Podrobnosti o izdelku
Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) pravi, da lahko hitri diagnostični testi za odkrivanje antigenov (Ag-RDR) ponudijo hitrejši in cenejši način za diagnosticiranje aktivne okužbe s SARS-CoV-2 kot testi pomnoževanja nukleinske kisline (NAAT), WHO pa tudi priporoča da se lahko Ag-RDT, ki izpolnjujejo minimalne zahteve glede učinkovitosti, uporabijo za primarno odkrivanje primerov, sledenje kontaktom, med preiskavami izbruhov in za spremljanje trendov pojavnosti bolezni v skupnostih.
Lastnosti
● Celovito:V enem testu zazna tri ciljne gene
● združljivo:Prilagodljiv običajni opremi s kanali CY5, FAM, VIC/HEX.
● Odlična zmogljivost:Visoka občutljivost in specifičnost, LOD = 200 kopij/ml.
Tehnični parameter
| Specifikacija pakiranja | 50 testov/komplet, 100 testov/komplet |
| Ciljna regija | ORF1ab, N, E |
| Veljavni vzorec | Sputum, orofaringealni bris |
| Meja zaznavanja | 200 izvodov/ml |
| Skupna stopnja naključja | 99,55 % |
| Vrednost Ct (CV, %) | ≤5,0 % |
| Stopnja pozitivnega naključja | 99,12 % |
| Stopnja negativnega naključja | 100 % |
| Pogoji shranjevanja in rok uporabe | Shranjeno pri -20±5℃ in je začasno veljavno 12 mesecev. |
| Notranji nadzor | ja |
| Kataloška številka | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certificiranje | CE |
| Vzorci | Nazofaringealni bris, orofaringealni bris, alveolarna lavage tekočina, slina in sputum |
| Uporabni instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P sistem PCR v realnem času |
Testni postopek
1. Ekstrakcija nukleinske kisline
Delovanje je treba izvesti v skladu s priročnikom kompleta za ekstrakcijo.
2. Priprava sistema:
1) Vzemite ven reagent in ga popolnoma odmrznite.Mešanico obrnite in takoj centrifugirajte.N preskusnih reakcij (N = število vzorcev za testiranje + pozitivna kontrola + negativna kontrola + 1) se pripravi za reakcijske sisteme, kot sledi.
| Vomponentss | Prostornina za 1 reakcijski sistem | Prostornina za reakcijski sistem N |
| Mešanica reakcijske raztopine za pomnoževanje nukleinske kisline (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Encimska mešanica | 2 µL | 2 µL * N |
| Skupna prostornina | 20 µL | 20 µL * N |
2) Porazdelitev reakcije: Reakcijsko raztopino smo premešali in centrifugirali ter vsako epruveto razdelili v količini 20 μL v epruveto za PCR, primerno za aparat za fluorescenčno PCR.
3. Nalaganje
Reakcijskim sistemom dodamo 5 μL ekstrahirane nukleinske kisline vzorca, nukleinske kisline pozitivne kontrole in nukleinske kisline negativne kontrole, skupni reakcijski volumen pa je 25 μL.Pritrdite pokrov epruvete in ga po nekaj sekundah centrifugiranja premaknite na območje testiranja pomnoževanja.
4. Test pomnoževanja PCR
1) Reakcijsko epruveto PCR vstavite v instrument za pomnoževanje fluorescentne PCR za zaznavo pomnoževanja.
2) Nastavitev parametrov cikla:
| Program | Število ciklov | Temperatura | Reakcijski čas | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sekund | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sekund | |
| 60 ℃ | 30 sekund | Fluorescenčna zbirka | ||
3) Nastavitve zaznavanja:
Kanali zaznavanja so nastavljeni na FAM, VIC, ROX in CY5, kar ustreza ORF1ab, genu N, oziroma genu E, interni nadzor RNaze P.»Quencher Dye« in »Passive Reference« sta za instrument ABI 7500 nastavljeni na »None«.Nastavite pozitivno kontrolo, negativno kontrolo in vzorec (neznano) v vrstnem redu, v katerem se vzorci ujemajo, in nastavite ime vzorca v stolpcu »Ime vzorca«.
Za X-POCH16 sta delovanje in program naslednja:
1) Ko je samotestiranje končano, odprite pokrov in postavite reakcijske epruvete PCR na označena mesta v instrumentu.
2) Začnite z izbiro "Exper."možnost.Izberite možnost »Vse« ali ročno izberite območje reakcije na levi strani zaslona.
3) Izberite možnost "NALOŽI";izberite testni program;kliknite »KONČANO« in »ZAŽENI«.Program traja 30 min 42 s.
Kanali zaznavanja privzetega programa so nastavljeni na FAM, VIC, ROX in CY5, kar ustreza ORF1ab, genu N, oziroma genu E, notranji nadzor RNaze P.
Parametri cikla privzetega programa so naslednji:
| Program | Število | Temperatura | Reakcijski čas |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sekund |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2sek |
| 60 ℃ | 13sek | Fluorescenca |
5. Nastavitev praga
Glede na analizirano sliko prilagodite začetno vrednost, končno vrednost izhodišča in mejno vrednost (priporočljivo je, da sta začetna vrednost in končna vrednost nastavljeni na 3 oziroma 15, krivulja pomnoževanja negativne kontrole pa je nastavljena tako, da je ravna oz. nižja od mejne črte), kliknite Analiza, da samodejno dobite analizo Ct vrednosti vzorca.Oglejte si rezultate v vmesniku za poročila.
6. Standard za nadzor kakovosti
Vsaka kontrola kompleta mora izpolnjevati naslednje zahteve s krivuljo 'S', sicer je poskus neveljaven.
| Kanali zaznavanja | Negativna kontrola | Pozitivna kontrola |
| FAM(ORF1ab) | Brez Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Brez Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Brez Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Brez Ct | Ct≤38 |
【Mejna vrednost】
Glede na rezultate 100 vzorcev orofaringealnih brisov in 100 vzorcev sputuma ter z metodo krivulje ROC je mejna vrednost genov OFR1ab, N E tega kompleta Ct = 38
pogosta vprašanja
V tem kompletu so primerji in sonde tehnologije fluorescentne PCR v realnem času zasnovani za ohranjene in specifične regije gena ORF1ab, N in E 2019-nCoV.Med pomnoževanjem PCR se sonda veže na matrico in 5'-končna reporterska skupina sonde se odcepi z encimom Taq (aktivnost 5'→3' eksonukleaze), s čimer se odmakne od skupine za dušenje, da ustvari fluorescenčni signal .Krivulja ojačanja v realnem času se samodejno izriše na podlagi zaznanega fluorescenčnega signala in izračuna se vrednost Ct vzorca.Fluoroforji FAM, VIC in ROX so označeni z genskimi sondami za gen ORF1ab, gen N in E.Z uporabo enega testa je mogoče hkrati izvesti kvalitativno detekcijo zgornjih treh genov 2019-nCoV.
Komplet je opremljen z notranjim nadzorom, ki cilja na gen RNaze P za spremljanje zbiranja kliničnih vzorcev, ravnanja z njimi, ekstrakcije in procesa RT-PCR, da se izognete lažno negativnim rezultatom.Notranja kontrola je označena s fluorescenčno skupino CY5.
1. Analizirajte in interpretirajte rezultate testa, ko je instrument normalen in rezultat pozitivne kontrole, negativne kontrole in notranjega nadzora ustreza standardu nadzora kakovosti.
2. Krivulja pomnoževanja notranje kontrole (CY5) kaže tipično krivuljo S in Ct ≤ 38, interpretacija rezultatov ciljnih genov je podvržena naslednjim pogojem.
| Kanali zaznavanja | Interpretacija rezultatov ciljnih genov | ||
| FMA | VIC (gen N) | ROX (E gen) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | S tipično krivuljo pomnoževanja S，je vrednost Ct≤38, ustrezni ciljni gen je pozitiven. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | S tipično krivuljo pomnoževanja S， znova testirajte ustrezni ciljni gen vzorca. Če je vrednost Ct < 40 s tipično krivuljo pomnoževanja S, je ustrezni ciljni gen pozitiven;če je vrednost Ct≥40, je ustrezni ciljni gen negativen |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Ustrezni ciljni gen je negativen |
Interpretacija rezultatov za 2019-nCoV:
Glede na rezultate ORF1ab, gena N in gena E interpretacija, kot sledi:
1) Če sta DVA ali TRIJE geni od zaznanih genov pozitivni, je 2019-nCoV pozitiven;
2) Če je SAMO EN ali NOBEN od odkritih genov pozitiven, je 2019-nCoV negativen.
Opomba: pomnoževalna krivulja pozitivnega vzorca mora biti s tipično S krivuljo.Če pa je ciljna koncentracija previsoka, se kontrola notranjega standarda morda ne bo pomnožila in vzorec bo neposredno ocenjen kot pozitiven.Če katera koli dva ciljna gena dobita Ct≤38, je 2019-nCoV pozitiven.Če imata katera koli dva ciljna gena Ct≥40, je 2019-nCoV negativen.Če Ct≥40 ali ne pokaže nobene vrednosti, je interpretacija rezultatov ciljnega gena negativna.
3. Če so vse vrednosti Ct kanalov FAM, VIC, ROX in Cy5 večje od 38 ali ni očitne tipične S pomnoževalne krivulje:
1) V vzorcu so snovi, ki zavirajo reakcijo PCR.Priporočljivo je razredčiti vzorec za ponovno testiranje.
2) Postopek ekstrakcije nukleinske kisline je nenormalen, zato se predlaga ponovna ekstrakcija
nukleinske kisline za ponovno testiranje.
3) Ta vzorec v času vzorčenja NI bil kvalificiran vzorec ali degradiran
med prevozom in skladiščenjem.
Te situacije lahko zaznamo na dva načina: NAAT in antigen.
(Prihaja iz CDC iz Los Angelesa)
