Produkto detalė
Pasaulio sveikatos organizacija (PSO) nurodo, kad antigenus aptinkantys greitieji diagnostikos testai (Ag-RDR) gali pasiūlyti greitesnį ir pigesnį būdą diagnozuoti aktyvią SARS-CoV-2 infekciją nei nukleorūgščių amplifikacijos testai (NAAT), o PSO taip pat rekomenduoja. kad Ag-RDT, atitinkantys minimalius veikimo reikalavimus, gali būti naudojami pirminiam atvejo aptikimui, kontaktų sekimui, protrūkio tyrimams ir ligų paplitimo bendruomenėse tendencijoms stebėti.
funkcijos
● Išsamus:Vieno testo metu aptinkami trys tiksliniai genai
● suderinama:Pritaikomas įprastai įrangai su CY5, FAM, VIC/HEX kanalais.
● Puikus našumas:Didelis jautrumas ir specifiškumas, LOD = 200 kopijų/ml.
Techninis parametras
| Pakuotės specifikacija | 50 testų/komplektas, 100 testų/komplektas |
| Tikslinis regionas | ORF1ab, N, E |
| Taikomas pavyzdys | Skreplių, burnos ir ryklės tepinėlis |
| Aptikimo riba | 200 egz./ml |
| Bendras sutapimų rodiklis | 99,55 % |
| Ct vertė (CV, %) | ≤5,0 % |
| Teigiamų sutapimų rodiklis | 99,12 % |
| Neigiamas sutapimų rodiklis | 100 % |
| Laikymo sąlygos ir galiojimo laikas | Laikyti -20±5 ℃ temperatūroje ir galioja laikinai 12 mėnesių. |
| Vidinė kontrolė | Taip |
| Katalogo numeris | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifikavimas | CE |
| Pavyzdžiai | Nosiaryklės tamponas, burnos ir ryklės tamponas, alveolių plovimo skystis, seilės ir skrepliai |
| Taikoma priemonė | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P realaus laiko PGR sistema |
Bandymo procedūra
1. Nukleino rūgščių ekstrahavimas
Naudojimas turi būti atliekamas pagal ištraukimo rinkinio vadovą.
2. Sistemos paruošimas:
1) Išimkite reagentą ir visiškai atšildykite.Apverskite mišinį ir nedelsdami centrifuguokite.N bandymo reakcijų (N = tirtinų mėginių skaičius + teigiama kontrolė + neigiama kontrolė + 1) atitinkamai paruošiama reakcijų sistemoms taip.
| Vomponentss | Tūris 1 reakcijos sistemai | N reakcijos sistemos tūris |
| Nukleino rūgšties amplifikacijos reakcijos tirpalo mišinys (A7793YF) | 18 µl | 18 µl * N |
| Fermentų mišinys | 2 µl | 2 µL * N |
| Bendras tūris | 20 µl | 20 µl * N |
2) Reakcijos pasiskirstymas: reakcijos tirpalas buvo sumaišytas ir centrifuguojamas, o kiekvienas mėgintuvėlis buvo išpilstytas po 20 μL į PGR mėgintuvėlį, tinkamą fluorescenciniam PGR aparatui.
3. Pakrovimas
Į reakcijos sistemas įpilama 5 μL ekstrahuoto mėginio nukleorūgšties, teigiamos kontrolinės nukleorūgšties ir neigiamos kontrolinės nukleino rūgšties, o bendras reakcijos tūris yra 25 μL.Pritvirtinkite mėgintuvėlio dangtelį ir po kelių sekundžių centrifugavimo perkelkite jį į amplifikacijos tyrimo sritį.
4. PGR amplifikacijos tyrimas
1) Įdėkite PGR reakcijos vamzdelį į fluorescencinį PGR amplifikacijos instrumentą, kad nustatytumėte amplifikaciją.
2) Ciklo parametrų nustatymas:
| Programa | Ciklų skaičius | Temperatūra | Reakcijos laikas | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sek | |
| 60 ℃ | 30 sek | Fluorescencinė kolekcija | ||
3) Aptikimo nustatymai:
Aptikimo kanalai nustatyti į FAM, VIC, ROX ir CY5, atitinkančius atitinkamai ORF1ab, N geną ir E Gene, RNazės P vidinę kontrolę.„Quencher Dye“ ir „Passive Reference“ ABI 7500 prietaisui nustatyti kaip „Nėra“.Nustatykite teigiamą kontrolę, neigiamą kontrolę ir mėginį (nežinomas) tokia tvarka, kuria mėginiai atitinka, ir stulpelyje „Sample Name“ nustatykite mėginio pavadinimą.
X-POCH16 operacijos ir programos yra tokios:
1) Baigę savitikrą atidarykite dangtį ir įstatykite PGR reakcijos mėgintuvėlius į nurodytas instrumento vietas.
2) Pradėkite pasirinkdami „Exper“.variantas.Pasirinkite parinktį „Visi“ arba rankiniu būdu pasirinkite reakcijos sritį kairėje ekrano pusėje.
3) Pasirinkite parinktį „Įkelti“;pasirinkti testavimo programą;spustelėkite „DONE“ ir „RUN“.Programa užbaigiama per 30 min.42s.
Numatytosios programos aptikimo kanalai yra nustatyti į FAM, VIC, ROX ir CY5, atitinkančius atitinkamai ORF1ab, N geną ir E Gene, RNase P vidinę kontrolę.
Numatytosios programos ciklo parametrai yra tokie:
| Programa | Skaičius | Temperatūra | Reakcijos laikas |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 sek |
| 60 ℃ | 13 sek | Fluorescencija |
5. Slenksčio nustatymas
Pagal analizuojamą vaizdą sureguliuokite pradinę vertę, pradinę vertę ir slenksčio pabaigą (pradžios ir pabaigos vertę rekomenduojama nustatyti atitinkamai 3 ir 15, o neigiamos kontrolės stiprinimo kreivė sureguliuojama taip, kad ji būtų plokščia arba mažesnė už slenksčio eilutę), spustelėkite Analizė, kad automatiškai gautumėte analizės mėginio Ct vertę.Peržiūrėkite rezultatus ataskaitos sąsajoje.
6. Kokybės kontrolės standartas
Kiekvienas rinkinio kontrolinis elementas turi atitikti toliau nurodytus reikalavimus su „S“ kreive, kitaip eksperimentas negalioja.
| Aptikimo kanalai | Neigiama kontrolė | Teigiamas valdymas |
| FAM (ORF1ab) | Nr Ct | Ct≤38 |
| VIC (N) | Nr Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Nr Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | Nr Ct | Ct≤38 |
【Ribinė vertė】
Remiantis 100 burnos ir ryklės tepinėlių mėginių ir 100 skreplių mėginių rezultatais bei naudojant ROC kreivės metodą, šio rinkinio OFR1ab, N genų E geno ribinė vertė yra Ct = 38
DUK
Šiame rinkinyje realaus laiko fluorescencinės PGR technologijos pradmenys ir zondai yra sukurti atitinkamai konservuotiems ir specifiniams 2019-nCoV ORF1ab, N ir E geno regionams.PGR amplifikacijos metu zondas prisijungia prie šablono, o zondo 5'-galo reporterių grupė yra suskaidoma Taq fermento (5'→3' egzonukleazės aktyvumas), tokiu būdu tolstant nuo gesinimo grupės, kad būtų sukurtas fluorescencinis signalas. .Realaus laiko stiprinimo kreivė automatiškai nubrėžiama remiantis aptiktu fluorescencijos signalu ir apskaičiuojama mėginio Ct vertė.FAM, VIC ir ROX fluoroforai yra pažymėti ORF1ab geno, N geno ir E geno zondais.Naudojant vieną testą, vienu metu galima kokybiškai aptikti pirmiau nurodytus tris 2019-nCoV genus.
Rinkinyje yra vidinė kontrolė, nukreipta į RNase P geną, kad būtų galima stebėti klinikinių mėginių paėmimą, tvarkymą, ekstrahavimą ir RT-PGR procesą, kad būtų išvengta klaidingai neigiamų rezultatų.Vidinė kontrolė pažymėta CY5 fluorescencine grupe.
1. Išanalizuokite ir interpretuokite tyrimo rezultatus, kai prietaisas yra normalus, o teigiama kontrolė, neigiama kontrolė ir vidaus kontrolės testo rezultatai atitinka kokybės kontrolės standartą.
2. Vidinės kontrolės amplifikacijos kreivė (CY5) rodo tipinę S kreivę ir Ct ≤ 38, interpretuojant tikslinių genų rezultatus, taikomos šios sąlygos.
| Aptikimo kanalai | Tikslinių genų rezultatų interpretavimas | ||
| FMA | VIC (N genas) | ROX (E genas) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Esant tipinei S amplifikacijos kreivei ， Ct reikšmė yra ≤38, atitinkamas tikslinis genas yra teigiamas. |
| 38＜ Ct ＜ 40 | 38＜ Ct ＜ 40 | 38＜ Ct ＜ 40 | Naudodami tipinę S amplifikacijos kreivę, dar kartą išbandykite atitinkamą mėginio tikslinį geną. Jei Ct reikšmė＜ 40 su tipine S amplifikacijos kreive, atitinkamas tikslinis genas yra teigiamas;jei Ct reikšmė ≥40, atitinkamas tikslinis genas yra neigiamas |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Atitinkamas tikslinis genas yra neigiamas |
2019-nCoV rezultatų interpretacija:
Pagal ORF1ab, N geno ir E geno rezultatus interpretuojama taip:
1) Jei DU arba TRYS aptiktų genų genai yra teigiami, 2019-nCoV yra teigiamas;
2) Jei TIK VIENAS arba NĖ vienas iš aptiktų genų yra teigiamas, 2019-nCoV yra neigiamas.
Pastaba: teigiamo mėginio amplifikacijos kreivė turi atitikti tipinę S kreivę.Tačiau jei tikslinė koncentracija yra per didelė, vidinio standarto kontrolė gali būti nepadauginta ir mėginys gali būti tiesiogiai įvertintas kaip teigiamas.Jei bet kurie du tiksliniai genai gauna Ct≤38, 2019-nCoV yra teigiamas.Jei bet kurie du tiksliniai genai gauna Ct≥40, 2019-nCoV yra neigiamas.Jei Ct≥40 arba nerodo jokios reikšmės, interpretacija tikslinio geno rezultatai yra neigiami.
3. Jei visos FAM, VIC, ROX ir Cy5 kanalų Ct reikšmės yra didesnės nei 38 arba nėra akivaizdžios tipinės S stiprinimo kreivės:
1) Mėginyje yra medžiagos (-ų), kurios (-ių) slopina PGR reakciją.Pakartotiniam tyrimui mėginį rekomenduojama atskiesti.
2) Nukleino rūgšties ekstrahavimo procesas yra nenormalus, todėl siūloma iš naujo ekstrahuoti
nukleino rūgšties pakartotiniam tyrimui.
3) Mėginio ėmimo metu šis pavyzdys NĖRA kvalifikuotas arba sugadintas
transportavimo ir sandėliavimo metu.
Tai yra 2 būdai, kaip galime aptikti šias situacijas: NAAT ir antigenas.
(gaunama iš Los Andželo CDC)
