پيداوار جي تفصيل
ورلڊ هيلٿ آرگنائيزيشن (ڊبليو ايڇ او) هدايت ڪري ٿو ته اينٽيجن-ڊٽيڪٽنگ ريپڊ ڊيگنوسٽڪ ٽيسٽ (Ag-RDRs) نيوڪليڪ ايسڊ ايمپليفڪيشن ٽيسٽ (NAATs) جي ڀيٽ ۾ فعال SARS-CoV-2 انفيڪشن جي تشخيص لاءِ تيز ۽ گهٽ مهانگو طريقو پيش ڪري سگھن ٿا، ۽ WHO پڻ سفارش ڪري ٿو. ته Ag-RDTs گھٽ ۾ گھٽ ڪارڪردگي جي ضرورتن کي پورو ڪرڻ لاء استعمال ڪري سگھجن ٿيون ابتدائي ڪيس جي سڃاڻپ، رابطي جي نشاندهي ڪرڻ، وبائي تحقيق دوران ۽ برادرين ۾ بيمارين جي واقعن جي رجحان جي نگراني ڪرڻ لاء.
خاصيتون
● جامع:هڪ ٽيسٽ ۾ ٽي ٽارگيٽ جين ڳولي ٿو
● مطابقت:CY5، FAM، VIC/HEX چينلز سان گڏ عام سامان سان مطابقت.
● بهترين ڪارڪردگي:اعلي حساسيت ۽ خاصيت، LOD = 200 ڪاپيون / ايم ايل.
ٽيڪنيڪل پيٽرولر
| پيڪنگ جي تفصيل | 50 ٽيسٽ/ڪٽ، 100 ٽيسٽ/ڪٽ |
| ھدف وارو علائقو | ORF1ab، N، E |
| قابل اطلاق نمونو | اسپتم، آروفرينجيل سواب |
| معلوم ڪرڻ جي حد | 200 ڪاپيون / ايم ايل |
| مجموعي اتفاق جي شرح | 99.55% |
| سي ٽي ويليو (سي وي،٪) | ≤5.0% |
| مثبت اتفاق جي شرح | 99.12% |
| ناڪاري اتفاق جي شرح | 100% |
| اسٽوريج حالتون ۽ ختم ٿيڻ جي تاريخ | ذخيرو ٿيل -20 ± 5 ℃، ۽ 12 مهينن لاء عارضي طور تي صحيح آهي. |
| اندروني ضابطو | ها |
| فهرست نمبر | A7793YF-50T، A7793YF-100T |
| سرٽيفڪيشن | CE |
| نمونو | Nasopharyngeal swab, Oropharyngeal swab, Alveolar lavage fluid, Saliva and sputum |
| قابل اطلاق اوزار | ABI 7500، Roche Light Cycler 480Ⅱ، Roche Cobas Z 480، SLAN-96P ريئل ٽائيم پي سي آر سسٽم |
ٽيسٽ جو طريقو
1. نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ
آپريشن کٽ جي دستيابي مطابق ڪيو وڃي.
2. سسٽم جي تياري:
1) ريگينٽ کي ڪڍيو ۽ ريجينٽ کي مڪمل طور تي ٿڪايو.مرکب کي ڦيرايو ۽ فوري طور تي سينٽرفيوج.N ٽيسٽ رد عمل (N = ٽيسٽ ٿيڻ لاءِ نمونن جو تعداد + مثبت ڪنٽرول + منفي ڪنٽرول + 1) رد عمل سسٽم لاءِ تيار ڪيا ويا آهن، ترتيب سان، هيٺ ڏنل.
| وومپونٽس | 1 ردعمل سسٽم لاء حجم | N ردعمل سسٽم لاء حجم |
| نيوڪليڪ ايسڊ امپليفڪيشن ردعمل حل ميڪس (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| انزائم جو مرکب | 2 µL | 2 µL * N |
| ڪل مقدار | 20 µL | 20 µL * N |
2) رد عمل جي ورڇ: رد عمل جو حل ملايو ويو ۽ سينٽرفيوز ڪيو ويو، ۽ هر ٽيوب کي 20μL جي مقدار ۾ پي سي آر ٽيوب ۾ ورهايو ويو جيڪو فلورسنس پي سي آر اپريٽس لاءِ مناسب آهي.
3. لوڊ ڪندي
5μL ڪڍيل نموني نيوڪليڪ ايسڊ، مثبت ڪنٽرول نيوڪلڪ ايسڊ ۽ منفي ڪنٽرول نيوڪلڪ ايسڊ رد عمل سسٽم ۾ شامل ڪيا ويا آهن، ۽ مجموعي رد عمل جو مقدار 25μL آهي.ٽيوب جي ڍڪ کي مضبوط ڪريو ۽ سينٽرفيوگريشن جي چند سيڪنڊن کان پوء ان کي ايمپليفڪيشن ٽيسٽ واري علائقي ڏانهن منتقل ڪريو.
4. PCR Amplification Assay
1) پي سي آر جي رد عمل واري ٽيوب کي فلورسنٽ پي سي آر ايمپليفڪيشن اوزار ۾ وڌو.
2) سائيڪل پيٽرولر سيٽنگ:
| پروگرام | چڪر جو تعداد | گرمي پد | رد عمل جو وقت | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 منٽ | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 سيڪنڊ | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 سيڪنڊ | |
| 60 ℃ | 30 سيڪنڊ | فلورسنس جمع | ||
3) ڳولها سيٽنگون:
ڳولڻ وارا چينل FAM، VIC، ROX ۽ CY5 تي مقرر ڪيا ويا آهن، ترتيب ڏنل ORF1ab، N جين، ۽ E جيني، RNase P اندروني ڪنٽرول، ترتيب سان."Quencher Dye" ۽ "Passive Reference" ABI 7500 اوزار لاءِ "ڪو به نه" تي مقرر ٿيل آھن.سيٽ ڪريو مثبت ڪنٽرول، منفي ڪنٽرول، ۽ نمونو (اڻڄاتل) ترتيب ۾ جنهن نموني سان ملن ٿا، ۽ نموني جو نالو مقرر ڪريو "نمونء جو نالو" ڪالمن ۾.
X-POCH16 لاءِ، آپريشن ۽ پروگرام ھيٺ ڏنل آھن:
1) سيلف ٽيسٽ مڪمل ٿيڻ کان پوءِ، لڪ کي کوليو ۽ پي سي آر ردعمل ٽيوب کي اوزار ۾ مقرر ڪيل پوزيشن ۾ وجھو.
2) "ماهر" کي منتخب ڪندي شروع ڪريو.اختيار.منتخب ڪريو "سڀ" اختيار يا دستي طور تي ردعمل واري علائقي کي چونڊيو اسڪرين جي کاٻي پاسي.
3) چونڊيو "لوڊ" اختيار؛ٽيسٽ پروگرام چونڊيو؛"Done" ۽ "رن" تي ڪلڪ ڪريو.پروگرام مڪمل ٿيڻ ۾ 30 منٽ 42s لڳن ٿا.
ڊفالٽ پروگرام جا ڳولڻ وارا چينل FAM، VIC، ROX ۽ CY5 تي مقرر ڪيا ويا آهن، ترتيب ڏنل ORF1ab، N جين، ۽ E Gene، RNase P اندروني ڪنٽرول، ترتيب سان.
ڊفالٽ پروگرام جي چڪر پيٽرولر هيٺ ڏنل آهن:
| پروگرام | جو تعداد | گرمي پد | رد عمل جو وقت |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 منٽ |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 سيڪنڊ |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 سيڪنڊ |
| 60 ℃ | 13 سيڪنڊ | ٻرندڙ |
5. حد جي سيٽنگ
تجزيو ڪيل تصوير جي مطابق، شروعاتي قيمت، بيس لائين ۽ حد جي قيمت جي آخري قيمت (شروعاتي قيمت ۽ آخري قيمت کي ترتيب ڏيڻ جي سفارش ڪئي وئي آھي 3 ۽ 15 جي ترتيب سان، ۽ منفي ڪنٽرول جي ايمپليفڪيشن وکر کي ترتيب ڏني وئي آھي فليٽ يا حد کان گهٽ لڪير)، ڪلڪ ڪريو تجزيو خودڪار طريقي سان تجزيو حاصل ڪرڻ لاءِ Ct قدر جو نمونو.رپورٽ انٽرفيس ۾ نتيجا ڏسو.
6. معيار ڪنٽرول معيار
کٽ جي هر ڪنٽرول کي 'S' وکر سان هيٺين گهرجن کي پورو ڪرڻ گهرجي، ٻي صورت ۾ تجربو غلط آهي.
| چڪاس چينلز | ناڪاري ڪنٽرول | مثبت ڪنٽرول |
| FAM (ORF1ab) | نه Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | نه Ct | Ct≤38 |
| روڪس (اي) | نه Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | نه Ct | Ct≤38 |
【ڪٽ جي قيمت】
100 oropharyngeal swab نمونن ۽ 100 sputum جي نمونن جي نتيجن موجب، ۽ ROC وکر جي طريقي سان، OFR1ab جي ڪٽ آف ويليو، هن کٽ جي N جينز E جين Ct = 38 آهن.
FAQ
هن کٽ ۾، ريئل ٽائيم فلورسنٽ پي سي آر ٽيڪنالاجي جا پرائمر ۽ پروبس ترتيب ڏنل ORF1ab، N ۽ E جين 2019-nCoV جي محفوظ ۽ مخصوص علائقن لاءِ ترتيب ڏنل آهن.PCR ايمپليفڪيشن جي دوران، جاچ ٽيمپليٽ سان جڙيل آهي، ۽ جاچ جي 5'-آخر جي رپورٽر گروپ کي Taq اينزيم (5'→ 3' exonuclease سرگرمي) ذريعي صاف ڪيو ويندو آهي، ان ڪري هڪ فلورسنٽ سگنل پيدا ڪرڻ لاءِ quenching گروپ کان پري ٿي ويندو آهي. .حقيقي وقت جي ايمپليفڪيشن وکر خود بخود معلوم ٿيل فلورسنس سگنل جي بنياد تي پلاٽ ڪيو ويو آهي، ۽ نموني Ct قدر ڳڻيو ويندو آهي.FAM، VIC ۽ ROX fluorophores کي ORF1ab جين، N جين ۽ اي جين پروبس تي ليبل لڳايو ويو آهي.ھڪڙي ٽيسٽ کي استعمال ڪندي، 2019-nCoV جي مٿين ٽن جينن جي قابليت جي چڪاس ڪري سگھجي ٿي.
ڪٽ هڪ اندروني ڪنٽرول سان مهيا ڪئي وئي آهي RNase P جين کي نشانو بڻائيندي ڪلينڪل نموني گڏ ڪرڻ، هٿ ڪرڻ، ڪڍڻ ۽ RT-PCR عمل جي نگراني ڪرڻ لاءِ غلط-منفي نتيجن کان بچڻ لاءِ.اندروني ڪنٽرول CY5 فلورسنٽ گروپ سان ليبل ٿيل آهي.
1. امتحان جا نتيجا تجزيو ۽ تشريح ڪريو جڏهن اوزار عام آهي، ۽ مثبت ڪنٽرول، منفي ڪنٽرول ۽ اندروني ڪنٽرول ٽيسٽ جا نتيجا معيار ڪنٽرول معيار سان ملن ٿا.
2. اندروني ڪنٽرول جي ايمپليفڪيشن وکر (CY5) هڪ عام S وکر ۽ Ct ≤ 38 ڏيکاري ٿو، ٽارگيٽ جين جي نتيجن جي تشريح هيٺ ڏنل شرطن جي تابع آهي.
| چڪاس چينلز | ٽارگيٽ جين جي نتيجن جي تشريح | ||
| ايف ايم اي | VIC (ن جين) | ROX (اي جين) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | هڪ عام S amplification وکر سان، Ct قدر ≤38 آهي، لاڳاپيل ٽارگيٽ جين مثبت آهي. |
| 38 - سي ٽي - 40 | 38 - سي ٽي - 40 | 38 - سي ٽي - 40 | هڪ عام S amplification وکر سان، نموني جي لاڳاپيل ٽارگيٽ جين کي ٻيهر جانچيو. جيڪڏهن Ct قدر ~ 40 هڪ عام S amplification وکر سان، لاڳاپيل ٽارگيٽ جين مثبت آهي؛جيڪڏهن Ct قدر≥40، لاڳاپيل ٽارگيٽ جين منفي آهي |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | لاڳاپيل ھدف جين منفي آھي |
2019-nCoV لاءِ نتيجن جي تشريح:
ORF1ab، N جين ۽ اي جين جي نتيجن موجب، تفسير ھيٺ ڏنل آھي:
1) جيڪڏهن معلوم ٿيل جين مان ٻه يا ٽي جينز مثبت آهن، 2019-nCoV مثبت آهي؛
2) جيڪڏهن معلوم ٿيل جين مان صرف هڪ يا ڪو به مثبت ناهي، 2019-nCoV منفي آهي.
نوٽ: مثبت نموني جي ايمپليفڪيشن وکر هڪ عام S وکر سان هجڻ گهرجي.تنهن هوندي، جيڪڏهن حدف ڪنسنٽريشن تمام گهڻي آهي، اندروني معياري ڪنٽرول کي وڌائي نه ٿو سگهجي ۽ نموني سڌو سنئون مثبت طور تي فيصلو ڪري سگهجي ٿو.جيڪڏهن ڪنهن به ٻن ٽارگيٽ جين کي Ct≤38 ملي ٿو، 2019-nCoV مثبت آهي.جيڪڏهن ٽارگيٽ جين مان ڪي به ٻه Ct≥40 حاصل ڪن ٿا، 2019-nCoV منفي آهي.جيڪڏهن Ct≥40، يا ڪو قدر نه ڏيکاري، تعبير ٽارگيٽ جين جا نتيجا منفي آهن.
3. جيڪڏهن FAM، VIC، ROX ۽ Cy5 چينلز جا سڀئي Ct قدر 38 کان وڌيڪ آهن يا ڪو به واضح عام S amplification وکر نه آهي:
1) نموني ۾ موجود آهن/مواد آهن جيڪي PCR ردعمل کي روڪيندا آهن.اها سفارش ڪئي وئي آهي ته نموني کي ٻيهر آزمائشي ڪرڻ لاء.
2) نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جو عمل غير معمولي آهي، تنهنڪري ان کي ٻيهر ڪڍڻ جي صلاح ڏني وئي آهي.
نيوڪليڪ ايسڊ ٻيهر ٽيسٽ لاءِ.
3) هي نمونو نموني جي وقت ۾ قابليت وارو نمونو نه هو، يا خراب ڪيو ويو
ٽرانسپورٽ ۽ اسٽوريج دوران.
اهي 2 طريقا آهن جن کي اسين هن صورتحال کي ڳولي سگهون ٿا: NAAT ۽ Antigen.
(لاس اينجلس جي سي ڊي سي مان اچي ٿو)
