उत्पादन तपशील
वर्ल्ड हेल्थ ऑर्गनायझेशन (डब्ल्यूएचओ) मार्गदर्शन करते की अँटीजेन-डिटेक्टिंग रॅपिड डायग्नोस्टिक चाचण्या (एजी-आरडीआर) न्यूक्लिक अॅसिड अॅम्प्लिफिकेशन चाचण्या (NAATs) पेक्षा सक्रिय SARS-CoV-2 संसर्गाचे निदान करण्यासाठी जलद आणि कमी खर्चिक मार्ग देऊ शकतात आणि WHO देखील शिफारस करतो. किमान कार्यप्रदर्शन आवश्यकता पूर्ण करण्यासाठी Ag-RDTs चा वापर प्राइमरी केस डिटेक्शन, कॉन्टॅक्ट ट्रेसिंग, प्रादुर्भाव तपासादरम्यान आणि समुदायांमधील रोगाच्या घटनांच्या ट्रेंडवर लक्ष ठेवण्यासाठी केला जाऊ शकतो.
वैशिष्ट्ये
● सर्वसमावेशक:एका चाचणीत तीन लक्ष्य जनुक शोधतात
● सुसंगत:CY5, FAM, VIC/HEX चॅनेलसह सामान्य उपकरणांसाठी अनुकूल.
● उत्कृष्ट कामगिरी:उच्च संवेदनशीलता आणि विशिष्टता, LOD = 200 प्रती/ml.
तांत्रिक मापदंड
| पॅकिंग तपशील | 50 चाचण्या/किट, 100 चाचण्या/किट |
| लक्ष्य क्षेत्र | ORF1ab, N, E |
| लागू नमुना | थुंकी, ऑरोफॅरिंजियल स्वॅब |
| शोधण्याची मर्यादा | 200 प्रती/मिली |
| एकूण योगायोग दर | 99.55% |
| Ct मूल्य (CV,%) | ≤5.0% |
| सकारात्मक योगायोग दर | 99.12% |
| नकारात्मक योगायोग दर | 100% |
| स्टोरेज अटी आणि कालबाह्यता तारीख | -20±5℃ वर साठवले जाते आणि 12 महिन्यांसाठी तात्पुरते वैध आहे. |
| अंतर्गत नियंत्रण | होय |
| कॅटलॉग क्रमांक | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| प्रमाणन | CE |
| नमुने | नासोफरींजियल स्वॅब, ऑरोफरींजियल स्वॅब, अल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड, लाळ आणि थुंकी |
| लागू साधन | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P रिअल-टाइम पीसीआर सिस्टम |
चाचणी पद्धत
1. न्यूक्लिक अॅसिड एक्सट्रॅक्शन
एक्सट्रॅक्शन किटच्या मॅन्युअलनुसार ऑपरेशन केले पाहिजे.
2. प्रणालीची तयारी:
1) अभिकर्मक बाहेर काढा आणि अभिकर्मक पूर्णपणे वितळवा.मिश्रण आणि सेंट्रीफ्यूज लगेच उलटा.N चाचणी प्रतिक्रिया (N = चाचणी करायच्या नमुन्यांची संख्या + सकारात्मक नियंत्रण + नकारात्मक नियंत्रण + 1) प्रतिक्रिया प्रणालीसाठी, अनुक्रमे, खालीलप्रमाणे तयार केल्या जातात.
| व्होम्पोनेंट्स | 1 प्रतिक्रिया प्रणालीसाठी खंड | एन प्रतिक्रिया प्रणालीसाठी आवाज |
| न्यूक्लिक अॅसिड अॅम्प्लिफिकेशन रिअॅक्शन सोल्यूशन मिक्स (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| एंजाइम मिश्रण | 2 μL | 2 µL * N |
| एकूण खंड | 20 μL | 20 µL * N |
2) प्रतिक्रिया वितरण: प्रतिक्रिया द्रावण मिश्रित आणि सेंट्रीफ्यूज केले गेले आणि प्रत्येक ट्यूब 20μL च्या प्रमाणात पीसीआर ट्यूबमध्ये फ्लूरोसेन्स पीसीआर उपकरणासाठी योग्य होती.
3. लोड होत आहे
काढलेल्या नमुन्यातील 5μL न्यूक्लिक अॅसिड, पॉझिटिव्ह कंट्रोल न्यूक्लिक अॅसिड आणि निगेटिव्ह कंट्रोल न्यूक्लिक अॅसिड रिअॅक्शन सिस्टममध्ये जोडले जातात आणि एकूण प्रतिक्रिया व्हॉल्यूम 25μL आहे.ट्यूब कव्हर बांधा आणि सेंट्रीफ्यूगेशनच्या काही सेकंदांनंतर ते प्रवर्धन चाचणी क्षेत्रात हलवा.
4. पीसीआर प्रवर्धन परख
1) प्रवर्धन शोधण्यासाठी फ्लोरोसेंट पीसीआर प्रवर्धक उपकरणामध्ये पीसीआर प्रतिक्रिया ट्यूब घाला.
२) सायकल पॅरामीटर सेटिंग:
| कार्यक्रम | चक्रांची संख्या | तापमान | प्रतिक्रिया वेळ | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 मि | |
| 2 | 1 | 95℃ | ३० से | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 से | |
| 60℃ | ३० से | फ्लोरोसेन्स संग्रह | ||
3) शोध सेटिंग्ज:
डिटेक्शन चॅनेल FAM, VIC,ROX आणि CY5 वर सेट केले आहेत, अनुक्रमे ORF1ab, N जनुक आणि E Gene, RNase P अंतर्गत नियंत्रणाशी संबंधित आहेत.ABI 7500 इन्स्ट्रुमेंटसाठी "क्वेंचर डाई" आणि "पॅसिव्ह रेफरन्स" "काही नाही" वर सेट केले आहेत.सकारात्मक नियंत्रण, नकारात्मक नियंत्रण आणि नमुना (अज्ञात) सेट करा ज्या क्रमाने नमुने जुळतील आणि नमुना नाव "नमुना नाव" स्तंभात सेट करा.
X-POCH16 साठी, ऑपरेशन आणि प्रोग्राम खालीलप्रमाणे आहेत:
1) स्व-चाचणी पूर्ण झाल्यानंतर, झाकण उघडा आणि PCR प्रतिक्रिया नळ्या इन्स्ट्रुमेंटमध्ये नियुक्त केलेल्या स्थानांवर ठेवा.
2) "तज्ञ" निवडून प्रारंभ करा.पर्याय."सर्व" पर्याय निवडा किंवा स्क्रीनच्या डाव्या बाजूला प्रतिक्रिया क्षेत्र व्यक्तिचलितपणे निवडा.
3) "LOAD" पर्याय निवडा;चाचणी कार्यक्रम निवडा;"पूर्ण" आणि "रन" वर क्लिक करा.कार्यक्रम पूर्ण होण्यासाठी 30 मिनिटे 42 सेकंद लागतात.
डीफॉल्ट प्रोग्रामचे डिटेक्शन चॅनेल FAM, VIC, ROX आणि CY5 वर सेट केले आहेत, अनुक्रमे ORF1ab, N जनुक आणि E Gene, RNase P अंतर्गत नियंत्रणाशी संबंधित आहेत.
डीफॉल्ट प्रोग्रामचे सायकल पॅरामीटर खालीलप्रमाणे आहेत:
| कार्यक्रम | ची संख्या | तापमान | प्रतिक्रिया वेळ |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 मि |
| 2 | 1 | 95℃ | ३०से |
| 3 | 41 | 95℃ | 2से |
| 60℃ | 13से | फ्लोरोसेन्स |
5. थ्रेशोल्ड सेटिंग
विश्लेषण केलेल्या प्रतिमेनुसार, प्रारंभ मूल्य, बेसलाइनचे अंतिम मूल्य आणि थ्रेशोल्ड मूल्य समायोजित करा (प्रारंभ मूल्य आणि अंतिम मूल्य अनुक्रमे 3 आणि 15 वर सेट करण्याची शिफारस केली जाते आणि नकारात्मक नियंत्रणाचे प्रवर्धन वक्र सपाट किंवा सपाट होण्यासाठी समायोजित केले जाते. थ्रेशोल्ड रेषेपेक्षा कमी), विश्लेषणावर क्लिक करा आणि विश्लेषण स्वयंचलितपणे Ct मूल्य मिळवा.रिपोर्ट इंटरफेसमध्ये परिणाम पहा.
6. गुणवत्ता नियंत्रण मानक
किटच्या प्रत्येक नियंत्रणाने 'S' वक्रसह खालील आवश्यकता पूर्ण करणे आवश्यक आहे, अन्यथा प्रयोग अवैध आहे.
| शोध चॅनेल | नकारात्मक नियंत्रण | सकारात्मक नियंत्रण |
| FAM(ORF1ab) | Ct नाही | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ct नाही | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ct नाही | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ct नाही | Ct≤38 |
【कट-ऑफ मूल्य】
100 oropharyngeal स्वॅब नमुने आणि 100 थुंकीच्या नमुन्यांच्या निकालांनुसार, आणि ROC वक्र पद्धतीसह, OFR1ab चे कट-ऑफ मूल्य, या किटचे एन जीन्स ई जीन Ct = 38 आहेत.
FAQ
या किटमध्ये, रिअल-टाइम फ्लोरोसेंट पीसीआर तंत्रज्ञानाचे प्राइमर्स आणि प्रोब अनुक्रमे 2019-nCoV च्या ORF1ab, N आणि E जनुकाच्या संरक्षित आणि विशिष्ट क्षेत्रांसाठी डिझाइन केले आहेत.पीसीआर प्रवर्धनादरम्यान, प्रोब टेम्प्लेटशी बांधला जातो आणि प्रोबचा 5'-एंड रिपोर्टर ग्रुप Taq एन्झाइम (5'→3' एक्सोन्यूक्लीज क्रियाकलाप) द्वारे क्लीव्ह केला जातो, ज्यामुळे फ्लोरोसेंट सिग्नल तयार करण्यासाठी शमन गटापासून दूर जाते. .रिअल-टाइम अॅम्प्लीफिकेशन वक्र शोधलेल्या फ्लूरोसेन्स सिग्नलच्या आधारे आपोआप प्लॉट केले जाते आणि नमुना Ct मूल्य मोजले जाते.FAM, VIC आणि ROX fluorophores ला ORF1ab जनुक, N जनुक आणि E जनुक प्रोब असे लेबल केले जाते.एका चाचणीचा वापर करून, 2019-nCoV च्या वरील तीन जनुकांची गुणात्मक तपासणी एकाच वेळी केली जाऊ शकते.
चुकीचे-नकारात्मक परिणाम टाळण्यासाठी क्लिनिकल नमुने गोळा करणे, हाताळणे, काढणे आणि RT-PCR प्रक्रियेवर लक्ष ठेवण्यासाठी RNase P जनुकाला लक्ष्य करणारे अंतर्गत नियंत्रण किट प्रदान केले आहे.अंतर्गत नियंत्रण CY5 फ्लोरोसेंट गटासह लेबल केलेले आहे.
1. इन्स्ट्रुमेंट सामान्य असताना चाचणी परिणामांचे विश्लेषण करा आणि त्याचा अर्थ लावा आणि सकारात्मक नियंत्रण, नकारात्मक नियंत्रण आणि अंतर्गत नियंत्रण चाचणी परिणाम गुणवत्ता नियंत्रण मानकांची पूर्तता करतात.
2. अंतर्गत नियंत्रणाचे प्रवर्धन वक्र (CY5) विशिष्ट S वक्र आणि Ct ≤ 38 दर्शविते, लक्ष्य जनुकांच्या परिणामांचे स्पष्टीकरण खालील अटींच्या अधीन आहे.
| शोध चॅनेल | लक्ष्य जनुकांच्या परिणामांचे स्पष्टीकरण | ||
| FMA | VIC (एन जीन) | आरओएक्स (ई जनुक) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | ठराविक S प्रवर्धन वक्र सह, Ct मूल्य≤38 आहे, संबंधित लक्ष्य जनुक सकारात्मक आहे. |
| 38 ~ Ct ~ 40 | 38 ~ Ct ~ 40 | 38 ~ Ct ~ 40 | ठराविक S एम्प्लिफिकेशन वक्र सह, नमुन्याच्या संबंधित लक्ष्य जनुकाची पुन्हा चाचणी करा. ठराविक S प्रवर्धन वक्र सह Ct मूल्य＜ 40 असल्यास, संबंधित लक्ष्य जनुक सकारात्मक आहे;Ct मूल्य≥40 असल्यास, संबंधित लक्ष्य जनुक ऋणात्मक असेल |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | संबंधित लक्ष्य जनुक नकारात्मक आहे |
2019-nCoV साठी निकालांचे स्पष्टीकरण:
ORF1ab, N जनुक आणि E जनुकाच्या परिणामांनुसार, खालीलप्रमाणे व्याख्या:
1) सापडलेल्या जनुकांपैकी दोन किंवा तीन जीन्स पॉझिटिव्ह असल्यास, 2019-nCoV पॉझिटिव्ह आहे;
2) आढळलेल्या जनुकांपैकी फक्त एक किंवा एकही पॉझिटिव्ह नसल्यास, 2019-nCoV नकारात्मक आहे.
टीप: सकारात्मक नमुन्याचे प्रवर्धन वक्र ठराविक S वक्र सह असावे.तथापि, लक्ष्य एकाग्रता खूप जास्त असल्यास, अंतर्गत मानक नियंत्रण वाढविले जाऊ शकत नाही आणि नमुना थेट सकारात्मक मानला जाऊ शकतो.कोणत्याही दोन लक्ष्यित जनुकांना Ct≤38 मिळाल्यास, 2019-nCoV सकारात्मक आहे.कोणत्याही दोन लक्ष्यित जनुकांना Ct≥40 मिळाल्यास, 2019-nCoV नकारात्मक आहे.जर Ct≥40, किंवा कोणतेही मूल्य दिसत नसेल, तर लक्ष्य जनुकाचे परिणाम नकारात्मक आहेत.
3. जर FAM, VIC, ROX आणि Cy5 चॅनेलची सर्व Ct मूल्ये 38 पेक्षा जास्त असतील किंवा कोणतेही स्पष्ट S amplification वक्र नसेल:
1) नमुन्यात PCR प्रतिक्रिया प्रतिबंधित करणारे पदार्थ/आहेत.पुन्हा चाचणी करण्यासाठी नमुना सौम्य करण्याची शिफारस केली जाते.
2) न्यूक्लिक अॅसिड काढण्याची प्रक्रिया असामान्य आहे, म्हणून ते पुन्हा काढण्याची सूचना केली जाते.
पुन्हा चाचणीसाठी न्यूक्लिक अॅसिड.
3) सॅम्पलिंगच्या वेळी हा नमुना पात्र नमुना नव्हता किंवा खराब झाला होता
वाहतूक आणि स्टोरेज दरम्यान.
ही परिस्थिती आम्ही 2 मार्गांनी शोधू शकतो: NAAT आणि Antigen.
(लॉस एंजेलिसच्या सीडीसीकडून येते)
