Produkt detalj
Verdens helseorganisasjon (WHO) veileder at antigen-detekterende raske diagnostiske tester (Ag-RDR) kan tilby en raskere og rimeligere måte å diagnostisere aktiv SARS-CoV-2-infeksjon enn nukleinsyreamplifikasjonstester (NAAT), og WHO anbefaler også at Ag-RDT-er som oppfyller minimumskravene til ytelse kan brukes til primærtilfelledeteksjon, kontaktsporing, under utbruddsundersøkelser og for å overvåke trender for sykdomsforekomst i lokalsamfunn.
Egenskaper
● Omfattende:Tre målgen oppdager i en test
● kompatibel:Adaptiv til vanlig utstyr med CY5, FAM, VIC/HEX kanaler.
● Utmerket ytelse:Høy sensitivitet og spesifisitet, LOD = 200 kopier/ml.
Teknisk parameter
| Pakkespesifikasjon | 50 tester/sett, 100 tester/sett |
| Målregion | ORF1ab, N, E |
| Gjeldende prøve | Sputum, orofaryngeal vattpinne |
| Deteksjonsgrense | 200 eksemplarer/ml |
| Total tilfeldighetsrate | 99,55 % |
| Ct-verdi (CV,%) | ≤5,0 % |
| Positiv tilfeldighetsrate | 99,12 % |
| Negativ tilfeldighetsrate | 100 % |
| Lagringsbetingelser og utløpsdato | Lagret ved -20±5℃, og er midlertidig gyldig i 12 måneder. |
| Indre kontroll | Ja |
| Katalognummer | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifisering | CE |
| Prøver | Nasofaryngeal vattpinne, orofaryngeal vattpinne, alveolær skyllevæske, spytt og oppspytt |
| Gjeldende instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P sanntids PCR-system |
Test prosedyre
1. Nukleinsyreekstraksjon
Driften skal utføres i henhold til manualen til ekstraksjonssettet.
2. Systemforberedelse:
1) Ta ut reagenset og tin reagenset fullstendig.Vend blandingen og sentrifuger umiddelbart.N testreaksjoner (N = antall prøver som skal testes + positiv kontroll + negativ kontroll + 1) er forberedt for henholdsvis reaksjonssystemer som følger.
| Komponenter | Volum for 1 reaksjonssystem | Volum for N-reaksjonssystem |
| Nukleinsyreamplifikasjonsreaksjonsløsning Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Enzymblanding | 2 µL | 2 µL * N |
| Totalt volum | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reaksjonsfordeling: Reaksjonsløsningen ble blandet og sentrifugert, og hvert rør ble dispensert i en mengde på 20μL i et PCR-rør egnet for et fluorescens-PCR-apparat.
3. Lasting
5μL av den ekstraherte prøvenukleinsyren, positiv kontrollnukleinsyre og negativ kontrollnukleinsyre tilsettes reaksjonssystemene, og det totale reaksjonsvolumet er 25μL.Fest rørdekselet og flytt det til amplifikasjonstestområdet etter noen sekunders sentrifugering.
4. PCR-amplifikasjonsanalyse
1) Sett PCR-reaksjonsrøret inn i det fluorescerende PCR-amplifikasjonsinstrumentet for amplifikasjonsdeteksjon.
2) Syklusparameterinnstilling:
| Program | Antall sykluser | Temperatur | Reaksjonstid | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sek | |
| 60 ℃ | 30 sek | Fluorescenssamling | ||
3) Deteksjonsinnstillinger:
Deteksjonskanalene er satt til FAM, VIC ,ROX og CY5, tilsvarende henholdsvis ORF1ab, N-gen og E-gen, RNase P intern kontroll."Quencher Dye" og "Passive Reference" er satt til "None" for ABI 7500-instrumentet.Still inn positiv kontroll, negativ kontroll og prøve (ukjent) i rekkefølgen som prøvene samsvarer med, og angi prøvenavnet i kolonnen "Prøvenavn".
For X-POCH16 er operasjonen og programmet som følger:
1) Etter at selvtesten er fullført, åpne lokket og sett PCR-reaksjonsrørene i de angitte posisjonene i instrumentet.
2) Start med å velge "Exper."alternativ.Velg alternativet "Alle" eller velg reaksjonsområdet manuelt på venstre side av skjermen.
3) Velg alternativet "LOAD";velg testprogrammet;klikk på "FERDIG" og "KJØR".Programmet tar 30min42s å fullføre.
Deteksjonskanalene til standardprogrammet er satt til FAM, VIC, ROX og CY5, tilsvarende henholdsvis ORF1ab, N-genet og E-genet, RNase P internkontroll.
Syklusparameteren til standardprogrammet er som følger:
| Program | Antall | Temperatur | Reaksjonstid |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 sek |
| 60 ℃ | 13 sek | Fluorescens |
5. Terskelinnstilling
I henhold til det analyserte bildet, juster startverdien, sluttverdien for baseline og terskelverdi (startverdi og sluttverdi anbefales å settes til henholdsvis 3 og 15, og forsterkningskurven til den negative kontrollen justeres til å være flat eller lavere enn terskellinjen), klikker du på Analyse for automatisk å få analysen til prøvens Ct-verdi.Se resultatene i rapportgrensesnittet.
6. Kvalitetskontrollstandard
Hver kontroll av settet må oppfylle følgende krav med 'S'-kurve, ellers er eksperimentet ugyldig.
| Deteksjonskanaler | Negativ kontroll | Positiv kontroll |
| FAM(ORF1ab) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ingen Ct | Ct≤38 |
【Skjæringsverdi】
I henhold til resultatene av 100 orofaryngeale vattpinneprøver og 100 sputumprøver, og med ROC-kurvemetoden, er Cut-off-verdien til OFR1ab, N gener E-gen i dette settet Ct = 38
FAQ
I dette settet er primere og prober av sanntids fluorescerende PCR-teknologi utformet til de konserverte og spesifikke regionene til henholdsvis ORF1ab, N og E-genet til 2019-nCoV.Under PCR-amplifisering binder proben seg til malen, og 5'-ende-reportergruppen til proben spaltes av Taq-enzymet (5'→3'-eksonukleaseaktivitet), og beveger seg derved bort fra quenching-gruppen for å generere et fluorescerende signal .Sanntidsamplifikasjonskurven plottes automatisk basert på det detekterte fluorescenssignalet, og prøvens Ct-verdi beregnes.FAM-, VIC- og ROX-fluoroforer er merket til ORF1ab-gen-, N-gen- og E-genprober.Ved å bruke én test kan kvalitativ påvisning av de tre ovennevnte genene av 2019-nCoV utføres samtidig.
Settet er utstyrt med en intern kontroll rettet mot RNase P-genet for å overvåke klinisk prøveinnsamling, håndtering, ekstraksjon og RT-PCR-prosess for å unngå falske negative resultater.Den interne kontrollen er merket med en CY5-fluorescerende gruppe.
1. Analyser og tolk testresultater når instrumentet er normalt, og den positive kontrollen, den negative kontrollen og internkontrolltestresultatet oppfyller kvalitetskontrollstandarden.
2. Amplifikasjonskurven for intern kontroll (CY5) viser en typisk S-kurve og Ct ≤ 38, tolkning resultatene av målgener er utsatt for følgende forhold.
| Deteksjonskanaler | Tolke resultatene av målgener | ||
| FMA | VIC (N-gen) | ROX (E-gen) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Med en typisk S-amplifikasjonskurve, er Ct-verdien ≤38, det tilsvarende målgenet er positivt. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Med en typisk S-amplifikasjonskurve, test det tilsvarende målgenet til prøven på nytt. Hvis Ct-verdien ＜ 40 med en typisk S-amplifikasjonskurve, er det tilsvarende målgenet positivt;hvis Ct-verdien ≥40, er det tilsvarende målgenet negativt |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Det tilsvarende målgenet er negativt |
Tolkning av resultater for 2019-nCoV:
I følge resultatene av ORF1ab, N-genet og E-genet, tolkning som følger:
1) Hvis TO eller TRE gener av de påviste genene er positive, er 2019-nCoV positiv;
2) Hvis KUN ETT eller INGEN av de påviste genene er positive, er 2019-nCoV negativ.
Merk: Amplifikasjonskurven til den positive prøven skal være med en typisk S-kurve.Men hvis målkonsentrasjonen er for høy, kan det hende at den interne standardkontrollen ikke forsterkes, og prøven kan direkte bedømmes som positiv.Hvis to av målgenene får Ct≤38, er 2019-nCoV positiv.Hvis to av målgenene får Ct≥40, er 2019-nCoV negativ.Hvis Ct≥40, eller viser ingen verdi, tolkning er resultatene av målgenet negative.
3. Hvis alle Ct-verdiene til FAM-, VIC-, ROX- og Cy5-kanaler er mer enn 38 eller det ikke er noen åpenbar typisk S-amplifikasjonskurve:
1) Det er substans(er) i prøven som hemmer PCR-reaksjonen.Det anbefales å fortynne prøven for å bli testet på nytt.
2) Prosessen med nukleinsyreekstraksjon er unormal, så det foreslås å ekstrahere på nytt
nukleinsyre for re-test.
3) Denne prøven var IKKE en kvalifisert prøve på prøvetakingstidspunktet, eller degradert
under transport og lagring.
De er 2 måter vi kan oppdage denne situasjonen på: NAAT og Antigen.
(Kommer fra CDC i Los Angeles)
