Produkta informācija
Pasaules Veselības organizācija (PVO) norāda, ka antigēnu noteikšanas ātrās diagnostikas testi (Ag-RDR) var piedāvāt ātrāku un lētāku veidu aktīvas SARS-CoV-2 infekcijas diagnosticēšanai nekā nukleīnskābes amplifikācijas testi (NAAT), un PVO arī iesaka ka Ag-RDT, kas atbilst minimālajām veiktspējas prasībām, var izmantot primārā gadījuma noteikšanai, kontaktu izsekošanai, uzliesmojuma izmeklēšanas laikā un slimību sastopamības tendenču uzraudzībai kopienās.
Iespējas
● Visaptveroša:Vienā testā tiek atklāti trīs mērķa gēni
● saderīgs:Pielāgojams parastajam aprīkojumam ar CY5, FAM, VIC/HEX kanāliem.
● Lieliska veiktspēja:Augsta jutība un specifiskums, LOD = 200 kopijas/ml.
Tehniskais parametrs
| Iepakojuma specifikācija | 50 testi/komplekts, 100 testi/komplekts |
| Mērķa reģions | ORF1ab, N, E |
| Piemērojamais paraugs | Krēpas, mutes dobuma un rīkles uztriepes |
| Atklāšanas robeža | 200 eks./ml |
| Kopējais sakritību rādītājs | 99,55% |
| Ct vērtība (CV,%) | ≤5,0% |
| Pozitīvs sakritības rādītājs | 99,12% |
| Negatīvo sakritību rādītājs | 100% |
| Uzglabāšanas nosacījumi un derīguma termiņš | Uzglabāts -20±5℃ temperatūrā un ir provizoriski derīgs 12 mēnešus. |
| Iekšējā kontrole | Jā |
| Kataloga numurs | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifikācija | CE |
| Eksemplāri | Nazofarneksa uztriepe, Orofaringeāla uztriepe, Alveolārais skalošanas šķidrums, Siekalas un krēpas |
| Piemērojamais instruments | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P reāllaika PCR sistēma |
Pārbaudes procedūra
1. Nukleīnskābju ekstrakcija
Darbība jāveic saskaņā ar ekstrakcijas komplekta rokasgrāmatu.
2. Sistēmas sagatavošana:
1) Izņemiet reaģentu un pilnībā atkausējiet reaģentu.Apgrieziet maisījumu un nekavējoties centrifugējiet.N testa reakcijas (N = pārbaudāmo paraugu skaits + pozitīvā kontrole + negatīvā kontrole + 1) reakcijas sistēmām sagatavo attiecīgi šādi.
| Vomponentss | Tilpums 1 reakcijas sistēmai | Tilpums N reakcijas sistēmai |
| Nukleīnskābes amplifikācijas reakcijas šķīduma maisījums (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Enzīmu maisījums | 2 µL | 2 µL * N |
| Kopējais apjoms | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reakcijas sadalījums: reakcijas šķīdums tika sajaukts un centrifugēts, un katra caurule tika izdalīta 20 μL daudzumā PCR mēģenē, kas piemērota fluorescences PCR aparātam.
3. Iekraušana
Reakcijas sistēmām pievieno 5 μL ekstrahētā parauga nukleīnskābes, pozitīvās kontroles nukleīnskābes un negatīvās kontroles nukleīnskābes, un kopējais reakcijas tilpums ir 25 μL.Piestipriniet mēģenes vāku un pēc dažām centrifugēšanas sekundēm pārvietojiet to uz amplifikācijas testa zonu.
4. PCR amplifikācijas tests
1) Ievietojiet PCR reakcijas cauruli fluorescējošā PCR amplifikācijas instrumentā, lai noteiktu pastiprinājumu.
2) Cikla parametru iestatīšana:
| Programma | Ciklu skaits | Temperatūra | Reakcijas laiks | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sek | |
| 60℃ | 30 sek | Fluorescences kolekcija | ||
3) Noteikšanas iestatījumi:
Noteikšanas kanāli ir iestatīti uz FAM, VIC, ROX un CY5, kas atbilst attiecīgi ORF1ab, N gēnam un E gēnam, RNase P iekšējai kontrolei.“Quencher Dye” un “Passive Reference” ir iestatīti uz “None” ABI 7500 instrumentam.Iestatiet pozitīvo kontroli, negatīvo kontroli un paraugu (nezināms) tādā secībā, kādā paraugi atbilst, un kolonnā “Parauga nosaukums” iestatiet parauga nosaukumu.
X-POCH16 darbība un programma ir šāda:
1) Kad pašpārbaude ir pabeigta, atveriet vāku un ievietojiet PCR reakcijas mēģenes paredzētajās pozīcijās instrumentā.
2) Sāciet, izvēloties "Eksperts".opciju.Atlasiet opciju "Visi" vai manuāli atlasiet reakcijas apgabalu ekrāna kreisajā pusē.
3) Izvēlieties opciju "LOAD";izvēlieties testa programmu;noklikšķiniet uz "GATAVS" un "RUN".Programmas pabeigšana aizņem 30 min42 s.
Noklusējuma programmas noteikšanas kanāli ir iestatīti uz FAM, VIC, ROX un CY5, kas atbilst attiecīgi ORF1ab, N gēnam un E Gene, RNase P iekšējai kontrolei.
Noklusējuma programmas cikla parametri ir šādi:
| Programma | Skaits | Temperatūra | Reakcijas laiks |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 sek |
| 60℃ | 13 sek | Fluorescence |
5. Sliekšņa iestatījums
Atbilstoši analizētajam attēlam noregulējiet sākuma vērtību, sākuma vērtību un sliekšņa vērtību (sākuma vērtību un beigu vērtību ieteicams iestatīt attiecīgi uz 3 un 15, un negatīvās kontroles pastiprināšanas līkni noregulē tā, lai tā būtu plakana vai zemāka par sliekšņa līniju), noklikšķiniet uz Analīze, lai automātiski iegūtu analīzes parauga Ct vērtību.Skatiet rezultātus ziņojuma saskarnē.
6. Kvalitātes kontroles standarts
Katrai komplekta kontrolei jāatbilst tālāk norādītajām prasībām ar “S” līkni, pretējā gadījumā eksperiments ir nederīgs.
| Atklāšanas kanāli | Negatīvā kontrole | Pozitīva kontrole |
| FAM (ORF1ab) | Nav Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Nav Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Nav Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Nav Ct | Ct≤38 |
【Izslēgšanas vērtība】
Saskaņā ar 100 mutes dobuma un rīkles uztriepes paraugu un 100 krēpu paraugu rezultātiem, kā arī ar ROC līknes metodi šī komplekta OFR1ab, N gēnu E gēna robežvērtība ir Ct = 38.
FAQ
Šajā komplektā reāllaika fluorescējošās PCR tehnoloģijas primeri un zondes ir izstrādātas attiecīgi 2019-nCoV ORF1ab, N un E gēna konservētajiem un specifiskajiem reģioniem.PCR amplifikācijas laikā zonde saistās ar veidni, un zondes 5'-gala reportieru grupa tiek atšķelta ar Taq enzīmu (5'→3' eksonukleāzes aktivitāte), tādējādi attālinoties no slāpējošās grupas, lai radītu fluorescējošu signālu. .Reālā laika pastiprināšanas līkne tiek automātiski uzzīmēta, pamatojoties uz konstatēto fluorescences signālu, un tiek aprēķināta parauga Ct vērtība.FAM, VIC un ROX fluorofori ir marķēti ar ORF1ab gēna, N gēna un E gēna zondēm.Izmantojot vienu testu, vienlaikus var veikt kvalitatīvu iepriekšminēto trīs 2019-nCoV gēnu noteikšanu.
Komplekts ir nodrošināts ar iekšējo kontroli, kas vērsta uz RNase P gēnu, lai uzraudzītu klīnisko paraugu savākšanu, apstrādi, ekstrakciju un RT-PCR procesu, lai izvairītos no viltus negatīviem rezultātiem.Iekšējā kontrole ir marķēta ar CY5 fluorescējošu grupu.
1. Analizējiet un interpretējiet testa rezultātus, ja instruments ir normāls un pozitīvās kontroles, negatīvās kontroles un iekšējās kontroles testa rezultāts atbilst kvalitātes kontroles standartam.
2. Iekšējās kontroles amplifikācijas līkne (CY5) parāda tipisku S līkni un Ct ≤ 38, interpretējot mērķa gēnu rezultātus, tiek pakļauti šādiem nosacījumiem.
| Atklāšanas kanāli | Mērķa gēnu rezultātu interpretācija | ||
| FMA | VIC (N gēns) | ROX (E gēns) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Ar tipisku S amplifikācijas līkni ， Ct vērtība ir ≤38, atbilstošais mērķa gēns ir pozitīvs. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Izmantojot tipisku S amplifikācijas līkni, vēlreiz pārbaudiet atbilstošo parauga mērķa gēnu. Ja Ct vērtība＜ 40 ar tipisku S amplifikācijas līkni, atbilstošais mērķa gēns ir pozitīvs;ja Ct vērtība ≥40, atbilstošais mērķa gēns ir negatīvs |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Atbilstošais mērķa gēns ir negatīvs |
2019-nCoV rezultātu interpretācija:
Saskaņā ar ORF1ab, N gēna un E gēna rezultātiem interpretācija ir šāda:
1) Ja DIVI vai TRĪS atklāto gēnu gēni ir pozitīvi, 2019-nCoV ir pozitīvs;
2) Ja TIKAI VIENS vai NEVIENS no atklātajiem gēniem ir pozitīvs, 2019-nCoV ir negatīvs.
Piezīme. Pozitīvā parauga pastiprināšanas līknei jābūt ar tipisku S līkni.Tomēr, ja mērķa koncentrācija ir pārāk augsta, iekšējā standarta kontrole var netikt pastiprināta un paraugu var tieši novērtēt kā pozitīvu.Ja kādi divi no mērķa gēniem saņem Ct≤38, 2019-nCoV ir pozitīvs.Ja kādi divi no mērķa gēniem saņem Ct ≥40, 2019-nCoV ir negatīvs.Ja Ct≥40 vai neuzrāda vērtību, interpretācija mērķa gēna rezultāti ir negatīvi.
3. Ja visas FAM, VIC, ROX un Cy5 kanālu Ct vērtības ir lielākas par 38 vai nav acīmredzamas tipiskas S pastiprināšanas līknes:
1) Paraugā ir viela(-as), kas kavē PCR reakciju.Ieteicams atšķaidīt paraugu atkārtotai pārbaudei.
2) Nukleīnskābju ekstrakcijas process ir neparasts, tāpēc ir ieteicams atkārtoti ekstrahēt
nukleīnskābe atkārtotai pārbaudei.
3) Šis paraugs paraugu ņemšanas laikā NEBIJA kvalificēts vai degradēts
transportēšanas un uzglabāšanas laikā.
Šie ir divi veidi, kā mēs varam noteikt šīs situācijas: NAAT un Antigēns.
(Nāk no Losandželosas CDC)
