Detalhes do produto
A Organização Mundial da Saúde (OMS) orienta que os testes de diagnóstico rápido de detecção de antígenos (Ag-RDRs) podem oferecer uma maneira mais rápida e menos dispendiosa de diagnosticar a infecção ativa por SARS-CoV-2 do que os testes de amplificação de ácido nucleico (NAATs), e a OMS também recomenda que Ag-RDTs que atendem aos requisitos mínimos de desempenho podem ser usados para detecção de casos primários, rastreamento de contatos, durante investigações de surtos e para monitorar tendências de incidência de doenças nas comunidades.
Características
● Abrangente:Três genes-alvo são detectados em um teste
● compatível:Adaptável a equipamentos comuns com canais CY5, FAM, VIC/HEX.
● Excelente desempenho:Alta sensibilidade e especificidade, LOD = 200 cópias/ml.
Parâmetro técnico
| Especificação de embalagem | 50 testes/kit, 100 testes/kit |
| Região de destino | ORF1ab, N, E |
| Amostra Aplicável | Escarro, swab orofaríngeo |
| Limite de detecção | 200 cópias/ml |
| Taxa Total de Coincidência | 99,55% |
| Valor Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Taxa de Coincidência Positiva | 99,12% |
| Taxa de coincidência negativa | 100% |
| Condições de armazenamento e data de validade | Armazenado a -20±5℃ e é válido provisoriamente por 12 meses. |
| Controle interno | Sim |
| Catálogo de número | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificação | CE |
| espécimes | Swab nasofaríngeo, swab orofaríngeo, fluido de lavagem alveolar, saliva e escarro |
| Instrumento Aplicável | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Sistema de PCR em tempo real |
Procedimento de teste
1. Extração de Ácido Nucleico
A operação deve ser realizada de acordo com o manual do kit de extração.
2. Preparação do sistema:
1) Retire o reagente e descongele-o completamente.Inverta a mistura e centrifugue imediatamente.N reações de teste (N = número de amostras a serem testadas + controle positivo + controle negativo + 1) são preparadas para sistemas de reação, respectivamente, como segue.
| Vomponents | Volume para 1 sistema de reação | Volume para sistema de reação N |
| Solução de reação de amplificação de ácido nucleico Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| mistura de enzimas | 2 µL | 2 µL * N |
| Volume total | 20 µL | 20 µL * N |
2) Distribuição da reação: A solução de reação foi misturada e centrifugada, e cada tubo foi dispensado em uma quantidade de 20μL em um tubo de PCR adequado para um aparelho de PCR de fluorescência.
3. Carregando
5μL da amostra extraída de ácido nucleico, ácido nucleico de controle positivo e ácido nucleico de controle negativo são adicionados aos sistemas de reação, e o volume total da reação é de 25μL.Aperte a tampa do tubo e mova-o para a área de teste de amplificação após alguns segundos de centrifugação.
4. Ensaio de amplificação por PCR
1) Coloque o tubo de reação de PCR no instrumento de amplificação de PCR fluorescente para detecção de amplificação.
2) Configuração do parâmetro do ciclo:
| Programa | Número de ciclos | Temperatura | Tempo de reação | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 minutos | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 seg | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 segundos | |
| 60℃ | 30 seg | Coleção de fluorescência | ||
3) Configurações de detecção:
Os canais de detecção são definidos como FAM, VIC, ROX e CY5, correspondendo a ORF1ab, gene N e gene E, controle interno de RNase P, respectivamente."Quencher Dye" e "Passive Reference" são definidos como "None" para o instrumento ABI 7500.Defina o Controle Positivo, o Controle Negativo e a Amostra (Desconhecida) na ordem em que as amostras correspondem e defina o nome da amostra na coluna “Nome da Amostra”.
Para X-POCH16, a operação e o programa são os seguintes:
1) Após a conclusão do autoteste, abra a tampa e coloque os tubos de reação de PCR nas posições designadas no instrumento.
2) Comece selecionando o "Exper".opção.Selecione a opção "Todos" ou selecione manualmente a área de reação no lado esquerdo da tela.
3) Selecione a opção "CARREGAR";selecione o programa de teste;clique em “CONCLUÍDO” e em “EXECUTAR”.O programa leva 30min42s para ser concluído.
Os canais de detecção do programa padrão são definidos como FAM, VIC, ROX e CY5, correspondendo a ORF1ab, gene N e gene E, controle interno de RNase P, respectivamente.
Os parâmetros de ciclo do programa Padrão são os seguintes:
| Programa | Número de | Temperatura | Tempo de reação |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 minutos |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 segundos |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 segundos |
| 60℃ | 13 segundos | Fluorescência |
5. Configuração de Limite
De acordo com a imagem analisada, ajuste o valor inicial, o valor final da linha de base e o valor limite (recomenda-se que o valor inicial e o valor final sejam 3 e 15, respectivamente, e a curva de amplificação do controle negativo é ajustada para ser plana ou inferior à linha limite), clique em Análise para obter automaticamente a análise do valor de Ct da amostra.Visualize os resultados na interface Relatório.
6. Norma de Controle de Qualidade
Cada controle do kit deve atender aos seguintes requisitos com curva 'S', caso contrário, o experimento é inválido.
| Canais de detecção | Controle negativo | controle positivo |
| FAM(ORF1ab) | sem Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | sem Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | sem Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | sem Ct | Ct≤38 |
【Valor de corte】
De acordo com os resultados de 100 amostras de swab orofaríngeo e 100 amostras de escarro, e com o método da curva ROC, o valor de corte do gene OFR1ab, N genes E deste kit é Ct = 38
Perguntas frequentes
Neste kit, os primers e sondas da tecnologia de PCR fluorescente em tempo real são projetados para as regiões conservadas e específicas dos genes ORF1ab, N e E de 2019-nCoV, respectivamente.Durante a amplificação por PCR, a sonda se liga ao modelo e o grupo repórter da extremidade 5' da sonda é clivado pela enzima Taq (5' → 3' atividade da exonuclease), afastando-se do grupo de extinção para gerar um sinal fluorescente .A curva de amplificação em tempo real é plotada automaticamente com base no sinal de fluorescência detectado e o valor Ct da amostra é calculado.Os fluoróforos FAM, VIC e ROX são marcados com as sondas dos genes ORF1ab, N e E.Usando um teste, a detecção qualitativa dos três genes acima de 2019-nCoV pode ser realizada simultaneamente.
O kit é fornecido com um controle interno direcionado ao gene RNase P para monitorar a coleta, manipulação, extração e processo de RT-PCR de amostras clínicas para evitar resultados falso-negativos.O controle interno é marcado com um grupo fluorescente CY5.
1. Analise e interprete os resultados do teste quando o instrumento estiver normal e o controle positivo, o controle negativo e o resultado do teste de controle interno atenderem ao padrão de controle de qualidade.
2. A curva de amplificação do controle interno (CY5) mostra uma curva S típica e Ct ≤ 38, a interpretação dos resultados dos genes alvo está sujeita às seguintes condições.
| Canais de detecção | Interpretação dos resultados dos genes-alvo | ||
| FMA | VIC (gene N) | ROX (gene E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Com uma curva de amplificação S típica, o valor Ct é ≤38, o gene alvo correspondente é positivo. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Com uma curva de amplificação S típica, teste novamente o gene alvo correspondente da amostra. Se o valor Ct＜ 40 com uma curva de amplificação S típica, o gene alvo correspondente é positivo;se o valor Ct≥40, o gene alvo correspondente é negativo |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | O gene alvo correspondente é negativo |
Interpretação dos resultados para 2019-nCoV:
De acordo com os resultados de ORF1ab, gene N e gene E, a interpretação é a seguinte:
1) Se DOIS ou TRÊS genes dos genes detectados forem positivos, o 2019-nCoV é positivo;
2) Se APENAS UM ou NENHUM dos genes detectados for positivo, o 2019-nCoV é negativo.
Nota: A curva de amplificação da amostra positiva deve ser uma curva S típica.No entanto, se a concentração alvo for muito alta, o controle do padrão interno pode não ser amplificado e a amostra pode ser diretamente considerada positiva.Se dois dos genes-alvo obtiverem Ct≤38, o 2019-nCoV é positivo.Se quaisquer dois dos genes alvo obtiverem Ct≥40, o 2019-nCoV é negativo.Se Ct≥40, ou não mostrar nenhum valor, a interpretação dos resultados do gene alvo é negativa.
3. Se todos os valores de Ct dos canais FAM, VIC, ROX e Cy5 forem superiores a 38 ou não houver uma curva de amplificação S típica óbvia:
1) Existe(m) substância(s) na amostra que inibe a reação de PCR.Recomenda-se diluir a amostra para ser retestada.
2) O processo de extração do ácido nucleico é anormal, por isso sugere-se reextrair
ácido nucleico para novo teste.
3) Esta amostra NÃO era uma amostra qualificada no momento da amostragem, ou degradada
durante o transporte e armazenamento.
São 2 maneiras de detectarmos essas situações: NAAT e Antigen.
(Vem do CDC de Los Angeles)
