ഉൽപ്പന്ന വിശദാംശങ്ങൾ
ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടെസ്റ്റുകളേക്കാൾ (NAATs) സജീവമായ SARS-CoV-2 അണുബാധ നിർണ്ണയിക്കാൻ ആന്റിജൻ-ഡിറ്റക്റ്റിംഗ് റാപ്പിഡ് ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് ടെസ്റ്റുകൾക്ക് (Ag-RDRs) വേഗമേറിയതും ചെലവുകുറഞ്ഞതുമായ മാർഗ്ഗം നൽകാമെന്ന് ലോകാരോഗ്യ സംഘടന (WHO) നയിക്കുന്നു, കൂടാതെ WHO ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ പ്രകടന ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുന്ന Ag-RDT-കൾ പ്രാഥമിക കേസുകൾ കണ്ടെത്തുന്നതിനും കോൺടാക്റ്റ് ട്രെയ്‌സിംഗ് ചെയ്യുന്നതിനും പൊട്ടിപ്പുറപ്പെടുന്ന അന്വേഷണങ്ങൾക്കിടയിലും കമ്മ്യൂണിറ്റികളിലെ രോഗബാധയുടെ പ്രവണതകൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിനും ഉപയോഗിക്കാം.
ഫീച്ചറുകൾ
● സമഗ്രം:ഒരു ടെസ്റ്റിൽ മൂന്ന് ടാർഗെറ്റ് ജീൻ കണ്ടെത്തുന്നു
● അനുയോജ്യം:CY5, FAM, VIC/HEX ചാനലുകൾ ഉള്ള സാധാരണ ഉപകരണങ്ങൾക്ക് അനുയോജ്യം.
● മികച്ച പ്രകടനം:ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമതയും പ്രത്യേകതയും, LOD = 200 പകർപ്പുകൾ/മില്ലി.
സാങ്കേതിക പാരാമീറ്റർ
| പാക്കിംഗ് സ്പെസിഫിക്കേഷൻ | 50 ടെസ്റ്റുകൾ/കിറ്റ്, 100 ടെസ്റ്റുകൾ/കിറ്റ് |
| ലക്ഷ്യ മേഖല | ORF1ab, N, E |
| ബാധകമായ സാമ്പിൾ | കഫം, ഓറോഫറിംഗൽ സ്വാബ് |
| കണ്ടെത്തലിന്റെ പരിധി | 200 പകർപ്പുകൾ / മില്ലി |
| ആകെ യാദൃശ്ചികത നിരക്ക് | 99.55% |
| Ct മൂല്യം (CV,%) | ≤5.0% |
| പോസിറ്റീവ് യാദൃശ്ചികത നിരക്ക് | 99.12% |
| നെഗറ്റീവ് യാദൃശ്ചികത നിരക്ക് | 100% |
| സംഭരണ വ്യവസ്ഥകളും കാലഹരണ തീയതിയും | -20±5℃-ൽ സംഭരിച്ചു, 12 മാസത്തേക്ക് താൽക്കാലികമായി സാധുതയുള്ളതാണ്. |
| ആന്തരിക നിയന്ത്രണം | അതെ |
| കാറ്റലോഗ് നമ്പർ | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| സർട്ടിഫിക്കേഷൻ | CE |
| മാതൃകകൾ | നാസോഫോറിഞ്ചിയൽ സ്വാബ്, ഓറോഫറിംഗൽ സ്വാബ്, അൽവിയോളാർ ലാവേജ് ദ്രാവകം, ഉമിനീർ, കഫം |
| ബാധകമായ ഉപകരണം | ABI 7500, റോച്ചെ ലൈറ്റ് സൈക്ലർ 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P റിയൽ-ടൈം PCR സിസ്റ്റം |
ടെസ്റ്റ് നടപടിക്രമം
1. ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ
എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റിന്റെ മാനുവൽ അനുസരിച്ച് പ്രവർത്തനം നടത്തണം.
2. സിസ്റ്റം തയ്യാറാക്കൽ:
1) റിയാജൻറ് പുറത്തെടുത്ത് റീജന്റ് പൂർണ്ണമായും ഉരുകുക.മിശ്രിതം തലകീഴായി മാറ്റുക, ഉടൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.N ടെസ്റ്റ് പ്രതികരണങ്ങൾ (N = പരീക്ഷിക്കേണ്ട സാമ്പിളുകളുടെ എണ്ണം + പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം + നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം + 1) യഥാക്രമം പ്രതികരണ സംവിധാനങ്ങൾക്കായി ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ തയ്യാറാക്കപ്പെടുന്നു.
| വൊംപൊനെംത്സ് | 1 പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിനായുള്ള വോളിയം | N പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിനായുള്ള വോളിയം |
| ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ റിയാക്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ മിക്സ് (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| എൻസൈം മിശ്രിതം | 2 µL | 2 µL * N |
| മൊത്തം വോളിയം | 20 µL | 20 µL * N |
2) റിയാക്ഷൻ ഡിസ്ട്രിബ്യൂഷൻ: റിയാക്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ മിക്സഡ് ചെയ്ത് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു, ഫ്ലൂറസെൻസ് പിസിആർ ഉപകരണത്തിന് അനുയോജ്യമായ പിസിആർ ട്യൂബിൽ ഓരോ ട്യൂബും 20μL അളവിൽ വിതരണം ചെയ്തു.
3. ലോഡ് ചെയ്യുന്നു
വേർതിരിച്ചെടുത്ത സാമ്പിൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ 5μL, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ്, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എന്നിവ പ്രതികരണ സംവിധാനങ്ങളിൽ ചേർക്കുന്നു, കൂടാതെ മൊത്തം പ്രതികരണത്തിന്റെ അളവ് 25μL ആണ്.ട്യൂബ് കവർ ഘടിപ്പിച്ച് കുറച്ച് സെക്കൻഡ് സെന്റിഫ്യൂഗേഷന് ശേഷം ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടെസ്റ്റ് ഏരിയയിലേക്ക് നീക്കുക.
4. പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ അസ്സെ
1) ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കണ്ടെത്തലിനായി ഫ്ലൂറസെന്റ് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉപകരണത്തിലേക്ക് PCR പ്രതികരണ ട്യൂബ് ഇടുക.
2) സൈക്കിൾ പാരാമീറ്റർ ക്രമീകരണം:
| പ്രോഗ്രാം | സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം | താപനില | പ്രതികരണ സമയം | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 മിനിറ്റ് | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 സെ | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 സെ | |
| 60℃ | 30 സെ | ഫ്ലൂറസെൻസ് ശേഖരം | ||
3) കണ്ടെത്തൽ ക്രമീകരണങ്ങൾ:
കണ്ടെത്തൽ ചാനലുകൾ യഥാക്രമം ORF1ab, N ജീൻ, RNase P ആന്തരിക നിയന്ത്രണം എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട FAM, VIC, ROX, CY5 എന്നിവയിലേക്ക് സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.ABI 7500 ഉപകരണത്തിന് "Quencher Dye", "Passive Reference" എന്നിവ "ഒന്നുമില്ല" എന്ന് സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.സാമ്പിളുകൾ പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ക്രമത്തിൽ പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ, സാമ്പിൾ (അജ്ഞാതം) എന്നിവ സജ്ജമാക്കുക, കൂടാതെ "സാമ്പിൾ നെയിം" കോളത്തിൽ സാമ്പിൾ പേര് സജ്ജീകരിക്കുക.
X-POCH16-ന്, പ്രവർത്തനവും പ്രോഗ്രാമും ഇപ്രകാരമാണ്:
1) സ്വയം പരിശോധന പൂർത്തിയാക്കിയ ശേഷം, ലിഡ് തുറന്ന് പിസിആർ റിയാക്ഷൻ ട്യൂബുകൾ ഉപകരണത്തിലെ നിയുക്ത സ്ഥാനങ്ങളിൽ ഇടുക.
2) "വിദഗ്ദ്ധൻ" തിരഞ്ഞെടുത്ത് ആരംഭിക്കുക.ഓപ്ഷൻ."എല്ലാം" ഓപ്ഷൻ തിരഞ്ഞെടുക്കുക അല്ലെങ്കിൽ സ്‌ക്രീനിന്റെ ഇടതുവശത്തുള്ള പ്രതികരണ മേഖല സ്വമേധയാ തിരഞ്ഞെടുക്കുക.
3) "ലോഡ്" ഓപ്ഷൻ തിരഞ്ഞെടുക്കുക;ടെസ്റ്റ് പ്രോഗ്രാം തിരഞ്ഞെടുക്കുക;"DONE", "RUN" എന്നിവ ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക.പ്രോഗ്രാം പൂർത്തിയാക്കാൻ 30min42s എടുക്കും.
ഡിഫോൾട്ട് പ്രോഗ്രാമിന്റെ ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകൾ യഥാക്രമം ORF1ab, N ജീൻ, E ജീൻ, RNase P ആന്തരിക നിയന്ത്രണം എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട FAM, VIC, ROX, CY5 എന്നിവയിലേക്ക് സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.
ഡിഫോൾട്ട് പ്രോഗ്രാമിന്റെ സൈക്കിൾ പാരാമീറ്റർ ഇപ്രകാരമാണ്:
| പ്രോഗ്രാം | എണ്ണം | താപനില | പ്രതികരണ സമയം |
| 1 | 1 | 50℃ | 2മിനിറ്റ് |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 സെക്കൻഡ് |
| 3 | 41 | 95℃ | 2സെക്കൻഡ് |
| 60℃ | 13 സെക്കൻഡ് | ഫ്ലൂറസെൻസ് |
5. ത്രെഷോൾഡ് ക്രമീകരണം
വിശകലനം ചെയ്‌ത ചിത്രം അനുസരിച്ച്, ആരംഭ മൂല്യം, ബേസ്‌ലൈനിന്റെ അവസാന മൂല്യം, ത്രെഷോൾഡ് മൂല്യം എന്നിവ ക്രമീകരിക്കുക (ആരംഭ മൂല്യവും അവസാന മൂല്യവും യഥാക്രമം 3, 15 ആയി സജ്ജീകരിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണത്തിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഫ്ലാറ്റ് ആയി ക്രമീകരിക്കുന്നു അല്ലെങ്കിൽ ത്രെഷോൾഡ് ലൈനിനേക്കാൾ താഴെ), സാമ്പിൾ Ct മൂല്യം സ്വയമേവ വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിനായി വിശകലനം ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക.റിപ്പോർട്ട് ഇന്റർഫേസിൽ ഫലങ്ങൾ കാണുക.
6. ക്വാളിറ്റി കൺട്രോൾ സ്റ്റാൻഡേർഡ്
കിറ്റിന്റെ ഓരോ നിയന്ത്രണവും 'S' കർവ് ഉപയോഗിച്ച് ഇനിപ്പറയുന്ന ആവശ്യകതകൾ പാലിക്കണം, അല്ലാത്തപക്ഷം പരീക്ഷണം അസാധുവാണ്.
| കണ്ടെത്തൽ ചാനലുകൾ | നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം | പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം |
| FAM(ORF1ab) | Ct ഇല്ല | Ct≤38 |
| വിഐസി(എൻ) | Ct ഇല്ല | Ct≤38 |
| റോക്സ്(ഇ) | Ct ഇല്ല | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ct ഇല്ല | Ct≤38 |
【കട്ട്-ഓഫ് മൂല്യം】
100 ഓറോഫറിൻജിയൽ സ്വാബ് സാമ്പിളുകളുടെയും 100 കഫം സാമ്പിളുകളുടെയും ഫലങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, ROC കർവ് രീതി ഉപയോഗിച്ച്, ഈ കിറ്റിന്റെ OFR1ab, N ജീനുകളുടെ E ജീനിന്റെ കട്ട്-ഓഫ് മൂല്യം Ct = 38 ആണ്.
പതിവുചോദ്യങ്ങൾ
ഈ കിറ്റിൽ, തൽസമയ ഫ്ലൂറസെന്റ് PCR സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ പ്രൈമറുകളും പ്രോബുകളും യഥാക്രമം 2019-nCoV-യുടെ ORF1ab, N, E ജീനുകളുടെ സംരക്ഷിതവും നിർദ്ദിഷ്ടവുമായ പ്രദേശങ്ങൾക്കായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നു.പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സമയത്ത്, അന്വേഷണം ടെംപ്ലേറ്റുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു, കൂടാതെ അന്വേഷണത്തിന്റെ 5'-എൻഡ് റിപ്പോർട്ടർ ഗ്രൂപ്പിനെ ടാക്ക് എൻസൈം (5'→3' എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം) വിഭജിക്കുന്നു, അതുവഴി ഒരു ഫ്ലൂറസെന്റ് സിഗ്നൽ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിനായി ക്വഞ്ചിംഗ് ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്ന് അകന്നുപോകുന്നു. .കണ്ടെത്തിയ ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നലിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കി തൽസമയ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് സ്വയമേവ പ്ലോട്ട് ചെയ്യപ്പെടുകയും സാമ്പിൾ Ct മൂല്യം കണക്കാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.FAM, VIC, ROX ഫ്ലൂറോഫോറുകൾ എന്നിവ ORF1ab ജീൻ, N ജീൻ, E ജീൻ പ്രോബുകൾ എന്നിങ്ങനെ ലേബൽ ചെയ്തിരിക്കുന്നു.ഒരു ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിലൂടെ, 2019-nCoV-യുടെ മുകളിൽ പറഞ്ഞ മൂന്ന് ജീനുകളുടെ ഗുണപരമായ കണ്ടെത്തൽ ഒരേസമയം നടത്താനാകും.
തെറ്റായ-നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ ഒഴിവാക്കാൻ ക്ലിനിക്കൽ സാമ്പിളുകളുടെ ശേഖരണം, കൈകാര്യം ചെയ്യൽ, വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ, RT-PCR പ്രക്രിയ എന്നിവ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിന് RNase P ജീനിനെ ലക്ഷ്യമാക്കിയുള്ള ആന്തരിക നിയന്ത്രണം കിറ്റിന് നൽകിയിരിക്കുന്നു.ആന്തരിക നിയന്ത്രണം ഒരു CY5 ഫ്ലൂറസെന്റ് ഗ്രൂപ്പുമായി ലേബൽ ചെയ്തിരിക്കുന്നു.
1. ഉപകരണം സാധാരണ നിലയിലായിരിക്കുമ്പോൾ പരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്യുകയും വ്യാഖ്യാനിക്കുകയും ചെയ്യുക, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ, ഇന്റേണൽ കൺട്രോൾ ടെസ്റ്റ് ഫലം എന്നിവ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണ നിലവാരം പുലർത്തുന്നു.
2. ആന്തരിക നിയന്ത്രണത്തിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് (CY5) ഒരു സാധാരണ എസ് കർവ് കാണിക്കുന്നു, കൂടാതെ Ct ≤ 38, ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ ഫലങ്ങൾ വ്യാഖ്യാനം ഇനിപ്പറയുന്ന വ്യവസ്ഥകൾക്ക് വിധേയമാണ്.
| കണ്ടെത്തൽ ചാനലുകൾ | ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ ഫലങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനം | ||
| എഫ്എംഎ | വിഐസി (എൻ ജീൻ) | റോക്സ് (ഇ ജീൻ) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | ഒരു സാധാരണ എസ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉപയോഗിച്ച്, Ct മൂല്യം≤38 ആണ്, അനുബന്ധ ടാർഗെറ്റ് ജീൻ പോസിറ്റീവ് ആണ്. |
| 38 x Ct 40 | 38 x Ct 40 | 38 x Ct 40 | ഒരു സാധാരണ എസ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉപയോഗിച്ച്, സാമ്പിളിന്റെ അനുബന്ധ ടാർഗെറ്റ് ജീൻ വീണ്ടും പരിശോധിക്കുക. ഒരു സാധാരണ എസ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉള്ള Ct മൂല്യം＜ 40 ആണെങ്കിൽ, അനുബന്ധ ടാർഗെറ്റ് ജീൻ പോസിറ്റീവ് ആണ്;Ct മൂല്യം≥40 ആണെങ്കിൽ, ബന്ധപ്പെട്ട ടാർഗെറ്റ് ജീൻ നെഗറ്റീവ് ആണ് |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | അനുബന്ധ ടാർഗെറ്റ് ജീൻ നെഗറ്റീവ് ആണ് |
2019-nCoV-യുടെ ഫലങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനം:
ORF1ab, N ജീൻ, E ജീൻ എന്നിവയുടെ ഫലങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, വ്യാഖ്യാനം ഇപ്രകാരമാണ്:
1) കണ്ടെത്തിയ ജീനുകളുടെ രണ്ടോ മൂന്നോ ജീനുകൾ പോസിറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, 2019-nCoV പോസിറ്റീവ് ആണ്;
2) കണ്ടെത്തിയ ജീനുകളിൽ ഒന്നോ അല്ലയോ പോസിറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, 2019-nCoV നെഗറ്റീവ് ആണ്.
കുറിപ്പ്: പോസിറ്റീവ് സാമ്പിളിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഒരു സാധാരണ എസ് കർവ് ഉള്ളതായിരിക്കണം.എന്നിരുന്നാലും, ടാർഗെറ്റ് കോൺസൺട്രേഷൻ വളരെ ഉയർന്നതാണെങ്കിൽ, ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് കൺട്രോൾ വർദ്ധിപ്പിച്ചേക്കില്ല, സാമ്പിൾ നേരിട്ട് പോസിറ്റീവ് ആയി വിലയിരുത്താം.ഏതെങ്കിലും രണ്ട് ടാർഗെറ്റ് ജീനുകൾക്ക് Ct≤38 ലഭിക്കുകയാണെങ്കിൽ, 2019-nCoV പോസിറ്റീവ് ആണ്.ഏതെങ്കിലും രണ്ട് ടാർഗെറ്റ് ജീനുകൾക്ക് Ct≥40 ലഭിക്കുകയാണെങ്കിൽ, 2019-nCoV നെഗറ്റീവ് ആണ്.Ct≥40 അല്ലെങ്കിൽ മൂല്യം കാണിക്കുന്നില്ലെങ്കിലോ, ടാർഗെറ്റ് ജീനിന്റെ ഫലങ്ങൾ നെഗറ്റീവ് ആണ്.
3. FAM, VIC, ROX, Cy5 ചാനലുകളുടെ എല്ലാ Ct മൂല്യങ്ങളും 38-ൽ കൂടുതലാണെങ്കിൽ അല്ലെങ്കിൽ വ്യക്തമായ സാധാരണ S ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ലെങ്കിലോ:
1) സാമ്പിളിൽ PCR പ്രതികരണത്തെ തടയുന്ന പദാർത്ഥങ്ങൾ ഉണ്ട്/ഉണ്ട്.വീണ്ടും പരിശോധിക്കുന്നതിനായി സാമ്പിൾ നേർപ്പിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
2) ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയ അസാധാരണമാണ്, അതിനാൽ വീണ്ടും വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു
വീണ്ടും പരിശോധനയ്ക്കായി ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ്.
3) സാമ്പിൾ എടുക്കുന്ന സമയത്ത് ഈ സാമ്പിൾ യോഗ്യതയുള്ള സാമ്പിൾ ആയിരുന്നില്ല, അല്ലെങ്കിൽ തരംതാഴ്ത്തപ്പെട്ടു
ഗതാഗതത്തിലും സംഭരണത്തിലും.
ഈ സാഹചര്യങ്ങൾ നമുക്ക് കണ്ടെത്താനാകുന്ന 2 വഴികളാണ് അവ: NAAT, Antigen.
(ലോസ് ഏഞ്ചൽസിലെ സിഡിസിയിൽ നിന്ന് വന്നത്)
