Detail produktu
Svetová zdravotnícka organizácia (WHO) usmerňuje, že rýchle diagnostické testy na detekciu antigénu (Ag-RDR) môžu ponúknuť rýchlejší a lacnejší spôsob diagnostiky aktívnej infekcie SARS-CoV-2 ako testy amplifikácie nukleových kyselín (NAATs), a WHO tiež odporúča že Ag-RDT spĺňajúce minimálne požiadavky na výkon možno použiť na primárnu detekciu prípadov, sledovanie kontaktov, počas vyšetrovania prepuknutia choroby a na monitorovanie trendov výskytu chorôb v komunitách.
Vlastnosti
● Komplexné:V jednom teste sa detegujú tri cieľové gény
● kompatibilné:Prispôsobiteľné bežnému zariadeniu s kanálmi CY5, FAM, VIC/HEX.
● Vynikajúci výkon:Vysoká citlivosť a špecifickosť, LOD = 200 kópií/ml.
Technický parameter
| Špecifikácia balenia | 50 testov/súprava, 100 testov/súprava |
| Cieľový región | ORF1ab, N, E |
| Použiteľná vzorka | Spútum, orofaryngeálny výter |
| Limit detekcie | 200 kópií/ml |
| Celková miera náhodnosti | 99,55 % |
| Hodnota Ct (CV, %) | ≤ 5,0 % |
| Pozitívna miera zhody | 99,12 % |
| Miera negatívnej zhody | 100% |
| Podmienky skladovania a dátum exspirácie | Skladované pri teplote -20 ± 5 °C a predbežne platné 12 mesiacov. |
| Vnútorná kontrola | Áno |
| Katalógové číslo | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certifikácia | CE |
| Vzorky | Výter z nosohltanu, orofaryngeálny výter, tekutina z alveolárneho výplachu, sliny a spútum |
| Použiteľný nástroj | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR System |
Skúšobný postup
1. Extrakcia nukleových kyselín
Obsluha by sa mala vykonávať podľa návodu k extrakčnej súprave.
2. Príprava systému:
1) Vyberte činidlo a úplne ho rozmrazte.Prevráťte zmes a ihneď odstreďte.N testovacích reakcií (N = počet vzoriek na testovanie + pozitívna kontrola + negatívna kontrola + 1) sa pripraví pre reakčné systémy nasledovne.
| Vomponentss | Objem pre 1 reakčný systém | Objem pre N reakčný systém |
| Zmes reakčného roztoku na amplifikáciu nukleových kyselín (A7793YF) | 18 ul | 18 ul * N |
| Enzýmová zmes | 2 ul | 2 ul * N |
| Celkový objem | 20 ul | 20 ul * N |
2) Distribúcia reakcie: Reakčný roztok sa premiešal a odstredil a každá skúmavka sa rozdelila v množstve 20 ul do skúmavky PCR vhodnej pre fluorescenčný PCR prístroj.
3. Načítavanie
Do reakčných systémov sa pridá 5 μl extrahovanej vzorky nukleovej kyseliny, pozitívnej kontrolnej nukleovej kyseliny a negatívnej kontrolnej nukleovej kyseliny a celkový reakčný objem je 25 μl.Upevnite kryt skúmavky a po niekoľkých sekundách odstreďovania ho presuňte do oblasti amplifikačného testu.
4. PCR amplifikačný test
1) Vložte skúmavku s PCR reakciou do fluorescenčného zariadenia na amplifikáciu PCR na detekciu amplifikácie.
2) Nastavenie parametrov cyklu:
| Program | Počet cyklov | Teplota | Reakčný čas | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sek | |
| 60 ℃ | 30 sek | Kolekcia fluorescencie | ||
3) Nastavenia detekcie:
Detekčné kanály sú nastavené na FAM, VIC, ROX a CY5, čo zodpovedá ORF1ab, génu N a génu E, internej kontrole RNázy P, v danom poradí."Quencher Dye" a "Passive Reference" sú pre prístroj ABI 7500 nastavené na "None".Nastavte Pozitívnu kontrolu, Negatívnu kontrolu a Vzorku (Neznáma) v poradí, v akom si vzorky zodpovedajú, a v stĺpci „Názov vzorky“ nastavte názov vzorky.
Pre X-POCH16 je prevádzka a program nasledovné:
1) Po dokončení autotestu otvorte veko a vložte skúmavky s PCR reakciou na určené miesta v prístroji.
2) Začnite výberom možnosti „Exper“.možnosť.Vyberte možnosť „Všetko“ alebo manuálne vyberte oblasť reakcie na ľavej strane obrazovky.
3) Vyberte možnosť „NAČIŤ“;vyberte testovací program;kliknite na „HOTOVO“ a na „Spustiť“.Dokončenie programu trvá 30 minút 42 s.
Detekčné kanály predvoleného programu sú nastavené na FAM, VIC, ROX a CY5, čo zodpovedá ORF1ab, génu N a génu E, prípadne vnútornej kontrole RNázy P.
Parametre cyklu predvoleného programu sú nasledovné:
| Program | Počet | Teplota | Reakčný čas |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 sek |
| 60 ℃ | 13 sek | Fluorescencia |
5. Nastavenie prahu
Podľa analyzovaného obrázku upravte počiatočnú hodnotu, koncovú hodnotu základnej línie a prahovú hodnotu (odporúča sa nastaviť počiatočnú hodnotu a koncovú hodnotu na 3 a 15 a krivka amplifikácie negatívnej kontroly sa nastaví tak, aby bola plochá alebo nižšia ako prahová čiara), kliknite na položku Analýza, aby sa z analýzy automaticky získala hodnota Ct vzorky.Pozrite si výsledky v rozhraní správy.
6. Štandard kontroly kvality
Každá kontrola súpravy musí spĺňať nasledujúce požiadavky s krivkou „S“, inak je experiment neplatný.
| Detekčné kanály | Negatívna kontrola | Pozitívna kontrola |
| FAM(ORF1ab) | Nie Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Nie Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Nie Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Nie Ct | Ct≤38 |
【Hodnota】
Podľa výsledkov 100 vzoriek orofaryngeálnych výterov a 100 vzoriek spúta a pomocou metódy ROC krivky je hraničná hodnota génu E OFR1ab, N génu E tejto súpravy Ct = 38
FAQ
V tejto súprave sú priméry a sondy technológie fluorescenčnej PCR v reálnom čase navrhnuté pre konzervované a špecifické oblasti génu ORF1ab, N a E 2019-nCoV.Počas amplifikácie PCR sa sonda naviaže na templát a 5'-koncová reportérová skupina sondy je štiepená enzýmom Taq (5'→3' exonukleázová aktivita), čím sa vzdiali od zhášacej skupiny a vytvorí sa fluorescenčný signál .Amplifikačná krivka v reálnom čase sa automaticky vykreslí na základe detekovaného fluorescenčného signálu a vypočíta sa hodnota Ct vzorky.Fluorofóry FAM, VIC a ROX sú označené ako sondy génu ORF1ab, génu N a génu E.Použitím jedného testu možno súčasne vykonať kvalitatívnu detekciu troch vyššie uvedených génov 2019-nCoV.
Súprava je vybavená internou kontrolou zameranou na gén RNázy P na monitorovanie odberu klinických vzoriek, manipulácie, extrakcie a procesu RT-PCR, aby sa predišlo falošne negatívnym výsledkom.Vnútorná kontrola je označená fluorescenčnou skupinou CY5.
1. Analyzujte a interpretujte výsledky testov, keď je prístroj normálny a ak pozitívna kontrola, negatívna kontrola a výsledok testu vnútornej kontroly spĺňajú štandard kontroly kvality.
2. Amplifikačná krivka internej kontroly (CY5) ukazuje typickú S krivku a Ct ≤ 38, interpretácia výsledkov cieľových génov je podrobená nasledujúcim podmienkam.
| Detekčné kanály | Interpretácia výsledkov cieľových génov | ||
| FMA | VIC (N gén) | ROX (E gén) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Pri typickej S amplifikačnej krivke je hodnota Ct ≤ 38, zodpovedajúci cieľový gén je pozitívny. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | S typickou S amplifikačnou krivkou znova otestujte zodpovedajúci cieľový gén vzorky. Ak je hodnota Ct ＜ 40 s typickou krivkou amplifikácie S, zodpovedajúci cieľový gén je pozitívny;ak je hodnota Ct ≥ 40, zodpovedajúci cieľový gén je negatívny |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Zodpovedajúci cieľový gén je negatívny |
Interpretácia výsledkov za rok 2019-nCoV:
Podľa výsledkov ORF1ab, génu N a génu E je interpretácia nasledovná:
1) Ak sú DVA alebo TRI gény detegovaných génov pozitívne, 2019-nCoV je pozitívny;
2) Ak je LEN JEDEN alebo ŽIADNY zo zistených génov pozitívny, 2019-nCoV je negatívny.
Poznámka: Amplifikačná krivka pozitívnej vzorky by mala mať typickú S krivku.Ak je však cieľová koncentrácia príliš vysoká, kontrola interného štandardu nemusí byť amplifikovaná a vzorka môže byť priamo vyhodnotená ako pozitívna.Ak ktorékoľvek dva z cieľových génov dostanú Ct≤38, 2019-nCoV je pozitívny.Ak ktorékoľvek dva z cieľových génov dostanú Ct≥40, 2019-nCoV je negatívny.Ak Ct≥40 alebo nevykazujú žiadnu hodnotu, interpretácia výsledkov cieľového génu je negatívna.
3. Ak sú všetky hodnoty Ct kanálov FAM, VIC, ROX a Cy5 vyššie ako 38 alebo nie je zjavná typická krivka amplifikácie S:
1) Vo vzorke sú látky, ktoré inhibujú reakciu PCR.Na opätovné testovanie sa odporúča vzorku zriediť.
2) Proces extrakcie nukleovej kyseliny je abnormálny, preto sa odporúča opätovná extrakcia
nukleovej kyseliny na opätovné testovanie.
3) Táto vzorka NEBOLA kvalifikovanou vzorkou v čase odberu vzoriek alebo bola degradovaná
počas prepravy a skladovania.
Sú to 2 spôsoby, ako môžeme tieto situácie zistiť: NAAT a Antigén.
(Pochádza z CDC z Los Angeles)
