Информация о продукте
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) утверждает, что экспресс-тесты для обнаружения антигена (Ag-RDR) могут предложить более быстрый и менее дорогой способ диагностики активной инфекции SARS-CoV-2, чем тесты на амплификацию нуклеиновых кислот (МАНК), и ВОЗ также рекомендует что АГ-ДЭТ, отвечающие минимальным требованиям к эффективности, можно использовать для первичного выявления случаев, отслеживания контактов, во время расследований вспышек и для мониторинга тенденций заболеваемости в сообществах.
Функции
● Комплексный:Три целевых гена обнаруживаются в одном тесте
● совместимы:Адаптирован к обычному оборудованию с каналами CY5, FAM, VIC/HEX.
● Отличная производительность:Высокая чувствительность и специфичность, LOD = 200 копий/мл.
Технический параметр
| Спецификация упаковки | 50 тестов/набор, 100 тестов/набор |
| Целевой регион | ORF1ab, Н, Е |
| Применимый образец | Мокрота, ротоглоточный мазок |
| Предел обнаружения | 200 копий/мл |
| Общая частота совпадений | 99,55% |
| Значение Ct (CV,%) | ≤5,0% |
| Коэффициент положительного совпадения | 99,12% |
| Коэффициент отрицательного совпадения | 100% |
| Условия хранения и срок годности | Хранится при температуре -20 ± 5 ℃ и временно действует в течение 12 месяцев. |
| Внутренний контроль | Да |
| Каталожный номер | А7793ИФ-50Т, А7793ИФ-100Т |
| Сертификация | CE |
| Образцы | Мазок из носоглотки, мазок из ротоглотки, жидкость альвеолярного лаважа, слюна и мокрота |
| Применимый инструмент | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, система ПЦР в реальном времени SLAN-96P |
Тестовая процедура
1. Экстракция нуклеиновой кислоты
Операция должна выполняться в соответствии с инструкцией комплекта для извлечения.
2. Подготовка системы:
1) Выньте реагент и полностью разморозьте его.Переверните смесь и немедленно отцентрифугируйте.N тестовых реакций (N = количество тестируемых образцов + положительный контроль + отрицательный контроль + 1) готовят для реакционных систем соответственно следующим образом.
| Волонтеры | Объем на 1 реакционную систему | Объем для реакционной системы N |
| Смесь реакционного раствора для амплификации нуклеиновой кислоты (A7793YF) | 18 мкл | 18 мкл * Н |
| Ферментная смесь | 2 мкл | 2 мкл * Н |
| Общий объем | 20 мкл | 20 мкл * Н |
2) Реакционное распределение: Реакционный раствор перемешивали и центрифугировали, и каждую пробирку распределяли в количестве 20 мкл в пробирку для ПЦР, подходящую для флуоресцентного ПЦР-аппарата.
3. Загрузка
5 мкл нуклеиновой кислоты извлеченного образца, нуклеиновой кислоты положительного контроля и нуклеиновой кислоты отрицательного контроля добавляют в реакционные системы, и общий реакционный объем составляет 25 мкл.Закрепите крышку пробирки и переместите ее в зону амплификации после центрифугирования в течение нескольких секунд.
4. Анализ амплификации ПЦР
1) Поместите реакционную пробирку ПЦР в флуоресцентный прибор для амплификации ПЦР для обнаружения амплификации.
2) Настройка параметров цикла:
| Программа | Количество циклов | Температура | Время реакции | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 минут | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 сек | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 сек | |
| 60 ℃ | 30 сек | Коллекция флуоресценции | ||
3) Настройки обнаружения:
Каналы обнаружения установлены на FAM, VIC, ROX и CY5, соответствующие ORF1ab, гену N и гену E, внутреннему контролю РНКазы P, соответственно.Для параметров «гаситель красителя» и «пассивного эталона» для прибора ABI 7500 установлено значение «нет».Установите положительный контроль, отрицательный контроль и образец (неизвестный) в том порядке, в котором образцы соответствуют друг другу, и установите имя образца в столбце «Имя образца».
Для X-POCH16 работа и программа следующие:
1) После завершения самотестирования откройте крышку и поместите пробирки для ПЦР в предусмотренные для этого положения в приборе.
2) Начните с выбора «Эксперт».вариант.Выберите опцию «Все» или вручную выберите область реакции в левой части экрана.
3) Выберите опцию «ЗАГРУЗИТЬ»;выберите тестовую программу;нажмите «ГОТОВО» и «ЗАПУСТИТЬ».Программа занимает 30 минут 42 секунды.
Каналы обнаружения программы по умолчанию установлены на FAM, VIC, ROX и CY5, что соответствует ORF1ab, гену N и гену E, внутреннему контролю РНКазы P, соответственно.
Параметры цикла программы по умолчанию следующие:
| Программа | Количество | Температура | Время реакции |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 мин |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 сек. |
| 3 | 41 | 95℃ | 2сек |
| 60 ℃ | 13сек | флуоресценция |
5. Настройка порога
В соответствии с проанализированным изображением отрегулируйте начальное значение, конечное значение базовой линии и пороговое значение (начальное значение и конечное значение рекомендуется установить равными 3 и 15 соответственно, а кривую усиления отрицательного контроля отрегулировать так, чтобы она была плоской или ниже пороговой линии), нажмите «Анализ», чтобы автоматически получить для анализа значение Ct образца.Просмотрите результаты в интерфейсе отчета.
6. Стандарт контроля качества
Каждый контроль набора должен соответствовать следующим требованиям с кривой «S», в противном случае эксперимент недействителен.
| Каналы обнаружения | Отрицательный контроль | Положительный контроль |
| FAM(ORF1ab) | Нет КТ | Кт≤38 |
| ВИК(Н) | Нет КТ | Кт≤38 |
| РОКС(Е) | Нет КТ | Кт≤38 |
| CY5(РП) | Нет КТ | Кт≤38 |
【Значение отсечки】
По результатам 100 образцов мазков из ротоглотки и 100 образцов мокроты, а также методом ROC-кривой пороговое значение OFR1ab, N генов E гена этого набора составляет Ct = 38
Часто задаваемые вопросы
В этом наборе праймеры и зонды технологии флуоресцентной ПЦР в реальном времени предназначены для консервативных и специфических областей ORF1ab, гена N и E 2019-nCoV соответственно.Во время ПЦР-амплификации зонд связывается с матрицей, а 5'-концевая репортерная группа зонда расщепляется ферментом Taq (5'→3'-экзонуклеазная активность), тем самым удаляясь от гасящей группы и генерируя флуоресцентный сигнал .Кривая усиления в реальном времени автоматически строится на основе обнаруженного сигнала флуоресценции, и рассчитывается значение Ct образца.Флуорофоры FAM, VIC и ROX помечены зондами гена ORF1ab, гена N и гена E.С помощью одного теста можно одновременно провести качественное определение трех вышеуказанных генов 2019-nCoV.
Набор поставляется с внутренним контролем, нацеленным на ген РНКазы P, для наблюдения за сбором клинических образцов, обращением с ними, экстракцией и процессом ОТ-ПЦР, чтобы избежать ложноотрицательных результатов.Внутренний контроль помечен флуоресцентной группой CY5.
1. Анализировать и интерпретировать результаты теста, когда инструмент в норме, а положительный контроль, отрицательный контроль и результат теста внутреннего контроля соответствуют стандарту контроля качества.
2. Кривая амплификации внутреннего контроля (CY5) показывает типичную кривую S и Ct ≤ 38, интерпретация результатов генов-мишеней подвергается следующим условиям.
| Каналы обнаружения | Интерпретация результатов целевых генов | ||
| ФМА | ВИК (ген N) | РОКС (ген Е) | |
| Кт≤38 | Кт≤38 | Кт≤38 | При типичной кривой амплификации S значение Ct ≤38, соответствующий целевой ген является положительным. |
| 38 < Ст < 40 | 38 < Ст < 40 | 38 < Ст < 40 | С типичной кривой амплификации S， повторно протестируйте соответствующий целевой ген образца еще раз. Если значение Ct < 40 с типичной кривой амплификации S, соответствующий ген-мишень является положительным;если значение Ct≥40, соответствующий целевой ген отрицательный |
| Кт≥40 | Кт≥40 | Кт≥40 | Соответствующий целевой ген отрицателен |
Интерпретация результатов для 2019-nCoV:
По результатам ORF1ab, гена N и гена E интерпретация следующая:
1) Если ДВА или ТРИ гена из выявленных генов положительны, 2019-nCoV положительный;
2) Если ТОЛЬКО ОДИН или НИ ОДИН из обнаруженных генов положительный, 2019-nCoV отрицательный.
Примечание. Кривая амплификации положительного образца должна иметь типичную S-кривую.Однако, если целевая концентрация слишком высока, контроль внутреннего стандарта может не амплифицироваться, и образец может быть непосредственно оценен как положительный.Если любые два гена-мишени получают Ct≤38, 2019-nCoV является положительным.Если любые два гена-мишени получают Ct≥40, 2019-nCoV является отрицательным.Если Ct ≥ 40 или не показывает никакого значения, интерпретация результатов целевого гена является отрицательной.
3. Если все значения Ct каналов FAM, VIC, ROX и Cy5 больше 38 или отсутствует очевидная типичная кривая усиления S:
1) В образце есть вещества, которые ингибируют реакцию ПЦР.Рекомендуется разбавить образец для повторного анализа.
2) Процесс выделения нуклеиновых кислот ненормальный, поэтому предлагается провести повторную экстракцию
нуклеиновая кислота для повторного тестирования.
3) Этот образец НЕ был квалифицированным образцом на момент отбора или деградировал.
при транспортировке и хранении.
Мы можем обнаружить эти ситуации двумя способами: NAAT и Antigen.
(По материалам CDC Лос-Анджелеса)
