නිෂ්පාදන විස්තර
ලෝක සෞඛ්‍ය සංවිධානය (WHO) විසින් ප්‍රතිදේහජනක හඳුනාගැනීමේ වේගවත් රෝග විනිශ්චය පරීක්ෂණ (Ag-RDRs) මගින් න්යෂ්ටික අම්ල වර්ධක පරීක්ෂණ (NAATs) වලට වඩා සක්‍රීය SARS-CoV-2 ආසාදනය හඳුනා ගැනීමට වේගවත් හා අඩු වියදම් ක්‍රමයක් ලබා දිය හැකි බව මඟ පෙන්වන අතර WHO ද නිර්දේශ කරයි. අවම කාර්ය සාධන අවශ්‍යතා සපුරාලන Ag-RDTs ප්‍රාථමික සිද්ධි හඳුනා ගැනීම, සම්බන්ධතා සොයා ගැනීම, පැතිර යන පරීක්ෂණ අතරතුර සහ ප්‍රජාවන් තුළ රෝග ඇතිවීමේ ප්‍රවණතා නිරීක්ෂණය කිරීම සඳහා භාවිතා කළ හැකිය.
විශේෂාංග
● විස්තීර්ණ:එක් පරීක්ෂණයකදී ඉලක්කගත ජාන තුනක් හඳුනා ගනී
● අනුකූල:CY5, FAM, VIC/HEX නාලිකා සමඟ පොදු උපකරණවලට අනුවර්තනය වීම.
● විශිෂ්ට කාර්ය සාධනය:ඉහළ සංවේදීතාව සහ නිශ්චිතභාවය, LOD = 200 පිටපත් / මිලි.
තාක්ෂණික පරාමිතිය
| ඇසුරුම් පිරිවිතර | පරීක්ෂණ / කට්ටලය 50, පරීක්ෂණ 100 / කට්ටලය |
| ඉලක්ක කලාපය | ORF1ab, N, E |
| අදාළ නියැදිය | Sputum, Oropharyngeal Swab |
| හඳුනාගැනීමේ සීමාව | පිටපත් 200/මිලි |
| සම්පූර්ණ අහඹු අනුපාතය | 99.55% |
| Ct අගය (CV,%) | ≤5.0% |
| ධනාත්මක අහඹු අනුපාතය | 99.12% |
| සෘණ අහඹු අනුපාතය | 100% |
| ගබඩා කොන්දේසි සහ කල් ඉකුත්වන දිනය | -20±5℃ හි ගබඩා කර ඇති අතර, මාස 12ක් සඳහා තාවකාලිකව වලංගු වේ. |
| අභ්යන්තර පාලනය | ඔව් |
| නාමාවලි අංකය | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| සහතික කිරීම | CE |
| නිදර්ශක | නාසෝෆරින්ජියල් ස්පුබ්, ඕරොෆරින්ජියල් ස්පුබ්, ඇල්වෙයෝලර් වොජ් තරලය, කෙල සහ ස්පුටම් |
| අදාළ උපකරණය | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR පද්ධතිය |
පරීක්ෂණ ක්රියා පටිපාටිය
1. න්යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණය
නිස්සාරණ කට්ටලයේ අත්පොත අනුව මෙහෙයුම සිදු කළ යුතුය.
2. පද්ධති සකස් කිරීම:
1) ප්‍රතික්‍රියාකාරකය පිටතට ගෙන ප්‍රතික්‍රියාකාරකය සම්පූර්ණයෙන්ම දිය කරන්න.මිශ්රණය පෙරළා වහාම කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.N පරීක්ෂණ ප්රතික්රියා (N = පරීක්ෂා කළ යුතු සාම්පල ගණන + ධනාත්මක පාලනය + සෘණ පාලනය + 1) ප්රතික්රියා පද්ධති සඳහා පිළිවෙලින් පහත පරිදි සකස් කර ඇත.
| Vomponentss | 1 ප්රතික්රියා පද්ධතිය සඳහා පරිමාව | N ප්රතික්රියා පද්ධතිය සඳහා පරිමාව |
| න්යෂ්ටික අම්ල විස්තාරණ ප්රතික්රියා ද්‍රාවණ මිශ්රණය (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| එන්සයිම මිශ්රණය | 2 µL | 2 µL * N |
| මුළු පරිමාව | 20 μL | 20 µL * N |
2) ප්රතික්රියා ව්‍යාප්තිය: ප්රතික්රියා ද්‍රාවණය මිශ්‍ර කර කේන්ද්රාපසාරී කර ඇති අතර, සෑම නලයක්ම ප්රතිදීප්ත PCR උපකරණයකට සුදුසු PCR නලයක 20μL ප්‍රමාණයකින් නිකුත් කරන ලදී.
3. පැටවීම
නිස්සාරණය කරන ලද නියැදි න්යෂ්ටික අම්ලයේ 5μL, ධනාත්මක පාලන න්යෂ්ටික අම්ලය සහ සෘණ පාලන න්යෂ්ටික අම්ල ප්රතික්රියා පද්ධතිවලට එකතු කරන අතර සම්පූර්ණ ප්රතික්රියා පරිමාව 25μL වේ.ටියුබ් කවරය සවි කර තත්පර කිහිපයක කේන්ද්රාපසාරණයෙන් පසු විස්තාරණ පරීක්ෂණ ප්රදේශයට ගෙන යන්න.
4. PCR වර්ධක විශ්ලේෂණය
1) වර්ධක හඳුනාගැනීම සඳහා PCR ප්රතික්රියා නළය ප්රතිදීප්ත PCR වර්ධක උපකරණයට දමන්න.
2) චක්ර පරාමිති සැකසීම:
| වැඩසටහන | චක්ර ගණන | උෂ්ණත්වය | ප්රතික්රියා කාලය | |
| 1 | 1 | 50℃ | විනාඩි 10 | |
| 2 | 1 | 95℃ | තත්පර 30 | |
| 3 | 45 | 95℃ | තත්පර 5 | |
| 60℃ | තත්පර 30 | ප්රතිදීප්ත එකතුව | ||
3) හඳුනාගැනීමේ සැකසුම්:
හඳුනාගැනීමේ නාලිකා පිළිවෙලින් ORF1ab, N ජානය සහ E Gene, RNase P අභ්යන්තර පාලනයට අනුරූප වන FAM, VIC , ROX සහ CY5 ලෙස සකසා ඇත."Quencher Dye" සහ "Passive Reference" ABI 7500 උපකරණය සඳහා "කිසිවක් නොවේ" ලෙස සකසා ඇත.සාම්පල අනුරූප වන අනුපිළිවෙලට ධනාත්මක පාලනය, සෘණ පාලනය සහ නියැදිය (නොදන්නා) සකසන්න, සහ "නියැදි නම" තීරුවේ නියැදි නම සකසන්න.
X-POCH16 සඳහා, මෙහෙයුම සහ වැඩසටහන පහත පරිදි වේ:
1) ස්වයං පරීක්ෂණය අවසන් වූ පසු, පියන විවෘත කර PCR ප්රතික්රියා නල උපකරණයේ නියමිත ස්ථානවලට දමන්න.
2) "Exper" තේරීමෙන් ආරම්භ කරන්න.විකල්පය."සියල්ල" විකල්පය තෝරන්න හෝ තිරයේ වම් පැත්තේ ඇති ප්රතික්රියා ප්රදේශය අතින් තෝරන්න.
3) "LOAD" විකල්පය තෝරන්න;පරීක්ෂණ වැඩසටහන තෝරන්න;"DONE" සහ "RUN" ක්ලික් කරන්න.වැඩසටහන සම්පූර්ණ කිරීමට මිනිත්තු 30 ක් ගතවේ.
පෙරනිමි වැඩසටහනේ හඳුනාගැනීමේ නාලිකා පිළිවෙලින් ORF1ab, N ජානය සහ E Gene, RNase P අභ්යන්තර පාලනයට අනුරූප වන FAM, VIC, ROX සහ CY5 ලෙස සකසා ඇත.
පෙරනිමි වැඩසටහනේ චක්ර පරාමිතිය පහත පරිදි වේ:
| වැඩසටහන | සංඛ්යාව | උෂ්ණත්වය | ප්රතික්රියා කාලය |
| 1 | 1 | 50℃ | විනාඩි 2 |
| 2 | 1 | 95℃ | තත්පර 30 |
| 3 | 41 | 95℃ | තත්පර 2 |
| 60℃ | තත්පර 13 | ෆ්ෙලොරසන්ස් |
5. එළිපත්ත සැකසීම
විශ්ලේෂණය කරන ලද රූපයට අනුව, ආරම්භක අගය, මූලික අගයෙහි අවසාන අගය සහ එළිපත්ත අගය සකසන්න (ආරම්භක අගය සහ අවසාන අගය පිළිවෙලින් 3 සහ 15 ලෙස සැකසීමට නිර්දේශ කරනු ලැබේ, සහ සෘණ පාලනයේ විස්තාරණ වක්‍රය පැතලි හෝ එළිපත්ත රේඛාවට වඩා පහළින්), විශ්ලේෂණය නියැදි Ct අගය ස්වයංක්‍රීයව ලබා ගැනීමට Analysis ක්ලික් කරන්න.වාර්තා අතුරුමුහුණතෙහි ප්රතිඵල බලන්න.
6. තත්ත්ව පාලන සම්මතය
කට්ටලයේ සෑම පාලනයක්ම 'S' වක්‍රය සමඟ පහත අවශ්‍යතා සපුරාලිය යුතුය, එසේ නොමැතිනම් අත්හදා බැලීම වලංගු නොවේ.
| හඳුනාගැනීමේ නාලිකා | සෘණ පාලනය | ධනාත්මක පාලනය |
| FAM(ORF1ab) | Ct නැත | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ct නැත | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ct නැත | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ct නැත | Ct≤38 |
【කපන අගය】
oropharyngeal swab සාම්පල 100ක සහ sputum සාම්පල 100ක ප්රතිඵල අනුව සහ ROC curve ක්‍රමයට අනුව මෙම කට්ටලයේ OFR1ab, N ජාන E ජානයේ කැපුම් අගය Ct = 38 වේ.
නිති අසන පැණ
මෙම කට්ටලය තුළ, තත්‍ය කාලීන ප්රතිදීප්ත PCR තාක්‍ෂණයේ ප්‍රයිමර් සහ ගවේෂණ සැලසුම් කර ඇත්තේ පිළිවෙළින් 2019-nCoV හි ORF1ab, N සහ E ජානවල සංරක්‍ෂිත සහ විශේෂිත ප්‍රදේශ සඳහා ය.PCR විස්තාරණය අතරතුර, පරීක්ෂණය සැකිල්ලට බැඳී ඇති අතර, පරීක්ෂණයේ 5'-අන්ත වාර්තාකරු කණ්ඩායම Taq එන්සයිම (5'→3' exonuclease ක්‍රියාකාරකම්) මගින් කැඩී යයි, එමගින් ප්රතිදීප්ත සංඥාවක් ජනනය කිරීම සඳහා නිවාදැමීමේ කණ්ඩායමෙන් ඉවතට ගමන් කරයි. .තත්‍ය කාලීන විස්තාරණ වක්‍රය අනාවරණය කරගත් ප්රතිදීප්ත සංඥාව මත පදනම්ව ස්වයංක්‍රීයව සැලසුම් කර ඇති අතර නියැදි Ct අගය ගණනය කෙරේ.FAM, VIC සහ ROX fluorophores ORF1ab ජානය, N ජානය සහ E ජාන පරීක්ෂණ ලෙස ලේබල් කර ඇත.එක් පරීක්ෂණයක් භාවිතා කිරීමෙන්, 2019-nCoV හි ඉහත ජාන තුන ගුණාත්මකව හඳුනා ගැනීම එකවර සිදු කළ හැකිය.
සායනික සාම්පල එකතු කිරීම, හැසිරවීම, නිස්සාරණය කිරීම සහ ව්‍යාජ ඍණාත්මක ප්රතිඵල වලක්වා ගැනීම සඳහා RT-PCR ක්‍රියාවලිය නිරීක්ෂණය කිරීම සඳහා RNase P ජානය ඉලක්ක කරගත් අභ්යන්තර පාලනයක් කට්ටලයට සපයා ඇත.අභ්යන්තර පාලනය CY5 ප්රතිදීප්ත කණ්ඩායමක් සමඟ ලේබල් කර ඇත.
1. උපකරණය සාමාන්‍ය වන විට පරීක්ෂණ ප්රතිඵල විශ්ලේෂණය කර අර්ථ නිරූපණය කිරීම, ධනාත්මක පාලනය, සෘණ පාලනය සහ අභ්යන්තර පාලන පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵලය තත්ත්ව පාලන ප්‍රමිතියට අනුකූල වේ.
2. අභ්යන්තර පාලනයේ විස්තාරණ වක්‍රය (CY5) සාමාන්‍ය S වක්‍රයක් සහ Ct ≤ 38 පෙන්නුම් කරයි, ඉලක්කගත ජානවල ප්රතිඵල අර්ථ නිරූපණය පහත කොන්දේසි වලට යටත් වේ.
| හඳුනාගැනීමේ නාලිකා | ඉලක්කගත ජානවල ප්රතිඵල අර්ථ නිරූපණය කිරීම | ||
| FMA | VIC (N ජානය) | ROX (ඊ ජානය) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | සාමාන්‍ය S විස්තාරණ වක්‍රයක් සමඟ, Ct අගය ≤38 වේ, අනුරූප ඉලක්ක ජානය ධන වේ. |
| 38 x Ct x 40 | 38 x Ct x 40 | 38 x Ct x 40 | සාමාන්‍ය S වර්ධක වක්‍රයක් සමඟින්, නියැදියේ අනුරූප ඉලක්ක ජානය නැවත පරීක්ෂා කරන්න. සාමාන්‍ය S වර්ධක වක්‍රයක් සහිත Ct අගය＜ 40 නම්, අනුරූප ඉලක්ක ජානය ධන වේ;Ct අගය≥40 නම්, අනුරූප ඉලක්ක ජානය සෘණ වේ |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | අනුරූප ඉලක්ක ජානය සෘණ වේ |
2019-nCoV සඳහා ප්රතිඵල අර්ථ නිරූපණය:
ORF1ab, N ජාන සහ E ජානවල ප්රතිඵල අනුව, පහත පරිදි අර්ථ නිරූපණය:
1) අනාවරණය කරගත් ජානවල ජාන දෙකක් හෝ තුනක් ධනාත්මක නම්, 2019-nCoV ධනාත්මක වේ;
2) අනාවරණය කරගත් ජානවලින් එකක් පමණක් හෝ කිසිවක් ධනාත්මක නම්, 2019-nCoV සෘණ වේ.
සටහන: ධනාත්මක නියැදියේ විස්තාරණ වක්‍රය සාමාන්‍ය S වක්‍රයක් සමඟ විය යුතුය.කෙසේ වෙතත්, ඉලක්ක සාන්ද්‍රණය ඉතා ඉහළ නම්, අභ්යන්තර සම්මත පාලනය විස්තාරණය නොකළ හැකි අතර නියැදිය ධනාත්මක ලෙස කෙලින්ම විනිශ්චය කළ හැකිය.ඕනෑම ඉලක්කගත ජාන දෙකක් Ct≤38 ලබා ගන්නේ නම්, 2019-nCoV ධනාත්මක වේ.ඕනෑම ඉලක්කගත ජාන දෙකක් Ct≥40 ලබා ගන්නේ නම්, 2019-nCoV සෘණ වේ.Ct≥40, හෝ අගයක් නොපෙන්වන්නේ නම්, අර්ථ නිරූපණය ඉලක්ක ජානයේ ප්රතිඵල ඍණ වේ.
3. FAM, VIC, ROX සහ Cy5 නාලිකා වල සියලුම Ct අගයන් 38 ට වඩා වැඩි නම් හෝ පැහැදිලි සාමාන්‍ය S වර්ධක වක්‍රයක් නොමැති නම්:
1) PCR ප්‍රතික්‍රියාව වළක්වන ද්‍රව්‍ය(s) සාම්පලයේ ඇත.නැවත පරීක්ෂා කිරීම සඳහා නියැදිය තනුක කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.
2) නියුක්ලෙයික් අම්ලය නිස්සාරණය කිරීමේ ක්‍රියාවලිය අසාමාන්‍ය බැවින් නැවත නිස්සාරණය කිරීමට යෝජනා කෙරේ.
නැවත පරීක්ෂා කිරීම සඳහා න්යෂ්ටික අම්ලය.
3) මෙම නියැදිය නියැදීමේදී සුදුසුකම් ලත් නියැදියක් නොවීය, හෝ පිරිහීමට ලක් විය
ප්රවාහනය සහ ගබඩා කිරීමේදී.
ඒවා අපට මෙම තත්වයන් හඳුනාගත හැකි ක්‍රම 2කි: NAAT සහ Antigen.
(Los Angeles හි CDC වෙතින් පැමිණේ)
