Detail Produk
Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) nuntun supaya tes diagnostik cepet (Ag-RDR) pendeteksi antigen bisa menehi cara sing luwih cepet lan luwih murah kanggo diagnosa infeksi SARS-CoV-2 sing aktif tinimbang tes amplifikasi asam nukleat (NAAT), lan WHO uga nyaranake. sing Ag-RDTs ketemu syarat kinerja minimal bisa digunakake kanggo deteksi kasus utami, kontak nelusuri, sak investigasi wabah lan kanggo ngawasi tren kedadeyan penyakit ing komunitas.
Fitur
● Komprehensif:Telung gen target dideteksi ing siji tes
● kompatibel:Adaptif kanggo peralatan umum karo CY5, FAM, VIC / saluran HEX.
● Kinerja apik banget:Sensitivitas lan spesifisitas dhuwur, LOD = 200 salinan / ml.
Parameter teknis
| Spesifikasi Packing | 50 tes / kit, 100 tes / kit |
| Wilayah Sasaran | ORF1ab, N, E |
| Sampel sing ditrapake | Sputum, Swab Orofaringeal |
| Watesan Deteksi | 200 eksemplar/ml |
| Total Ketepakan Rate | 99,55% |
| Nilai Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Positif Ketepakan Rate | 99,12% |
| Rate Ketepakan Negatif | 100% |
| Kahanan Panyimpenan lan Tanggal Kadaluwarsa | Disimpen ing -20 ± 5 ℃, lan valid kanggo 12 sasi. |
| Kontrol Internal | ya wis |
| Nomer Katalog | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifikasi | CE |
| Spesimen | swab nasofaring, swab orofaringeal, cairan lavage alveolar, saliva dan sputum |
| Instrumen sing ditrapake | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, Sistem PCR Real-Time SLAN-96P |
Prosedur Tes
1. Ekstraksi Asam Nukleat
Operasi kudu ditindakake miturut manual kit ekstraksi.
2. Persiapan Sistem:
1) Copot reagen lan cairake reagen kanthi lengkap.Ganti campuran lan centrifuge langsung.Reaksi uji N (N = jumlah sampel sing bakal diuji + kontrol positif + kontrol negatif + 1) disiapake kanggo sistem reaksi, kaya ing ngisor iki.
| Vomponents | Volume kanggo 1 sistem reaksi | Volume sistem reaksi N |
| Solusi reaksi amplifikasi asam nukleat Campuran (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Campuran enzim | 2 µL | 2 µL * N |
| Total volume | 20 µL | 20 µL * N |
2) Distribusi reaksi: Solusi reaksi dicampur lan disentrifugasi, lan saben tabung disedhiyakake kanthi jumlah 20μL ing tabung PCR sing cocog kanggo piranti PCR fluoresensi.
3. Loading
5μL saka asam nukleat sampel sing diekstrak, asam nukleat kontrol positif lan asam nukleat kontrol negatif ditambahake menyang sistem reaksi, lan volume reaksi total 25μL.Cepet tutup tabung lan pindhah menyang area uji amplifikasi sawise sawetara detik centrifugation.
4. Pengujian Amplifikasi PCR
1) Pasang tabung reaksi PCR menyang instrumen amplifikasi PCR neon kanggo deteksi amplifikasi.
2) Setelan parameter siklus:
| Program | Jumlah siklus | Suhu | Wektu reaksi | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sek | |
| 60 ℃ | 30 sek | Koleksi Fluoresensi | ||
3) Setelan deteksi:
Saluran deteksi disetel menyang FAM, VIC, ROX lan CY5, sing cocog karo ORF1ab, gen N, lan E Gene, kontrol internal RNase P."Quencher Dye" lan "Referensi Pasif" disetel dadi "Ora Ana" kanggo instrumen ABI 7500.Setel Kontrol Positif, Kontrol Negatif, lan Sampel (Ora dingerteni) supaya conto cocog, lan setel jeneng conto ing kolom "Sample Name".
Kanggo X-POCH16, operasi lan program kaya ing ngisor iki:
1) Sawise tes mandiri rampung, bukak tutup lan lebokake tabung reaksi PCR menyang posisi sing wis ditemtokake ing instrumen.
2) Miwiti kanthi milih "Exper."pilihan.Pilih opsi "Kabeh" utawa kanthi manual pilih area reaksi ing sisih kiwa layar.
3) Pilih opsi "LOAD";pilih program tes;klik "DONE" lan "RUN".Program njupuk 30min42s kanggo ngrampungake.
Saluran deteksi program Default disetel menyang FAM, VIC, ROX lan CY5, cocog karo ORF1ab, gen N, lan E Gene, kontrol internal RNase P.
Parameter siklus program Default kaya ing ngisor iki:
| Program | Jumlah | Suhu | Wektu reaksi |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 sek |
| 60 ℃ | 13 sek | Fluoresensi |
5. Setelan Ambang
Miturut gambar sing dianalisis, setel nilai Mulai, Nilai Akhir saka Nilai Baseline lan Nilai Ambang (Nilai wiwitan lan nilai pungkasan dianjurake supaya disetel dadi 3 lan 15, lan kurva amplifikasi kontrol negatif disetel dadi rata utawa luwih murah tinimbang Garis batesan), klik Analisis kanggo entuk analisis kanthi otomatis nilai Ct sampel.Ndeleng asil ing antarmuka Report.
6. Standar Kontrol Kualitas
Saben kontrol kit kudu nyukupi syarat ing ngisor iki kanthi kurva 'S', yen ora, eksperimen kasebut ora sah.
| Saluran deteksi | Kontrol negatif | Kontrol positif |
| FAM(ORF1ab) | Ora Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ora Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ora Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ora Ct | Ct≤38 |
【Nilai Cut-off】
Miturut asil 100 sampel swab orofaringeal lan 100 sampel sputum, lan kanthi metode kurva ROC, nilai Cut-off saka OFR1ab, N gen E Gene kit iki yaiku Ct = 38
FAQ
Ing kit iki, primer lan probe teknologi PCR neon wektu nyata dirancang kanggo wilayah konservasi lan spesifik gen ORF1ab, N lan E saka 2019-nCoV.Sajrone amplifikasi PCR, probe ngiket cithakan, lan klompok reporter 5'-end probe dipecah dening enzim Taq (5'→3' aktivitas exonuclease), saéngga pindhah saka klompok quenching kanggo ngasilake sinyal neon. .Kurva amplifikasi wektu nyata kanthi otomatis diplot adhedhasar sinyal fluoresensi sing dideteksi, lan nilai Ct sampel diitung.Fluorofor FAM, VIC lan ROX diwenehi label gen ORF1ab, gen N lan probe gen E.Kanthi nggunakake siji tes, deteksi kualitatif saka telung gen 2019-nCoV ing ndhuwur bisa ditindakake bebarengan.
Kit kasebut diwenehake karo kontrol internal sing ngarahake gen RNase P kanggo ngawasi koleksi sampel klinis, penanganan, ekstraksi lan proses RT-PCR kanggo ngindhari asil negatif palsu.Kontrol internal diwenehi label karo klompok fluoresensi CY5.
1. Analisis lan interpretasi asil tes nalika instrumen normal, lan kontrol positif, kontrol negatif lan asil tes kontrol internal ketemu standar kontrol kualitas.
2. Kurva amplifikasi kontrol internal (CY5) nuduhake kurva S sing khas lan Ct ≤ 38, interpretasi asil gen target kena kahanan ing ngisor iki.
| Saluran deteksi | Interpretasi asil gen target | ||
| FMA | VIC (Gene N) | ROX (Gene E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Kanthi kurva amplifikasi S sing khas, nilai Ct yaiku ≤38, gen target sing cocog positif. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Kanthi kurva amplifikasi S khas, tes maneh gen target sing cocog saka sampel maneh. Yen nilai Ct < 40 kanthi kurva amplifikasi S sing khas, gen target sing cocog positif;yen nilai Ct≥40, gen target sing cocog negatif |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Gen target sing cocog yaiku negatif |
Interpretasi asil kanggo 2019-nCoV:
Miturut asil ORF1ab, gen N lan gen E, interpretasi kaya ing ngisor iki:
1) Yen loro utawa telu gen saka gen sing dideteksi positif, 2019-nCoV positif;
2) Yen mung siji utawa ora ana gen sing dideteksi positif, 2019-nCoV negatif.
Cathetan: Kurva amplifikasi sampel positif kudu nganggo kurva S sing khas.Nanging, yen konsentrasi target dhuwur banget, kontrol standar internal bisa uga ora digedhekake lan sampel bisa langsung dianggep positif.Yen ana loro gen target kena Ct≤38, 2019-nCoV positif.Yen ana loro gen target kena Ct≥40, 2019-nCoV negatif.Yen Ct≥40, utawa ora nuduhake nilai, interpretasi asil gen target negatif.
3. Yen kabeh nilai Ct saluran FAM, VIC, ROX lan Cy5 luwih saka 38 utawa ora ana kurva amplifikasi S khas sing jelas:
1) Ana / ana zat ing sampel sing nyandhet reaksi PCR.Disaranake kanggo ngencerake sampel kanggo dites maneh.
2) Proses ekstraksi asam nukleat ora normal, mula disaranake kanggo ekstrak maneh
asam nukleat kanggo tes maneh.
3) Sampel iki dudu sampel sing mumpuni nalika sampling, utawa degradasi
sajrone transportasi lan panyimpenan.
Iku 2 cara kita bisa ndeteksi kahanan iki: NAAT lan Antigen.
(Kaelih saka CDC Los Angeles)
