Butiran Produk
Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) memberi panduan bahawa ujian diagnostik pantas (Ag-RDR) pengesan antigen boleh menawarkan cara yang lebih pantas dan lebih murah untuk mendiagnosis jangkitan SARS-CoV-2 yang aktif berbanding ujian penguatan asid nukleik (NAAT), dan WHO juga mengesyorkan bahawa Ag-RDT yang memenuhi keperluan prestasi minimum boleh digunakan untuk pengesanan kes utama, pengesanan kenalan, semasa penyiasatan wabak dan untuk memantau trend kejadian penyakit dalam komuniti.
ciri-ciri
● Komprehensif:Tiga gen sasaran dikesan dalam satu ujian
● serasi:Menyesuaikan kepada peralatan biasa dengan saluran CY5, FAM, VIC/HEX.
● Prestasi cemerlang:Kepekaan dan kekhususan tinggi, LOD = 200 salinan/ml.
Parameter Teknikal
| Spesifikasi Pembungkusan | 50 ujian/kit, 100 ujian/kit |
| Wilayah Sasaran | ORF1ab, N, E |
| Sampel Berkenaan | Kahak, Swab Oropharyngeal |
| Had Pengesanan | 200 salinan/ml |
| Jumlah Kadar Kebetulan | 99.55% |
| Nilai Ct (CV,%) | ≤5.0% |
| Kadar Kebetulan Positif | 99.12% |
| Kadar Kebetulan Negatif | 100% |
| Keadaan Penyimpanan dan Tarikh Luput | Disimpan pada -20±5℃, dan sah sementara selama 12 bulan. |
| Kawalan Dalaman | ya |
| Nombor Katalog | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Pensijilan | CE |
| spesimen | Swab nasofaring, Swab Oropharyngeal, Cecair lavage alveolar, Air liur dan kahak |
| Instrumen Berkenaan | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, Sistem PCR Masa Nyata SLAN-96P |
Prosedur Ujian
1. Pengekstrakan Asid Nukleik
Operasi hendaklah dijalankan mengikut manual kit pengekstrakan.
2. Penyediaan Sistem:
1) Keluarkan reagen dan cairkan reagen sepenuhnya.Terbalikkan campuran dan sentrifuge serta-merta.N tindak balas ujian (N = bilangan sampel yang akan diuji + kawalan positif + kawalan negatif + 1) disediakan untuk sistem tindak balas, masing-masing, seperti berikut.
| Vomponentss | Isipadu untuk 1 sistem tindak balas | Isipadu untuk sistem tindak balas N |
| Campuran larutan tindak balas penguatan asid nukleik (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Campuran enzim | 2 µL | 2 µL * N |
| Jumlah isipadu | 20 µL | 20 µL * N |
2) Taburan tindak balas: Larutan tindak balas dicampur dan disentrifugasi, dan setiap tiub diagihkan dalam jumlah 20μL dalam tiub PCR yang sesuai untuk radas PCR pendarfluor.
3. Memuatkan
5μL asid nukleik sampel yang diekstrak, asid nukleik kawalan positif dan asid nukleik kawalan negatif ditambah kepada sistem tindak balas, dan jumlah isipadu tindak balas ialah 25μL.Kencangkan penutup tiub dan alihkannya ke kawasan ujian amplifikasi selepas beberapa saat sentrifugasi.
4. Ujian Penguatan PCR
1) Masukkan tiub tindak balas PCR ke dalam instrumen amplifikasi PCR pendarfluor untuk pengesanan amplifikasi.
2) Tetapan parameter kitaran:
| Program | Bilangan kitaran | Suhu | Masa tindak balas | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 saat | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 saat | |
| 60 ℃ | 30 saat | Koleksi Pendarfluor | ||
3) Tetapan pengesanan:
Saluran pengesanan ditetapkan kepada FAM, VIC , ROX dan CY5, sepadan dengan ORF1ab, gen N dan E Gene, kawalan dalaman RNase P, masing-masing."Quencher Dye" dan "Pasif Rujukan" ditetapkan kepada "Tiada" untuk instrumen ABI 7500.Tetapkan Kawalan Positif, Kawalan Negatif dan Sampel (Tidak Diketahui) mengikut turutan sampel dan tetapkan nama sampel dalam lajur "Nama Sampel".
Untuk X-POCH16, operasi dan program adalah seperti berikut:
1) Selepas ujian kendiri selesai, buka penutup dan letakkan tiub tindak balas PCR ke dalam kedudukan yang ditetapkan dalam instrumen.
2) Mulakan dengan memilih "Pakar."pilihan.Pilih pilihan "Semua" atau pilih kawasan tindak balas secara manual di sebelah kiri skrin.
3) Pilih pilihan "LOAD";pilih program ujian;klik “DONE” dan “RUN”.Program ini mengambil masa 30min42s untuk diselesaikan.
Saluran pengesanan program Lalai ditetapkan kepada FAM, VIC, ROX dan CY5, sepadan dengan ORF1ab, gen N dan E Gene, kawalan dalaman RNase P, masing-masing.
Parameter kitaran program Lalai adalah seperti berikut:
| Program | Sebilangan | Suhu | Masa tindak balas |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2minit |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 saat |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2saat |
| 60 ℃ | 13 saat | Pendarfluor |
5. Tetapan Ambang
Menurut imej yang dianalisis, laraskan nilai Mula, Nilai Tamat bagi nilai Baseline dan Ambang (Nilai mula dan nilai akhir disyorkan untuk ditetapkan masing-masing menjadi 3 dan 15, dan lengkung penguatan kawalan negatif dilaraskan menjadi rata atau lebih rendah daripada Garis ambang), klik Analisis untuk mendapatkan analisis secara automatik nilai Ct sampel.Lihat keputusan dalam antara muka Laporan.
6. Standard Kawalan Kualiti
Setiap kawalan kit mesti memenuhi keperluan berikut dengan lengkung 'S', jika tidak, percubaan adalah tidak sah.
| Saluran pengesanan | Kawalan negatif | Kawalan positif |
| FAM(ORF1ab) | Tiada Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Tiada Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Tiada Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Tiada Ct | Ct≤38 |
【Nilai Potongan】
Mengikut keputusan 100 sampel swab oropharyngeal dan 100 sampel kahak, dan dengan kaedah lengkung ROC, nilai Cut-off OFR1ab, N gen E Gen kit ini ialah Ct = 38
Soalan Lazim
Dalam kit ini, primer dan probe teknologi PCR pendarfluor masa nyata direka untuk kawasan terpelihara dan spesifik gen ORF1ab, N dan E 2019-nCoV masing-masing.Semasa penguatan PCR, probe mengikat templat, dan kumpulan wartawan 5'-hujung probe dibelah oleh enzim Taq (aktiviti exonuclease 5'→3'), dengan itu bergerak menjauhi kumpulan pelindapkejutan untuk menghasilkan isyarat pendarfluor .Keluk penguatan masa nyata diplot secara automatik berdasarkan isyarat pendarfluor yang dikesan, dan nilai Ct sampel dikira.Fluorofor FAM, VIC dan ROX dilabelkan kepada gen ORF1ab, gen N dan probe gen E.Dengan menggunakan satu ujian, pengesanan kualitatif bagi tiga gen 2019-nCoV di atas boleh dilakukan secara serentak.
Kit ini disediakan dengan kawalan dalaman yang menyasarkan gen RNase P untuk memantau pengumpulan sampel klinikal, pengendalian, pengekstrakan dan proses RT-PCR untuk mengelakkan keputusan negatif palsu.Kawalan dalaman dilabelkan dengan kumpulan pendarfluor CY5.
1. Menganalisis dan mentafsir keputusan ujian apabila instrumen adalah normal, dan kawalan positif, kawalan negatif dan keputusan ujian kawalan dalaman memenuhi standard kawalan kualiti.
2. Keluk penguatan kawalan dalaman (CY5) menunjukkan keluk S tipikal dan Ct ≤ 38, tafsiran keputusan gen sasaran tertakluk kepada syarat berikut.
| Saluran pengesanan | Tafsiran hasil gen sasaran | ||
| FMA | VIC (gen N) | ROX (gen E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Dengan lengkung penguatan S biasa, nilai Ct ialah≤38, gen sasaran yang sepadan adalah positif. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Dengan lengkung amplifikasi S biasa, uji semula gen sasaran yang sepadan bagi sampel sekali lagi. Jika nilai Ct＜ 40 dengan lengkung amplifikasi S biasa, gen sasaran yang sepadan adalah positif;jika nilai Ct≥40, gen sasaran yang sepadan adalah negatif |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Gen sasaran yang sepadan adalah negatif |
Tafsiran keputusan untuk 2019-nCoV:
Menurut keputusan ORF1ab, gen N dan gen E, tafsiran seperti berikut:
1) Jika DUA atau TIGA gen gen yang dikesan adalah positif, 2019-nCoV adalah positif;
2) Jika HANYA SATU atau TIADA gen yang dikesan positif, 2019-nCoV adalah negatif.
Nota: Lengkung amplifikasi sampel positif hendaklah dengan lengkung S biasa.Walau bagaimanapun, jika kepekatan sasaran terlalu tinggi, kawalan piawai dalaman mungkin tidak dikuatkan dan sampel boleh dinilai secara langsung sebagai positif.Jika mana-mana dua daripada gen sasaran mendapat Ct≤38, 2019-nCoV adalah positif.Jika mana-mana dua daripada gen sasaran mendapat Ct≥40, 2019-nCoV adalah negatif.Jika Ct≥40, atau tidak menunjukkan nilai, tafsiran keputusan gen sasaran adalah negatif.
3. Jika semua nilai Ct saluran FAM, VIC, ROX dan Cy5 adalah lebih daripada 38 atau tiada lengkung amplifikasi S tipikal yang jelas:
1) Terdapat/ada bahan dalam sampel yang menghalang tindak balas PCR.Adalah disyorkan untuk mencairkan sampel untuk diuji semula.
2) Proses pengekstrakan asid nukleik adalah tidak normal, jadi dicadangkan untuk mengekstrak semula
asid nukleik untuk ujian semula.
3) Sampel ini BUKAN sampel yang layak pada masa pensampelan, atau terdegradasi
semasa pengangkutan dan penyimpanan.
Ia adalah 2 cara kita boleh mengesan situasi ini: NAAT dan Antigen.
(Daripada CDC Los Angeles)
