ထုတ်ကုန်အသေးစိတ်
ကမ္ဘာ့ကျန်းမာရေးအဖွဲ့ (WHO) သည် နျူကလိစ်အက်ဆစ်ချဲ့စမ်းသပ်မှုများ (NAATs) ထက် တက်ကြွသော SARS-CoV-2 ကူးစက်မှုကို မြန်မြန်ဆန်ဆန်နှင့် စျေးသက်သာသော ရောဂါရှာဖွေနိုင်သော antigen- detecting antigen- detecting လျင်မြန်သောရောဂါရှာဖွေစမ်းသပ်မှုများအား လမ်းညွှန်ပေးထားပြီး WHO မှလည်း အကြံပြုထားသည်။ Ag-RDTs သည် အနိမ့်ဆုံးစွမ်းဆောင်ရည်လိုအပ်ချက်များနှင့် ကိုက်ညီသော ပင်မရောဂါရှာဖွေခြင်း၊ အဆက်အသွယ်ခြေရာခံခြင်း၊ ရောဂါဖြစ်ပွားမှုစုံစမ်းစစ်ဆေးမှုများအတွင်းနှင့် ရပ်ရွာများတွင် ရောဂါဖြစ်ပွားမှုလမ်းကြောင်းများကို စောင့်ကြည့်ရန်အတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။
အင်္ဂါရပ်များ
● ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်-စမ်းသပ်မှုတစ်ခုတွင် ပစ်မှတ်သုံးမျိုးဗီဇက တွေ့ရှိသည်။
● လိုက်ဖက်သည်-CY5၊ FAM၊ VIC/HEX ချန်နယ်များပါရှိသော အသုံးများသည့် စက်ကိရိယာများနှင့် လိုက်လျောညီထွေဖြစ်အောင်။
● အထူးကောင်းမွန်သော စွမ်းဆောင်ရည်-မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် တိကျမှု၊ LOD = 200 ကော်ပီ/မီလီလီတာ။
နည်းပညာဆိုင်ရာ ကန့်သတ်ချက်များ
| Packing Specification | စမ်းသပ်မှု 50/kit၊ စမ်းသပ်မှု 100/kit |
| ပစ်မှတ်ဒေသ | ORF1ab၊ N၊ E |
| အသုံးပြုနိုင်သော နမူနာ | သလိပ်၊ Oropharyngeal Swab |
| ထောက်လှမ်းမှု ကန့်သတ်ချက် | စောင်ရေ 200/ml |
| စုစုပေါင်း တိုက်ဆိုင်မှုနှုန်း | 99.55% |
| Ct တန်ဖိုး (CV,%) | ≤5.0% |
| အပြုသဘောဆောင်သော တိုက်ဆိုင်မှုနှုန်း | 99.12% |
| အနုတ်လက္ခဏာတိုက်ဆိုင်မှုနှုန်း | 100% |
| သိုလှောင်မှုအခြေအနေများနှင့် သက်တမ်းကုန်ဆုံးရက်စွဲ | -20 ± 5 ℃ တွင် သိမ်းဆည်းထားပြီး 12 လအထိ ယာယီသက်တမ်းရှိသည်။ |
| အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှု | ဟုတ်ကဲ့ |
| ကတ်တလောက်နံပါတ် | A7793YF-50T၊ A7793YF-100T |
| အောင်လက်မှတ် | CE |
| နမူနာများ | Nasopharyngeal swab၊ Oropharyngeal swab၊ Alveolar lavage fluid၊ တံတွေးနှင့် သလိပ်၊ |
| အသုံးပြုနိုင်သော တူရိယာ | ABI 7500၊ Roche Light Cycler 480Ⅱ၊ Roche Cobas z 480၊ SLAN-96P အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR စနစ် |
စမ်းသပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်း
1. Nucleic Acid ထုတ်ယူခြင်း။
ထုတ်ယူသည့်ကိရိယာ၏လက်စွဲအတိုင်း လည်ပတ်ဆောင်ရွက်သင့်သည်။
2. စနစ်ပြင်ဆင်မှု-
1) ဓါတ်ဆားကိုထုတ်ပြီး ဓါတ်ဆားရည်ကို သန့်စင်အောင်သုတ်ပါ။အရောအနှောကို ချက်ခြင်းပြောင်းပြန်ပြီး centrifuge လုပ်ပါ။N စမ်းသပ်မှုတုံ့ပြန်မှုများ (N = စမ်းသပ်မည့်နမူနာအရေအတွက် + အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှု + အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှု + 1) တုံ့ပြန်မှုစနစ်များအတွက် အောက်ပါအတိုင်း အသီးသီးပြင်ဆင်ထားပါသည်။
| ဗိုနက်များ | တုံ့ပြန်မှုစနစ်အတွက် အတွဲ ၁ | N တုံ့ပြန်မှုစနစ်အတွက် ပမာဏ |
| Nucleic acid ချဲ့ထွင်မှု တုံ့ပြန်မှုဖျော်ရည် ရောနှော (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| အင်ဇိုင်းအရောအနှော | 2 µL | 2 µL * N |
| စုစုပေါင်းအသံအတိုးအကျယ် | 20 µL | 20 µL * N |
2) တုံ့ပြန်မှုဖြန့်ဖြူးခြင်း- တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်အား ရောနှောပြီး အာရုံစူးစိုက်မှုပြုလုပ်ထားပြီး ပြွန်တစ်ခုစီကို fluorescence PCR စက်အတွက် သင့်လျော်သော PCR ပြွန်အတွင်း 20μL ပမာဏဖြင့် ဖြန့်ဝေခဲ့သည်။
3. Loading
ထုတ်ယူထားသောနမူနာ၏ 5μL သည် nucleic acid ၊ positive control nucleic acid နှင့် negative control nucleic acid ကို တုံ့ပြန်မှုစနစ်များသို့ ပေါင်းထည့်ထားပြီး စုစုပေါင်းတုံ့ပြန်မှုပမာဏမှာ 25μL ဖြစ်သည်။ပြွန်အဖုံးကို ဖိထားပြီး စက္ကန့်အနည်းငယ်ကြာအောင် ဗဟိုပြုပြီးနောက် အသံချဲ့စက်စမ်းသပ်သည့်နေရာကို ရွှေ့ပါ။
4. PCR Amplification Assay
1) ချဲ့ထွင်မှုကို သိရှိနိုင်စေရန် PCR တုံ့ပြန်မှုပြွန်ကို ချောင်း PCR ချဲ့ထွင်မှုကိရိယာထဲသို့ ထည့်ပါ။
2) Cycle parameter ဆက်တင်-
| အစီအစဉ် | သံသရာအရေအတွက် | အပူချိန် | တုံ့ပြန်ချိန် | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | ၁၀ မိနစ် | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 စက္ကန့် | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 စက္ကန့် | |
| 60 ℃ | 30 စက္ကန့် | မီးချောင်း စုစည်းမှု | ||
3) ထောက်လှမ်းခြင်း ဆက်တင်များ
ထောက်လှမ်းမှုလမ်းကြောင်းများကို FAM၊ VIC၊ ROX နှင့် CY5 တွင် သတ်မှတ်ထားပြီး ORF1ab၊ N gene၊ နှင့် E Gene၊ RNase P အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှုတို့ကို အသီးသီးသတ်မှတ်ထားသည်။"Quencher Dye" နှင့် "Passive Reference" ကို ABI 7500 တူရိယာအတွက် "None" ဟု သတ်မှတ်ထားသည်။နမူနာများနှင့် ကိုက်ညီသည့် အပြုသဘောဆောင်သော ထိန်းချုပ်မှု၊ အနုတ်လက္ခဏာ ထိန်းချုပ်မှုနှင့် နမူနာ (အမည်မသိ) ကို သတ်မှတ်ပြီး "နမူနာအမည်" ကော်လံတွင် နမူနာအမည်ကို သတ်မှတ်ပါ။
X-POCH16 အတွက်၊ လည်ပတ်မှုနှင့် ပရိုဂရမ်မှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။
1) ကိုယ်တိုင်စမ်းသပ်မှုပြီးပါက အဖုံးဖွင့်ပြီး PCR တုံ့ပြန်မှုပြွန်များကို တူရိယာအတွင်းရှိ သတ်မှတ်ထားသော အနေအထားများတွင် ထည့်သွင်းပါ။
2) "Exper" ကိုရွေးချယ်ခြင်းဖြင့်စတင်ပါ။ရွေးချယ်မှု။"အားလုံး" ရွေးချယ်မှုကို ရွေးချယ်ပါ သို့မဟုတ် မျက်နှာပြင်၏ ဘယ်ဘက်ခြမ်းရှိ တုံ့ပြန်မှုဧရိယာကို ကိုယ်တိုင်ရွေးချယ်ပါ။
3) "LOAD" option ကိုရွေးချယ်ပါ။စမ်းသပ်မှုအစီအစဉ်ကိုရွေးချယ်ပါ။"DONE" နှင့် "RUN" ကိုနှိပ်ပါ။အစီအစဉ်ပြီးဆုံးရန် 30min42s ကြာပါသည်။
မူလပရိုဂရမ်၏ ထောက်လှမ်းမှုလမ်းကြောင်းများကို FAM၊ VIC၊ ROX နှင့် CY5 တွင် သတ်မှတ်ထားပြီး ORF1ab၊ N gene၊ နှင့် E Gene၊ RNase P အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှုတို့ကို အသီးသီးသတ်မှတ်ထားသည်။
Default ပရိုဂရမ်၏ စက်ဝန်း ကန့်သတ်ချက်များမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။
| အစီအစဉ် | အရေအတွက် | အပူချိန် | တုံ့ပြန်ချိန် |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 မိနစ် |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 စက္ကန့် |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 စက္ကန့် |
| 60 ℃ | 13 စက္ကန့် | မီးချောင်း |
5. Threshold ဆက်တင်
ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသောပုံအရ၊ စတင်တန်ဖိုး၊ အခြေခံတန်ဖိုး၏အဆုံးတန်ဖိုးနှင့် အဆင့်သတ်မှတ်မှုတန်ဖိုးကို ချိန်ညှိပါ (စတင်တန်ဖိုးနှင့် အဆုံးတန်ဖိုးကို 3 နှင့် 15 အသီးသီးသတ်မှတ်ရန် အကြံပြုထားပြီး အနှုတ်ထိန်းချုပ်မှု၏ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေးကို အပြားဖြစ်စေရန် ချိန်ညှိထားသည်။ သတ်မှတ်ချက်မျဉ်းထက်နိမ့်သည်) ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုနမူနာ Ct တန်ဖိုးကို အလိုအလျောက်ရရှိရန် Analysis ကိုနှိပ်ပါ။ရလဒ်များကို Report interface တွင်ကြည့်ပါ။
6. အရည်အသွေးထိန်းချုပ်ရေးစံ
အစုံလိုက်ထိန်းချုပ်မှုတစ်ခုစီသည် 'S' မျဉ်းကွေးဖြင့် အောက်ပါလိုအပ်ချက်များနှင့် ကိုက်ညီရမည်၊ သို့မဟုတ်ပါက စမ်းသပ်မှုမှာ မမှန်ကန်ပါ။
| ထောက်လှမ်းရေးလမ်းကြောင်းများ | အပျက်သဘောဆောင်သည်။ | အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှု |
| FAM(ORF1ab) | Ct မရှိပါ။ | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ct မရှိပါ။ | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ct မရှိပါ။ | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ct မရှိပါ။ | Ct≤38 |
【ဖြတ်တောက်ခြင်းတန်ဖိုး】
oropharyngeal swab နမူနာ 100 နှင့် သလိပ်နမူနာ 100 ၏ရလဒ်များအရ ROC မျဉ်းကွေးနည်းလမ်းဖြင့် OFR1ab, N genes E Gene ၏ Cut-off value သည် Ct = 38 ဖြစ်သည်။
အမြဲမေးလေ့ရှိသောမေးခွန်းများ
ဤကိရိယာအစုံတွင်၊ အချိန်နှင့်တပြေးညီ fluorescent PCR နည်းပညာ၏ ပရိုဆက်ဆာများနှင့် ပရိုဆက်ဆာများကို 2019-nCoV ၏ ORF1ab၊ N နှင့် E ဗီဇအသီးသီး၏ ထိန်းသိမ်းပြီး သီးခြားဒေသများအတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည်။PCR ချဲ့ထွင်မှုအတွင်း၊ ပလေယာသည် ပုံစံပလိတ်နှင့် ချိတ်ဆက်ထားပြီး၊ စုံစမ်းစစ်ဆေးမှု၏ 5' အဆုံးသတင်းထောက်အဖွဲ့အား Taq အင်ဇိုင်း (5'→3' exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်) ဖြင့် ဖယ်ထုတ်ထားသောကြောင့် မီးငြိမ်းသွားသောအုပ်စုမှ အလင်းရောင်အချက်ပြမှုကို ထုတ်ပေးရန်၊ .အချိန်နှင့်တစ်ပြေးညီ ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေးကို ရှာဖွေတွေ့ရှိထားသော fluorescence အချက်ပြမှုအပေါ် အခြေခံ၍ အလိုအလျောက် ကွက်တိပုံဖော်ထားပြီး နမူနာ Ct တန်ဖိုးကို တွက်ချက်ပါသည်။FAM၊ VIC နှင့် ROX fluorophores များကို ORF1ab gene၊ N gene နှင့် E gene probes များတွင် တံဆိပ်တပ်ထားသည်။စမ်းသပ်မှုတစ်ခုအသုံးပြုခြင်းဖြင့်၊ 2019-nCoV ၏အထက်ပါဗီဇသုံးမျိုး၏အရည်အသွေးကိုရှာဖွေတွေ့ရှိမှုကိုတစ်ပြိုင်နက်လုပ်ဆောင်နိုင်သည်။
မှားယွင်းသော-အနုတ်လက္ခဏာရလဒ်များကိုရှောင်ရှားရန် ဆေးခန်းနမူနာများစုဆောင်းခြင်း၊ ကိုင်တွယ်ခြင်း၊ ထုတ်ယူခြင်းနှင့် RT-PCR လုပ်ငန်းစဉ်များကို စောင့်ကြည့်ရန် RNase P gene ကို ပစ်မှတ်ထားကာ အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှုတစ်ခုပါရှိသည်။အတွင်းထိန်းချုပ်မှုကို CY5 ချောင်းအုပ်စုဖြင့် တံဆိပ်တပ်ထားသည်။
1. ကိရိယာသည် ပုံမှန်ဖြစ်ပြီး အပြုသဘောဆောင်သော ထိန်းချုပ်မှု၊ အနုတ်လက္ခဏာ ထိန်းချုပ်မှုနှင့် အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှု စစ်ဆေးမှုရလဒ်များသည် အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုစံနှုန်းနှင့် ကိုက်ညီသည့်အခါ စစ်ဆေးမှုရလဒ်များကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာပြီး အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုပါ။
2. အတွင်းထိန်းချုပ်မှု၏ ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေး (CY5) သည် ပုံမှန် S မျဉ်းကွေးနှင့် Ct ≤ 38 ကိုပြသသည်၊၊ ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများ၏ ရလဒ်များကို အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုမှုသည် အောက်ပါအခြေအနေများနှင့် သက်ဆိုင်ပါသည်။
| ထောက်လှမ်းရေးလမ်းကြောင်းများ | ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများ၏ ရလဒ်များကို အဓိပ္ပာယ်ပြန်ဆိုခြင်း။ | ||
| FMA | VIC (N ဗီဇ) | ROX (အီး ဗီဇ) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | ပုံမှန် S amplification မျဉ်းကွေးဖြင့်၊ Ct တန်ဖိုးသည် ≤38 ဖြစ်ပြီး၊ သက်ဆိုင်သော ပစ်မှတ်ဗီဇသည် အပြုသဘောဆောင်ပါသည်။ |
| ၃၈ ＜ Ct ＜ ၄၀ | ၃၈ ＜ Ct ＜ ၄၀ | ၃၈ ＜ Ct ＜ ၄၀ | ပုံမှန် S amplification မျဉ်းကွေးဖြင့်၊ နမူနာ၏ သက်ဆိုင်ရာ ပစ်မှတ် ဗီဇကို ထပ်မံ စမ်းသပ်ပါ။ ပုံမှန် S amplification မျဉ်းကွေးဖြင့် Ct တန်ဖိုး 40 သည် ဆက်စပ်ပစ်မှတ် gene သည် အပြုသဘောဆောင်ပါသည်။Ct value≥40 ဖြစ်ပါက၊ သက်ဆိုင်ရာပစ်မှတ် gene သည် အနုတ်လက္ခဏာဖြစ်သည်။ |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | သက်ဆိုင်သောပစ်မှတ်ဗီဇသည် အနုတ်လက္ခဏာဖြစ်သည်။ |
2019-nCoV အတွက် ရလဒ်များ၏ စကားပြန်-
ORF1ab၊ N gene နှင့် E gene တို့၏ ရလဒ်များအရ အောက်ပါအတိုင်း အဓိပ္ပါယ်ဖွင့်ဆိုချက်။
1) ရှာဖွေတွေ့ရှိထားသော ဗီဇများ၏ ဗီဇနှစ်ခု သို့မဟုတ် သုံးခုသည် အပြုသဘောဆောင်ပါက၊ 2019-nCoV သည် အပေါင်းလက္ခဏာဖြစ်သည်။
2) စစ်ဆေးတွေ့ရှိထားသော မျိုးဗီဇတစ်ခု သို့မဟုတ် တစ်ခုမျှသာ အပေါင်းလက္ခဏာဆောင်ပါက 2019-nCoV သည် အနုတ်လက္ခဏာဖြစ်သည်။
မှတ်ချက်- အပြုသဘောနမူနာ၏ ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေးသည် ပုံမှန် S မျဉ်းကွေးနှင့် ဖြစ်သင့်သည်။သို့ရာတွင်၊ ပစ်မှတ်အာရုံစူးစိုက်မှု အလွန်မြင့်မားပါက၊ အတွင်းပိုင်းစံထိန်းချုပ်မှုကို ချဲ့ထွင်နိုင်မည်မဟုတ်သည့်အပြင် နမူနာအား အပြုသဘောအဖြစ် တိုက်ရိုက်အကဲဖြတ်နိုင်သည်။ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇနှစ်ခုမှ Ct≤38 ရရှိပါက 2019-nCoV သည် အပေါင်းလက္ခဏာဖြစ်သည်။ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇနှစ်ခုမှ Ct≥40 ရရှိပါက 2019-nCoV သည် အနုတ်လက္ခဏာဖြစ်သည်။Ct≥40 သို့မဟုတ် တန်ဖိုးမပြပါက၊ ပစ်မှတ်ဗီဇ၏ ရလဒ်များကို အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုခြင်းသည် အနုတ်လက္ခဏာဖြစ်သည်။
3. FAM၊ VIC၊ ROX နှင့် Cy5 ချန်နယ်များ၏ Ct တန်ဖိုးများအားလုံးသည် 38 ထက်ပိုနေပါက သို့မဟုတ် ပုံမှန် S amplification မျဉ်းကွေးမရှိပါ-
1) နမူနာတွင် PCR တုံ့ပြန်မှုကို ဟန့်တားသော အရာ(များ) ရှိပါသည်။ပြန်လည်စမ်းသပ်ရန်အတွက် နမူနာကို မှေးမှိန်ရန် အကြံပြုထားသည်။
2) nucleic acid ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်သည် မူမမှန်သောကြောင့် ပြန်လည်ထုတ်ယူရန် အကြံပြုထားသည်။
nucleic acid ကို ပြန်လည်စမ်းသပ်ရန်။
၃) ဤနမူနာသည် နမူနာယူချိန်တွင် အရည်အချင်းပြည့်မီသောနမူနာမဟုတ်ပါ၊ သို့မဟုတ် ကျဆင်းသွားပါသည်။
သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးနှင့်သိုလှောင်မှုအတွင်း။
၎င်းတို့သည် ဤအခြေအနေများကို NAAT နှင့် Antigen တို့ကို ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်သည့် နည်းလမ်း ၂ ခုဖြစ်သည်။
( Los Angeles ၏ CDC မှလာသည် )
