורסצנציה | ||
3) הגדרות זיהוי:
ערוצי הזיהוי מוגדרים ל-FAM, VIC ,ROX ו-CY5, בהתאמה לגן ORF1ab, N ו-E Gene, בקרה פנימית של RNase P, בהתאמה."Quencher Dye" ו-"Passive Reference" מוגדרים ל-"None" עבור מכשיר ABI 7500.הגדר את הבקרה החיובית, הבקרה השלילית והמדגם (לא ידוע) לפי סדר ההתאמה של הדגימות, והגדר את שם המדגם בעמודה "שם המדגם".
עבור X-POCH16, הפעולה והתוכנית הם כדלקמן:
1) לאחר השלמת הבדיקה העצמית, פתח את המכסה והכנס את צינורות התגובה של PCR למיקומים המיועדים במכשיר.
2) התחל בבחירת "מומחה".אוֹפְּצִיָה.בחר באפשרות "הכל" או בחר ידנית את אזור התגובה בצד שמאל של המסך.
3) בחר באפשרות "LOAD";בחר את תוכנית הבדיקה;לחץ על "DONE" ועל "RUN".התוכנית לוקחת 30 דקות 42 שניות.
ערוצי הזיהוי של תוכנית ברירת המחדל מוגדרים ל-FAM, VIC, ROX ו-CY5, בהתאמה לגן ORF1ab, N ו-E Gene, RNase P בקרה פנימית, בהתאמה.
פרמטר המחזור של תוכנית ברירת המחדל הוא כדלקמן:
| תכנית | מספר של | טֶמפֶּרָטוּרָה | זמן תגובה |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 דקות |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 שניות |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 שניות |
| 60℃ | 13 שניות | פלוּאוֹרסצֵנצִיָה |
5. הגדרת סף
בהתאם לתמונה המנותחת, התאם את ערך ההתחלה, ערך הסיום של הבסיס וערך הסף (מומלץ להגדיר את ערך ההתחלה וערך הסיום להיות 3 ו-15 בהתאמה, ועקומת ההגברה של הפקד השלילי מותאמת להיות שטוחה או נמוך מקו הסף), לחץ על ניתוח כדי לקבל אוטומטית את ערך ה-Ct לדוגמה.הצג את התוצאות בממשק הדוחות.
6. תקן בקרת איכות
כל שליטה בערכה חייבת לעמוד בדרישות הבאות עם עקומת 'S', אחרת הניסוי אינו חוקי.
| ערוצי זיהוי | שליטה שלילית | שליטה חיובית |
| FAM(ORF1ab) | אין Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | אין Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | אין Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | אין Ct | Ct≤38 |
【ערך חתוך】
על פי התוצאות של 100 דגימות ספוגית אורופ-לוע ו-100 דגימות כיח, ועם שיטת עקומת ROC, ערך ה-Cut-off של OFR1ab, N genes E Gene של ערכה זו הם Ct = 38
שאלות נפוצות
בערכה זו, פריימרים ובדיקות של טכנולוגיית PCR פלואורסצנטי בזמן אמת מיועדים לאזורים המשומרים והספציפיים של הגן ORF1ab, N ו-E של 2019-nCoV בהתאמה.במהלך הגברה של PCR, הבדיקה נקשרת לתבנית, וקבוצת הדיווח קצה 5' של הבדיקה מפוצלת על ידי האנזים Taq (פעילות אקסונוקלאז 5'→3'), ובכך מתרחקת מקבוצת המרווה ליצירת אות פלואורסצנטי. .עקומת ההגברה בזמן אמת משורטטת אוטומטית על סמך אות הקרינה שזוהה, וערך ה-Ct המדגם מחושב.פלואורופורים FAM, VIC ו-ROX מסומנים לגן ORF1ab, גן N ו-E.על ידי שימוש בבדיקה אחת, ניתן לבצע זיהוי איכותי של שלושת הגנים לעיל של 2019-nCoV בו זמנית.
הערכה מסופקת עם בקרה פנימית המכוונת לגן RNase P כדי לנטר איסוף דגימות קליניות, טיפול, מיצוי ותהליך RT-PCR כדי למנוע תוצאות שליליות שגויות.הבקרה הפנימית מסומנת בקבוצת פלורסנט CY5.
1. נתח ופרש את תוצאות הבדיקה כאשר המכשיר תקין, והבקרה החיובית, הבקרה השלילית ותוצאת הבדיקה הפנימית עומדות בתקן בקרת האיכות.
2. עקומת ההגברה של בקרה פנימית (CY5) מציגה עקומת S טיפוסית ו-Ct ≤ 38, פרשנות התוצאות של גנים מטרה כפופה לתנאים הבאים.
| ערוצי זיהוי | פירוש התוצאות של גנים מטרה | ||
| FMA | VIC (גן N) | ROX (גן E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | עם עקומת הגברה טיפוסית של S, ערך Ct הוא ≤38, גן המטרה המתאים חיובי. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | עם עקומת הגברה טיפוסית של S, בדוק שוב את גן המטרה המתאים של הדגימה. אם ערך Ct ＜ 40 עם עקומת הגברה טיפוסית של S, גן המטרה המתאים הוא חיובי;אם ערך Ct ≥40, גן המטרה המתאים הוא שלילי |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | גן המטרה המתאים הוא שלילי |
פרשנות התוצאות עבור 2019-nCoV:
על פי התוצאות של ORF1ab, גן N וגן E, הפרשנות כדלקמן:
1) אם שניים או שלושה גנים של הגנים שזוהו חיוביים, ה-2019-nCoV חיובי;
2) אם רק אחד או אף אחד מהגנים שהתגלו הוא חיובי, ה-2019-nCoV שלילי.
הערה: עקומת ההגברה של המדגם החיובית צריכה להיות עם עקומת S טיפוסית.עם זאת, אם ריכוז היעד גבוה מדי, ייתכן שהבקרה הסטנדרטית הפנימית לא תוגבר וניתן לשפוט ישירות את המדגם כחיובי.אם שניים מגנים יעד מקבלים Ct≤38, ה-2019-nCoV חיובי.אם שניים מגנים יעד מקבלים Ct≥40, ה-2019-nCoV שלילי.אם פרשנות Ct≥40, או ללא ערך, התוצאות של גן המטרה הן שליליות.
3. אם כל ערכי ה-Ct של ערוצי FAM, VIC, ROX ו-Cy5 הם יותר מ-38 או שאין עקומת הגברת S טיפוסית ברורה:
1) יש בדגימה חומר(ים) המעכבים את תגובת ה-PCR.מומלץ לדלל את הדגימה לצורך בדיקה חוזרת.
2) תהליך מיצוי חומצת הגרעין אינו תקין, ולכן מוצע לחלץ מחדש
חומצת גרעין לבדיקה חוזרת.
3) מדגם זה לא היה מדגם כשיר בזמן הדגימה, או מושפל
במהלך הובלה ואחסון.
הן 2 דרכים שבהן נוכל לזהות מצבים אלו: NAAT ואנטיגן.
(מגיע מה-CDC מלוס אנג'לס)
