Детали за производот
Светската здравствена организација (СЗО) наведува дека брзите дијагностички тестови за откривање антигени (Ag-RDRs) можат да понудат побрз и поевтин начин за дијагностицирање на активната инфекција SARS-CoV-2 од тестовите за засилување на нуклеинската киселина (NAATs), а СЗО исто така препорачува дека Ag-RDT кои ги исполнуваат минималните барања за изведба може да се користат за примарно откривање на случаи, следење контакти, за време на истраги за појава на епидемии и за следење на трендовите на инциденца на болеста во заедниците.
Карактеристики
● Сеопфатно:Во еден тест се откриваат три целни гени
● компатибилен:Прилагодлив на заедничка опрема со CY5, FAM, VIC/HEX канали.
● Одлични перформанси:Висока чувствителност и специфичност, LOD = 200 копии/ml.
Технички параметар
| Спецификација за пакување | 50 тестови/комплет, 100 тестови/комплет |
| Целен регион | ORF1ab, N, E |
| Применлив примерок | Спутум, Орофарингеален брис |
| Граница на откривање | 200 примероци/мл |
| Вкупно стапка на случајност | 99,55% |
| Ct вредност (CV,%) | ≤5,0% |
| Позитивна стапка на случајност | 99,12% |
| Негативна стапка на случајност | 100% |
| Услови на чување и рок на употреба | Се чува на -20±5℃ и важи привремено 12 месеци. |
| Внатрешна контрола | Да |
| Број на каталог | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Сертификација | CE |
| Примероци | Назофарингеален брис, Орофарингеален брис, Течност за алвеоларна лаважа, Плунка и спутум |
| Применлив инструмент | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P PCR систем во реално време |
Процедура за тестирање
1. Екстракција на нуклеинска киселина
Операцијата треба да се изврши според прирачникот за комплет за екстракција.
2. Подготовка на системот:
1) Извадете го реагенсот и целосно одмрзнете го.Превртете ја смесата и веднаш центрифугирајте.N тест реакции (N = број на примероци што треба да се тестираат + позитивна контрола + негативна контрола + 1) се подготвуваат за системи за реакција, соодветно, на следниов начин.
| Vomponentss | Волумен за 1 систем за реакција | Волумен за N реакција систем |
| Раствор за реакција за засилување на нуклеинска киселина Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Ензимска мешавина | 2 µL | 2 µL * N |
| Вкупен волумен | 20 µL | 20 µL * N |
2) Распределба на реакцијата: Реакциониот раствор беше измешан и центрифугиран, и секоја епрувета беше распределена во количина од 20 μL во ПЦР епрувета погодна за апарат за флуоресценција PCR.
3. Се вчитува
Во реакционите системи се додаваат 5 μL од извлечениот примерок нуклеинска киселина, позитивна контролна нуклеинска киселина и негативна контролна нуклеинска киселина, а вкупниот волумен на реакцијата е 25 μL.Прицврстете го капакот на цевката и преместете го во областа за тестирање за засилување по неколку секунди центрифугирање.
4. Анализа за засилување на PCR
1) Ставете ја цевката за реакција на PCR во флуоресцентниот PCR инструмент за засилување за детекција на засилување.
2) Поставување параметар за циклус:
| Програма | Број на циклуси | Температура | Време на реакција | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 мин | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 сек | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 сек | |
| 60 ℃ | 30 сек | Флуоресценција колекција | ||
3) Поставки за откривање:
Каналите за откривање се поставени на FAM, VIC, ROX и CY5, што одговараат на ORF1ab, N ген и E Gene, RNase P внатрешна контрола, соодветно.„Quencher Dye“ и „Passive Reference“ се поставени на „None“ за инструментот ABI 7500.Поставете ги позитивната контрола, негативната контрола и примерокот (непознат) по редоследот по кој одговараат примероците и поставете го името на примерокот во колоната „Име на примерокот“.
За X-POCH16, операцијата и програмата се како што следува:
1) Откако ќе заврши само-тестирањето, отворете го капакот и ставете ги цевките за реакција на PCR на назначените позиции во инструментот.
2) Започнете со избирање на „Exper“.опција.Изберете ја опцијата „Сите“ или рачно изберете ја областа за реакција на левата страна на екранот.
3) Изберете ја опцијата „LOAD“;изберете ја програмата за тестирање;кликнете на „ГОТОВО“ и „СТАВИ“.За да се заврши програмата се потребни 30 мин. 42 секунди.
Каналите за откривање на стандардната програма се поставени на FAM, VIC, ROX и CY5, што одговараат на ORF1ab, N ген и E Gene, RNase P внатрешна контрола, соодветно.
Параметарот на циклусот на стандардната програма се како што следува:
| Програма | Број на | Температура | Време на реакција |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 мин |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 сек |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 секунди |
| 60 ℃ | 13 сек | Флуоресценција |
5. Поставување на праг
Според анализираната слика, прилагодете ја почетната вредност, крајната вредност на основната линија и вредноста на прагот (почетната и крајната вредност се препорачува да се постават на 3 и 15 соодветно, а кривата на засилување на негативната контрола е прилагодена да биде рамна или пониско од прагот Линија), кликнете на Анализа за автоматски да ја добиете анализата примерокот Ct вредност.Погледнете ги резултатите во интерфејсот за Извештај.
6. Стандард за контрола на квалитет
Секоја контрола на комплетот мора да ги исполнува следните барања со крива „S“, во спротивно експериментот е неважечки.
| Канали за откривање | Негативна контрола | Позитивна контрола |
| FAM (ORF1ab) | Не Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Не Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Не Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | Не Ct | Ct≤38 |
【Крајна вредност】
Според резултатите од 100 примероци од орофарингеален брис и 100 примероци од спутум, и со методот на крива ROC, Cut-off вредноста на генот OFR1ab, N гени E од овој комплет е Ct = 38
Најчесто поставувани прашања
Во овој комплет, прајмери и сонди на флуоресцентна PCR технологија во реално време се дизајнирани за конзервираните и специфичните региони на генот ORF1ab, N и E на 2019-nCoV соодветно.За време на PCR засилување, сондата се врзува за шаблонот, а известувачката група од 5'-крајот на сондата се расцепува со Taq ензимот (5'→3' егзонуклеазна активност), со што се оддалечува од групата за гаснење за да генерира флуоресцентен сигнал .Кривата на засилување во реално време автоматски се црта врз основа на откриениот флуоресцентен сигнал и се пресметува вредноста на примерокот Ct.Флуорофорите FAM, VIC и ROX се означени со генот ORF1ab, генот N и Е генските сонди.Со користење на еден тест, квалитативното откривање на горенаведените три гени на 2019-nCoV може да се изврши истовремено.
Комплетот е обезбеден со внатрешна контрола насочена кон генот RNase P за следење на собирањето, ракувањето, екстракцијата и процесот на RT-PCR клинички примероци за да се избегнат лажно-негативни резултати.Внатрешната контрола е означена со флуоресцентна група CY5.
1. Анализирајте ги и толкувајте ги резултатите од тестот кога инструментот е нормален, а позитивната контрола, негативната контрола и резултатот од тестот за внатрешна контрола ги исполнуваат стандардите за контрола на квалитетот.
2. Кривата на засилување на внатрешната контрола (CY5) покажуваат типична крива S и Ct ≤ 38, толкувањето на резултатите од целните гени е подложено на следните услови.
| Канали за откривање | Толкување на резултатите од целните гени | ||
| FMA | VIC (N ген) | РОКС (Е ген) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Со типична крива на засилување S, вредноста на Ct е≤38, соодветниот целен ген е позитивен. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Со типична крива на засилување S, повторно тестирајте го соодветниот целен ген на примерокот. Ако вредноста на Ct＜ 40 со типична крива на засилување S, соодветниот целен ген е позитивен;ако вредноста на Ct≥40, соодветниот целен ген е негативен |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Соодветниот целен ген е негативен |
Толкување на резултатите за 2019-nCoV:
Според резултатите од ORF1ab, генот N и генот Е, толкувањето како што следува:
1) Ако ДВА или ТРИ гени од откриените гени се позитивни, 2019-nCoV е позитивен;
2) Ако САМО ЕДЕН или НИТУ НИЕДЕН од откриените гени е позитивен, 2019-nCoV е негативен.
Забелешка: Кривата на засилување на позитивниот примерок треба да биде со типична крива S.Меѓутоа, ако целната концентрација е превисока, внатрешната стандардна контрола може да не се засили и примерокот може директно да се оцени како позитивен.Ако било кои два од целните гени добијат Ct≤38, 2019-nCoV е позитивен.Ако било кои два од целните гени добијат Ct≥40, 2019-nCoV е негативен.Ако Ct≥40, или не покажува вредност, толкувањето на резултатите од целниот ген е негативно.
3. Ако сите вредности Ct на каналите FAM, VIC, ROX и Cy5 се повеќе од 38 или не постои очигледна типична крива на засилување S:
1) Во примерокот има/и супстанци кои ја инхибираат PCR реакцијата.Се препорачува да се разреди примерокот за повторно тестирање.
2) Процесот на екстракција на нуклеинска киселина е ненормален, па затоа се предлага повторно да се екстрахира
нуклеинска киселина за повторно тестирање.
3) Овој примерок НЕ бил квалификуван примерок во моментот на земање примерок или деградиран
за време на транспортот и складирањето.
Тие се 2 начини на кои можеме да ги откриеме овие ситуации: NAAT и Antigen.
(Доаѓа од ЦДЦ од Лос Анџелес)
