Бүтээгдэхүүний дэлгэрэнгүй
Дэлхийн Эрүүл Мэндийн Байгууллага (ДЭМБ) антиген илрүүлэх хурдан оношлогооны шинжилгээ (Ag-RDRs) нь нуклейн хүчлийг олшруулах тестээс (NAATs) илүү SARS-CoV-2-ийн идэвхтэй халдварыг оношлоход илүү хурдан бөгөөд хямд аргыг санал болгож чадна гэж ДЭМБ-аас зөвлөж байна. Гүйцэтгэлийн хамгийн бага шаардлагыг хангасан Ag-RDT-ийг анхан шатны тохиолдлыг илрүүлэх, холбоо барих, дэгдэлтийн судалгаа хийх, олон нийтийн дундах өвчлөлийн хандлагыг хянахад ашиглаж болно.
Онцлогууд
● Цогц:Гурван зорилтот генийг нэг туршилтаар илрүүлдэг
● нийцтэй:CY5, FAM, VIC/HEX суваг бүхий нийтлэг төхөөрөмжид дасан зохицох боломжтой.
● Маш сайн гүйцэтгэл:Өндөр мэдрэмж, өвөрмөц чанар, LOD = 200 хувь / мл.
Техникийн параметр
| Сав баглаа боодлын тодорхойлолт | 50 тест/иж бүрдэл, 100 тест/иж бүрдэл |
| Зорилтот бүс нутаг | ORF1ab, N, E |
| Холбогдох жишээ | Цэр, ам залгиурын арчдас |
| Илрүүлэх хязгаар | 200 хувь / мл |
| Нийт давхцлын хувь | 99.55% |
| Ct утга (CV,%) | ≤5.0% |
| Эерэг давхцлын хувь | 99.12% |
| Сөрөг давхцлын хувь | 100% |
| Хадгалах нөхцөл ба хүчинтэй хугацаа | -20±5℃ хэмд хадгалагдаж, 12 сарын хугацаанд түр хугацаагаар хүчинтэй. |
| Дотоод хяналт | Тиймээ |
| Каталогийн дугаар | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Баталгаажуулалт | CE |
| Сорьц | Хамар залгиурын арчдас, ам залгиурын арчдас, цулцангийн угаах шингэн, шүлс, цэр |
| Холбогдох хэрэгсэл | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P бодит цагийн ПГУ-ын систем |
Туршилтын журам
1. Нуклейн хүчлийн олборлолт
Ашиглалтын ажиллагааг олборлох иж бүрдэлийн гарын авлагын дагуу хийх ёстой.
2. Системийн бэлтгэл:
1) Урвалжийг гаргаж аваад урвалжийг бүрэн гэсгээнэ.Хольцыг эргүүлж нэн даруй центрифуг хийнэ.Туршилтын N урвалыг (N = турших дээжийн тоо + эерэг хяналт + сөрөг хяналт + 1) урвалын системд дараах байдлаар тус тус бэлтгэсэн.
| Вомпонентс | 1 урвалын системийн эзлэхүүн | N урвалын системийн эзлэхүүн |
| Нуклейн хүчлийг олшруулах урвалын уусмалын холимог (A7793YF) | 18 мкл | 18 мкл * Н |
| Ферментийн хольц | 2 мкл | 2 мкл * Н |
| Нийт эзлэхүүн | 20 мкл | 20 мкл * Н |
2) Урвалын тархалт: Урвалын уусмалыг хольж, центрифуг хийж, флюресценцийн ПГУ-ын аппаратад тохиромжтой ПГУ-ын хоолойд хуруу шил бүрийг 20 мкл хэмжээгээр тараасан.
3. Ачаалах
Олж авсан дээжээс 5 мкл нуклейн хүчил, эерэг хяналтын нуклейн хүчил, сөрөг хяналтын нуклейн хүчлийг урвалын системд нэмэх ба нийт урвалын хэмжээ 25 мкл байна.Хоолойн тагийг бэхлээд хэдхэн секундын центрифугийн дараа олшруулалтын туршилтын талбар руу шилжүүлнэ.
4. ПГУ-ын олшруулалтын шинжилгээ
1) Олшруулалтыг илрүүлэхийн тулд ПГУ-ын урвалын хоолойг флюресцент ПГУ-ын олшруулах хэрэгсэлд хийнэ.
2) Циклийн параметрийн тохиргоо:
| Програм | Циклийн тоо | Температур | Урвалын хугацаа | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 мин | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 сек | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 сек | |
| 60℃ | 30 сек | Флюресценцийн цуглуулга | ||
3) Илрүүлэх тохиргоо:
Илрүүлэх сувгуудыг FAM, VIC, ROX болон CY5 гэж тохируулсан бөгөөд энэ нь ORF1ab, N ген, E Gene, RNase P дотоод хяналттай нийцдэг.ABI 7500 хэрэгслийн хувьд "Quencher Dye" болон "Passive Reference"-ийг "Үгүй" гэж тохируулсан.Эерэг хяналт, сөрөг хяналт, дээжийг (Үл мэдэгдэх) дээжийн тохирох дарааллаар тохируулж, дээжийн нэрийг "Дээжийн нэр" баганад тохируулна уу.
X-POCH16-ийн хувьд үйл ажиллагаа, програм нь дараах байдалтай байна.
1) Өөрийгөө шалгаж дууссаны дараа тагийг онгойлгож, ПГУ-ын урвалын гуурсыг багажны заасан байрлалд хийнэ.
2) "Шинжээч" -ийг сонгоод эхэл.сонголт."Бүх" сонголтыг сонгох эсвэл дэлгэцийн зүүн талд байрлах урвалын хэсгийг гараар сонгоно уу.
3) "LOAD" сонголтыг сонгоно уу;туршилтын програмыг сонгох;"DONE" болон "RUN" дээр дарна уу.Хөтөлбөрийг дуусгахад 30 минут 42 секунд шаардлагатай.
Өгөгдмөл програмын илрүүлэх сувгууд нь ORF1ab, N ген, E Gene, RNase P дотоод хяналттай харгалзах FAM, VIC, ROX болон CY5 гэж тохируулагдсан.
Өгөгдмөл програмын мөчлөгийн параметр нь дараах байдалтай байна.
| Програм | Тоо | Температур | Урвалын хугацаа |
| 1 | 1 | 50℃ | 2мин |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 секунд |
| 3 | 41 | 95℃ | 2сек |
| 60℃ | 13 сек | Флюресцент |
5. Босгын тохиргоо
Шинжилсэн зургийн дагуу Эхлэх утга, Төгсгөлийн суурь ба Босгын утгыг тохируулна (Эхлэх утга ба төгсгөлийн утгыг 3 ба 15 гэж тохируулахыг зөвлөж байна, сөрөг хяналтын олшруулалтын муруйг тэгш эсвэл тэгш байхаар тохируулна. босго шугамаас доогуур байвал анализ дээр дарж түүврийн Ct утгыг автоматаар авна.Тайлангийн интерфейсээс үр дүнг харна уу.
6. Чанарын хяналтын стандарт
Багцын хяналт бүр нь 'S' муруйтай дараах шаардлагыг хангасан байх ёстой, эс тэгвээс туршилт хүчингүй болно.
| Илрүүлэх сувгууд | Сөрөг хяналт | Эерэг хяналт |
| FAM(ORF1ab) | Ct байхгүй | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ct байхгүй | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ct байхгүй | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ct байхгүй | Ct≤38 |
【Таслах үнэ】
Ам залгиурын 100 арчдас, 100 цэрний дээжийн үр дүнгээс үзэхэд ROC муруй аргын дагуу энэ багцын OFR1ab, N генийн E генийн Cut-off утга нь Ct = 38 байна.
Түгээмэл асуулт
Энэхүү иж бүрдэлд бодит цагийн флюресцент ПГУ-ын технологийн праймерууд болон датчикууд нь 2019-nCoV-ийн ORF1ab, N, E генийн хадгалагдсан болон тодорхой бүс нутагт зориулагдсан болно.ПГУ-ын олшруулалтын явцад датчик нь загвартай холбогдож, датчикийн 5' төгсгөлийн сурвалжлагч бүлэг нь Taq ферментээр (5'→3' экзонуклеазын идэвхжил) хуваагддаг бөгөөд ингэснээр унтраах бүлгээс холдож, флюресцент дохио үүсгэдэг. .Илэрсэн флюресценцийн дохион дээр үндэслэн бодит цагийн олшруулалтын муруйг автоматаар зурж, дээжийн Ct утгыг тооцоолно.FAM, VIC болон ROX флуорофорууд нь ORF1ab ген, N ген, Е генийн датчикуудаар тэмдэглэгдсэн байдаг.Нэг туршилтыг ашигласнаар 2019-nCoV-ийн дээрх гурван генийг чанарын хувьд илрүүлэх боломжтой.
Энэхүү иж бүрдэл нь хуурамч сөрөг үр дүнгээс зайлсхийхийн тулд эмнэлзүйн дээж цуглуулах, боловсруулах, олборлох, RT-ПГУ-ын үйл явцыг хянах зорилгоор RNase P генийг чиглүүлдэг дотоод хяналттай.Дотоод хяналт нь CY5 флюресцент бүлгийн шошготой.
1. Хэмжих хэрэгсэл хэвийн, эерэг, сөрөг хяналт, дотоод хяналтын шинжилгээний хариу нь чанарын хяналтын стандартад нийцсэн үед шинжилгээний үр дүнд дүн шинжилгээ хийж, тайлбарлана.
2. Дотоод хяналтын олшруулалтын муруй (CY5) нь ердийн S муруй ба Ct ≤ 38-ыг харуулж байгаа тул зорилтот генийн үр дүнг тайлбарлахад дараах нөхцлүүд хамаарна.
| Илрүүлэх сувгууд | Зорилтот генийн үр дүнг тайлбарлах | ||
| ОУХМ | VIC (N ген) | ROX (E ген) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Ердийн S олшруулалтын муруйтай үед Ct утга нь≤38, харгалзах зорилтот ген эерэг байна. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Ердийн S олшруулалтын муруйтай бол дээжийн харгалзах зорилтот генийг дахин шалгана. Хэрэв ердийн S олшруулалтын муруйтай Ct утга＜ 40 байвал харгалзах зорилтот ген эерэг байна;хэрэв Ct утга≥40 бол харгалзах зорилтот ген сөрөг байна |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Харгалзах зорилтот ген нь сөрөг байна |
2019-nCoV-ийн үр дүнгийн тайлбар:
ORF1ab, N ген ба E генийн үр дүнгээс үзэхэд дараах байдлаар тайлбарлагдана.
1) Хэрэв илрүүлсэн генийн ХОЁР эсвэл ГУРАВ ген эерэг байвал 2019-nCoV эерэг байна;
2) Хэрэв илрүүлсэн генүүдээс ЗӨВХӨН НЭГ юм уу аль нь ч эерэг биш бол 2019-nCoV сөрөг байна.
Тайлбар: Эерэг дээжийн олшруулалтын муруй нь ердийн S муруйтай байх ёстой.Гэсэн хэдий ч зорилтот концентраци хэт өндөр байвал дотоод стандарт хяналтыг нэмэгдүүлэхгүй бөгөөд дээжийг эерэг гэж шууд дүгнэж болно.Хэрэв зорилтот генүүдийн аль нэг нь Ct≤38-ыг авсан бол 2019-nCoV эерэг байна.Зорилтот генүүдийн аль нэг нь Ct≥40 авсан бол 2019-nCoV сөрөг байна.Хэрэв Ct≥40 буюу утга байхгүй бол зорилтот генийн үр дүнгийн тайлбар сөрөг байна.
3. Хэрэв FAM, VIC, ROX болон Cy5 сувгуудын бүх Ct утга нь 38-аас их эсвэл тодорхой ердийн S олшруулалтын муруй байхгүй бол:
1) Дээжинд ПГУ-ын урвалыг дарангуйлдаг бодис(ууд) байна/байна.Дахин шинжилгээнд оруулахын тулд дээжийг шингэлэхийг зөвлөж байна.
2) Нуклейн хүчлийг ялган авах үйл явц хэвийн бус байгаа тул дахин гаргаж авахыг зөвлөж байна
нуклейн хүчил дахин шинжилгээ хийх.
3) Энэ дээж нь дээж авах үед шаардлага хангасан дээж биш, эсвэл муудсан
тээвэрлэх, хадгалах явцад.
Эдгээр нь бид энэ нөхцөл байдлыг илрүүлэх 2 арга юм: NAAT болон Antigen.
(Лос Анжелесийн CDC-ээс ирсэн)
