Szczegóły produktu
Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) wskazuje, że szybkie testy diagnostyczne wykrywające antygen (Ag-RDR) mogą oferować szybszy i tańszy sposób diagnozowania aktywnej infekcji SARS-CoV-2 niż testy amplifikacji kwasów nukleinowych (NAAT). że Ag-RDT spełniające minimalne wymagania dotyczące wydajności mogą być używane do wykrywania pierwotnego przypadku, śledzenia kontaktów, podczas dochodzeń w sprawie ognisk i do monitorowania trendów zachorowań w społecznościach.
Cechy
● Kompleksowe:Trzy docelowe geny wykryte w jednym teście
● kompatybilny:Dostosowany do powszechnego sprzętu z kanałami CY5, FAM, VIC/HEX.
● Doskonała wydajność:Wysoka czułość i swoistość, LOD = 200 kopii/ml.
Parametr techniczny
| Specyfikacja pakowania | 50 testów/zestaw, 100 testów/zestaw |
| Region docelowy | ORF1ab, N, E |
| Obowiązująca próbka | Plwocina, wymaz z jamy ustnej i gardła |
| Granica wykrywalności | 200 kopii/ml |
| Całkowity współczynnik zbieżności | 99,55% |
| Wartość Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Pozytywny współczynnik zbieżności | 99,12% |
| Współczynnik koincydencji ujemnej | 100% |
| Warunki przechowywania i data ważności | Przechowywany w temperaturze -20±5℃ i jest ważny tymczasowo przez 12 miesięcy. |
| Kontrola wewnętrzna | Tak |
| Numer katalogowy | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Orzecznictwo | CE |
| Okazy | Wymaz z jamy nosowo-gardłowej, Wymaz z jamy ustnej i gardła, Płyn z płukania pęcherzyków płucnych, Ślina i plwocina |
| Obowiązujący instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR System |
Procedura testowa
1. Ekstrakcja kwasu nukleinowego
Operację należy przeprowadzić zgodnie z instrukcją zestawu do odsysania.
2. Przygotowanie systemu:
1) Wyjąć odczynnik i całkowicie go rozmrozić.Natychmiast odwrócić mieszaninę i odwirować.N reakcji testowych (N = liczba badanych próbek + kontrola pozytywna + kontrola negatywna + 1) przygotowuje się odpowiednio dla układów reakcyjnych w następujący sposób.
| Wymioty | Objętość dla 1 układu reakcyjnego | Objętość dla układu reakcji N |
| Roztwór reakcyjny amplifikacji kwasów nukleinowych Mix (A7793YF) | 18 ul | 18 µl * N |
| Mieszanina enzymów | 2 ul | 2 µL * N |
| Maksymalna głośność | 20 ul | 20 µl * N |
2) Dystrybucja reakcji: Roztwór reakcyjny zmieszano i odwirowano, a każdą probówkę umieszczono w ilości 20 μl w probówce PCR odpowiedniej dla aparatury do fluorescencyjnego PCR.
3. Ładowanie
5 μl kwasu nukleinowego wyekstrahowanej próbki, kwasu nukleinowego kontroli pozytywnej i kwasu nukleinowego kontroli ujemnej dodaje się do układów reakcyjnych, a całkowita objętość reakcji wynosi 25 μl.Zamocuj pokrywę probówki i po kilku sekundach wirowania przenieś ją do obszaru testu amplifikacji.
4. Test amplifikacji PCR
1) Włóż probówkę do reakcji PCR do aparatu do amplifikacji fluorescencyjnej reakcji PCR w celu wykrycia amplifikacji.
2) Ustawienie parametrów cyklu:
| Program | Liczba cykli | Temperatura | Czas reakcji | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 minut | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sek | |
| 60℃ | 30 sek | Kolekcja fluorescencyjna | ||
3) Ustawienia wykrywania:
Kanały detekcji są ustawione na FAM, VIC, ROX i CY5, odpowiadające odpowiednio ORF1ab, genowi N i genowi E, kontroli wewnętrznej RNazy P.„Quencher Dye” i „Passive Reference” są ustawione na „Brak” dla przyrządu ABI 7500.Ustaw kontrolę dodatnią, kontrolę ujemną i próbkę (nieznana) w takiej kolejności, w jakiej próbki odpowiadają, i ustaw nazwę próbki w kolumnie „Nazwa próbki”.
W przypadku X-POCH16 obsługa i program są następujące:
1) Po zakończeniu autotestu otwórz wieczko i umieść probówki do reakcji PCR w wyznaczonych miejscach w aparacie.
2) Zacznij od wybrania „Exper”.opcja.Wybierz opcję „Wszystkie” lub ręcznie wybierz obszar reakcji po lewej stronie ekranu.
3) Wybierz opcję „ŁADUJ”;wybierz program testowy;kliknij „GOTOWE” i „URUCHOM”.Program trwa 30 minut 42 sekund.
Kanały detekcji programu domyślnego są ustawione na FAM, VIC, ROX i CY5, odpowiednio dla ORF1ab, genu N i genu E, kontroli wewnętrznej RNazy P.
Parametry cyklu programu domyślnego są następujące:
| Program | Liczba | Temperatura | Czas reakcji |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 sekundy |
| 60℃ | 13 sek | Fluorescencja |
5. Ustawienie progu
Zgodnie z analizowanym obrazem dostosuj wartość początkową, wartość końcową linii bazowej i wartość progową (zaleca się ustawienie wartości początkowej i końcowej odpowiednio na 3 i 15, a krzywa amplifikacji kontroli ujemnej jest ustawiona tak, aby była płaska lub niższa od linii progowej), kliknij Analiza, aby automatycznie pobrać z analizy wartość Ct próbki.Wyświetl wyniki w interfejsie raportu.
6. Standard kontroli jakości
Każda kontrola zestawu musi spełniać następujące wymagania z krzywą „S”, w przeciwnym razie eksperyment jest nieważny.
| Kanały detekcji | Negatywna kontrola | Kontrola pozytywna |
| FAM(ORF1ab) | Nie Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Nie Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Nie Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Nie Ct | Ct≤38 |
【Wartość graniczna】
Zgodnie z wynikami 100 próbek wymazów z jamy ustnej i gardła i 100 próbek plwociny oraz metodą krzywej ROC, wartość odcięcia genów OFR1ab, N genu E tego zestawu wynosi Ct = 38
Często zadawane pytania
W tym zestawie startery i sondy technologii fluorescencyjnej PCR w czasie rzeczywistym są zaprojektowane odpowiednio dla konserwatywnych i specyficznych regionów genów ORF1ab, N i E 2019-nCoV.Podczas amplifikacji PCR sonda wiąże się z matrycą, a grupa reporterowa sondy na końcu 5' jest rozszczepiana przez enzym Taq (aktywność egzonukleazy 5'→3'), odsuwając się w ten sposób od grupy wygaszającej i generując sygnał fluorescencyjny .Krzywa amplifikacji w czasie rzeczywistym jest automatycznie wykreślana na podstawie wykrytego sygnału fluorescencji i obliczana jest wartość Ct próbki.Fluorofory FAM, VIC i ROX są znakowane na sondach genu ORF1ab, genu N i genu E.Za pomocą jednego testu można jednocześnie przeprowadzić jakościowe wykrywanie trzech powyższych genów 2019-nCoV.
Zestaw jest dostarczany z kontrolą wewnętrzną ukierunkowaną na gen RNazy P w celu monitorowania pobierania próbek klinicznych, postępowania z nimi, ekstrakcji i procesu RT-PCR w celu uniknięcia wyników fałszywie ujemnych.Kontrola wewnętrzna jest wyznakowana grupą fluorescencyjną CY5.
1. Analizuj i interpretuj wyniki testu, gdy instrument jest normalny, a kontrola pozytywna, kontrola negatywna i wynik testu kontroli wewnętrznej spełniają standard kontroli jakości.
2. Krzywa amplifikacji kontroli wewnętrznej (CY5) przedstawia typową krzywą S i Ct ≤ 38, interpretacja wyników genów docelowych podlega następującym warunkom.
| Kanały detekcji | Interpretacja wyników genów docelowych | ||
| FMA | VIC (gen N) | ROX (gen E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Przy typowej krzywej amplifikacji S wartość Ct wynosi ≤38, odpowiedni gen docelowy jest dodatni. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Przy typowej krzywej amplifikacji S ponownie przetestuj odpowiedni gen docelowy w próbce. Jeśli wartość Ct < 40 z typową krzywą amplifikacji S, odpowiedni gen docelowy jest dodatni;jeśli wartość Ct ≥40, odpowiedni gen docelowy jest ujemny |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Odpowiedni gen docelowy jest ujemny |
Interpretacja wyników dla 2019-nCoV:
Zgodnie z wynikami ORF1ab, genu N i genu E interpretacja jest następująca:
1) Jeśli DWA lub TRZY geny wykrytych genów są pozytywne, 2019-nCoV jest pozytywne;
2) Jeśli TYLKO JEDEN lub ŻADEN z wykrytych genów jest dodatni, oznacza to, że 2019-nCoV jest ujemny.
Uwaga: Krzywa amplifikacji próbki dodatniej powinna mieć typową krzywą S.Jeśli jednak docelowe stężenie jest zbyt wysokie, wewnętrzna kontrola standardowa może nie zostać zamplifikowana, a próbka może zostać bezpośrednio oceniona jako dodatnia.Jeśli dowolne dwa geny docelowe uzyskają Ct≤38, 2019-nCoV jest dodatni.Jeśli dowolne dwa z docelowych genów uzyskają Ct≥40, 2019-nCoV jest ujemny.Jeśli Ct≥40 lub nie wykazuje wartości, interpretacja wyników genu docelowego jest negatywna.
3. Jeśli wszystkie wartości Ct kanałów FAM, VIC, ROX i Cy5 są większe niż 38 lub nie ma oczywistej typowej krzywej amplifikacji S:
1) W próbce znajduje się substancja hamująca reakcję PCR.Zaleca się rozcieńczenie próbki do ponownego badania.
2) Proces ekstrakcji kwasu nukleinowego jest nieprawidłowy, dlatego sugeruje się ponowną ekstrakcję
kwas nukleinowy do ponownego badania.
3) Ta próbka NIE była kwalifikowaną próbką w momencie pobierania lub była zdegradowana
podczas transportu i przechowywania.
Istnieją 2 sposoby na wykrycie tej sytuacji: NAAT i antygen.
(Pochodzi z CDC w Los Angeles)
