Detaliile produsului
Organizația Mondială a Sănătății (OMS) ghidează că testele de diagnosticare rapidă cu detectarea antigenului (Ag-RDR) pot oferi o modalitate mai rapidă și mai puțin costisitoare de a diagnostica infecția activă cu SARS-CoV-2 decât testele de amplificare a acidului nucleic (NAAT), iar OMS recomandă, de asemenea, că Ag-RDT-urile care îndeplinesc cerințele minime de performanță pot fi utilizate pentru detectarea primară a cazurilor, urmărirea contactelor, în timpul investigațiilor focarelor și pentru a monitoriza tendințele incidenței bolilor în comunități.
Caracteristici
● Cuprinzător:Trei gene țintă sunt detectate într-un singur test
● compatibil:Adaptabil la echipamente comune cu canale CY5, FAM, VIC/HEX.
● Performanță excelentă:Sensibilitate și specificitate ridicate, LOD = 200 copii/ml.
Parametru tehnic
| Specificații de ambalare | 50 teste/kit, 100 teste/kit |
| Regiunea țintă | ORF1ab, N, E |
| Eșantion aplicabilă | Spută, tampon orofaringian |
| Limita de detectare | 200 de exemplare/ml |
| Rata totală de coincidență | 99,55% |
| Valoarea Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Rata de coincidență pozitivă | 99,12% |
| Rata de coincidență negativă | 100% |
| Condiții de depozitare și data de expirare | Stocat la -20±5℃ și este valabil provizoriu timp de 12 luni. |
| Control intern | da |
| Număr de catalog | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificare | CE |
| Specimenele | Tampon nazofaringian, tampon orofaringian, lichid de lavaj alveolar, saliva și spută |
| Instrument aplicabil | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, Sistem PCR în timp real SLAN-96P |
Procedura de testare
1. Extracția acidului nucleic
Operarea trebuie efectuată conform manualului kit-ului de extracție.
2. Pregătirea sistemului:
1) Scoateți reactivul și dezghețați-l complet.Intoarceți amestecul și centrifugeți imediat.N reacții de testare (N = numărul de probe de testat + control pozitiv + control negativ + 1) sunt pregătite pentru sistemele de reacție, respectiv, după cum urmează.
| Vomponentss | Volumul pentru 1 sistem de reacție | Volumul pentru sistemul de reacție N |
| Soluție de reacție de amplificare a acidului nucleic Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Amestecul de enzime | 2 µL | 2 µL * N |
| Volum total | 20 µL | 20 µL * N |
2) Distribuția reacției: Soluția de reacție a fost amestecată și centrifugata și fiecare tub a fost distribuit într-o cantitate de 20μL într-un tub PCR potrivit pentru un aparat PCR cu fluorescență.
3. Încărcare
La sistemele de reacție se adaugă 5 μL din proba extrasă de acid nucleic, acid nucleic de control pozitiv și acid nucleic de control negativ, iar volumul total de reacție este de 25 μL.Fixați capacul tubului și mutați-l în zona de test de amplificare după câteva secunde de centrifugare.
4. Testul de amplificare PCR
1) Puneți tubul de reacție PCR în instrumentul de amplificare PCR fluorescent pentru detectarea amplificării.
2) Setarea parametrilor ciclului:
| Program | Numărul de cicluri | Temperatura | Timp de reactie | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 minute | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sec | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sec | |
| 60℃ | 30 sec | Colecția de fluorescență | ||
3) Setări de detectare:
Canalele de detectare sunt setate la FAM, VIC, ROX și CY5, corespunzătoare ORF1ab, genei N și, respectiv, controlului intern al genei E, RNase P.„Quencher Dye” și „Passive Reference” sunt setate la „Niciuna” pentru instrumentul ABI 7500.Setați controlul pozitiv, controlul negativ și proba (necunoscută) în ordinea în care probele corespund și setați numele eșantionului în coloana „Nume eșantion”.
Pentru X-POCH16, funcționarea și programul sunt după cum urmează:
1) După finalizarea autotestului, deschideți capacul și puneți tuburile de reacție PCR în pozițiile desemnate în instrument.
2) Începeți prin a selecta „Exper”.opțiune.Selectați opțiunea „Toate” sau selectați manual zona de reacție din partea stângă a ecranului.
3) Selectați opțiunea „ÎNCĂRCARE”;selectați programul de testare;faceți clic pe „DONE” și pe „RUN”.Programul durează 30 min42s pentru a se finaliza.
Canalele de detectare ale programului implicit sunt setate la FAM, VIC, ROX și CY5, corespunzând controlului intern ORF1ab, genei N și, respectiv, genei E, RNase P.
Parametrii de ciclu ai programului implicit sunt după cum urmează:
| Program | Un numar de | Temperatura | Timp de reactie |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sec |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 sec |
| 60℃ | 13 sec | Fluorescenţă |
5. Setarea pragului
Conform imaginii analizate, ajustați valoarea de pornire, valoarea finală a liniei de bază și valoarea pragului (se recomandă ca valoarea de pornire și valoarea finală să fie setate la 3 și, respectiv, 15, iar curba de amplificare a controlului negativ este ajustată pentru a fi plată sau mai mic decât linia de prag), faceți clic pe Analiză pentru a obține automat valoarea Ct a eșantionului.Vizualizați rezultatele în interfața Raport.
6. Standard de control al calității
Fiecare control al kit-ului trebuie să îndeplinească următoarele cerințe cu curba „S”, în caz contrar, experimentul este invalid.
| Canale de detectare | Control negativ | Control pozitiv |
| FAM(ORF1ab) | Nu Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Nu Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Nu Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Nu Ct | Ct≤38 |
【Limită de tăiere】
Conform rezultatelor a 100 de probe de tampon orofaringian și a 100 de probe de spută, și cu metoda curbei ROC, valoarea cut-off a OFR1ab, N gene E a acestui kit este Ct = 38
FAQ
În acest kit, primerii și sondele tehnologiei PCR fluorescente în timp real sunt proiectate pentru regiunile conservate și specifice ale genei ORF1ab, N și E a 2019-nCoV.În timpul amplificării prin PCR, sonda se leagă de șablon, iar grupul raportor de la capătul 5’ al sondei este scindat de enzima Taq (activitate exonuclează 5’→3’), îndepărtându-se astfel de grupul de stingere pentru a genera un semnal fluorescent. .Curba de amplificare în timp real este trasată automat pe baza semnalului de fluorescență detectat și se calculează valoarea Ct a probei.Fluoroforii FAM, VIC și ROX sunt marcați cu sonde ale genei ORF1ab, genei N și genei E.Prin utilizarea unui singur test, detectarea calitativă a celor trei gene de mai sus ale 2019-nCoV poate fi efectuată simultan.
Trusa este prevăzută cu un control intern care vizează gena RNase P pentru a monitoriza colectarea, manipularea, extracția și procesul de RT-PCR a probelor clinice pentru a evita rezultatele fals-negative.Controlul intern este marcat cu un grup fluorescent CY5.
1. Analizați și interpretați rezultatele testelor atunci când instrumentul este normal, iar controlul pozitiv, controlul negativ și rezultatul testului de control intern îndeplinesc standardul de control al calității.
2. Curba de amplificare a controlului intern (CY5) arată o curbă tipică S și Ct ≤ 38, interpretarea rezultatelor genelor țintă este supusă următoarelor condiții.
| Canale de detectare | Interpretarea rezultatelor genelor țintă | ||
| FMA | VIC (gena N) | ROX (gena E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Cu o curbă tipică de amplificare S, valoarea Ct este ≤38, gena țintă corespunzătoare este pozitivă. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Cu o curbă tipică de amplificare S, retestați din nou gena țintă corespunzătoare a probei. Dacă valoarea Ct ＜ 40 cu o curbă tipică de amplificare S, gena țintă corespunzătoare este pozitivă;dacă valoarea Ct ≥40, gena țintă corespunzătoare este negativă |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Gena țintă corespunzătoare este negativă |
Interpretarea rezultatelor pentru 2019-nCoV:
Conform rezultatelor ORF1ab, genei N și genei E, interpretarea după cum urmează:
1) Dacă DOUA sau TREI gene ale genelor detectate sunt pozitive, 2019-nCoV este pozitiv;
2) Dacă NUMAI UNA sau NICIUNA dintre genele detectate nu este pozitivă, 2019-nCoV este negativ.
Notă: Curba de amplificare a probei pozitive ar trebui să fie cu o curbă S tipică.Cu toate acestea, dacă concentrația țintă este prea mare, este posibil ca controlul standard intern să nu fie amplificat și proba poate fi considerată direct pozitivă.Dacă oricare două dintre genele țintă obțin Ct≤38, 2019-nCoV este pozitiv.Dacă oricare două dintre genele țintă obțin Ct≥40, 2019-nCoV este negativ.Dacă Ct≥40 sau nu prezintă nicio valoare, interpretarea rezultatelor genei țintă este negativă.
3. Dacă toate valorile Ct ale canalelor FAM, VIC, ROX și Cy5 sunt mai mari de 38 sau nu există o curbă de amplificare S tipică evidentă:
1) Există/sunt substanțe în probă care inhibă reacția PCR.Se recomandă diluarea probei pentru a fi retestată.
2) Procesul de extracție a acidului nucleic este anormal, așa că se sugerează re-extracția
acid nucleic pentru re-test.
3) Această probă NU era o probă calificată la momentul prelevării sau degradată
în timpul transportului și depozitării.
Sunt 2 moduri prin care putem detecta aceste situatii: NAAT si Antigen.
(Vine de la CDC din Los Angeles)
