Fa'amatalaga Oloa
O loʻo taʻitaʻia e le Faalapotopotoga o le Soifua Maloloina a le Lalolagi (WHO) e mafai e suʻega faʻavavevave e iloa ai antigen (Ag-RDRs) e mafai ona ofoina atu se auala vave ma taugofie e suʻesuʻe ai faʻamaʻi pipisi o le SARS-CoV-2 nai lo suʻega faʻamalosia o le nucleic acid (NAATs), ma e fautuaina foi e WHO. e mafai ona fa'aogaina e Ag-RDT e fa'amalieina mana'oga maualalo mo le su'esu'eina o mataupu muamua, su'esu'ega fa'afeso'ota'i, i taimi o su'esu'ega fa'ama'i ma mata'itūina faiga o fa'ama'i i totonu o nu'u.
Vaega
● Aofa'i:E tolu kene fa'atatau e iloa ile su'ega e tasi
● fetaui:Fetuuna'i i masini masani ma CY5, FAM, VIC / HEX auala.
● Fa'atinoga lelei:Maualuga maualuga ma faʻapitoa, LOD = 200 kopi / ml.
Fua Fa'atekinisi
| Fa'amatalaga fa'apipi'i | 50 suʻega / pusa, 100 suʻega / pusa |
| Itulagi Sini | ORF1ab, N, E |
| Fa'ata'ita'iga Fa'atatau | Sputum, Oropharyngeal Swab |
| Tapulaa o le Saili | 200 kopi/ml |
| Aofa'i Fa'atatau Fa'atasi | 99.55% |
| Ct tau (CV,%) | ≤5.0% |
| Fua Faatatau Fa'atasi | 99.12% |
| Fua Faatatau Leaga | 100% |
| Tulaga Teuina ma le Aso e muta ai | Teuina i le -20±5 ℃, ma e faʻagata mo le 12 masina. |
| Pulea i totonu | Ioe |
| Numera Fa'amaumauga | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Tusipasi | CE |
| Fa'ata'ita'iga | Su'e fa'asusu, su'e fa'asusu, sua fa'asusu, Fa'a ma fuā. |
| Meafaigaluega Faatatau | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR System |
Faiga o Su'ega
1. Su'ega Nucleic Acid
E tatau ona fa'atinoina le fa'agaioiga e tusa ai ma le tusi lesona o le pusa fa'aputu.
2. Sauniuniga faiga:
1) Aveese i fafo le reagent ma faʻafefe atoa le reagent.Vave vave le paluga ma centrifuge.N tali fa'ata'ita'iga (N = numera o fa'ata'ita'iga e fa'ata'ita'i + fa'atonu lelei + fa'aletonu le lelei + 1) ua saunia mo faiga fa'afoliga, e pei ona ta'ua i lalo.
| Vomponents | Volume mo le 1 faiga tali | Volume mo N faiga fa'afoliga |
| Fa'afefiloi fa'afefiloi ole fa'aola ole fa'aoso ole nucleic acid (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Fa'afefiloi enzyme | 2 µL | 2 µL * N |
| Aofa'i voluma | 20 µL | 20 µL * N |
2) Faʻasalalauga faʻasalalauga: O le tali faʻafefe na faʻafefiloi ma centrifuged, ma faʻapipiʻi paipa taʻitasi i le aofaʻi o le 20μL i totonu o le PCR tube talafeagai mo se masini PCR fluorescence.
3. utaina
5μL o le faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga nucleic acid, pulea lelei nucleic acid ma le lelei pulea nucleic acid o loʻo faʻaopoopoina i faiga tali, ma o le aofaʻi o tali e 25μL.Fa'amau le ufiufi faagaau ma fa'agaioi i le vaega o le su'ega fa'alautele pe a mae'a ni nai sekone o fa'a'au.
4. PCR Amplification Assay
1) Tuu le PCR reaction tube i totonu o le mea faigaluega faʻalauteleina PCR fluorescent mo le faʻalauteleina o suʻesuʻega.
2) Fa'asologa o le ta'amilosaga:
| Polokalama | Numera o taamilosaga | vevela | Taimi tali | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 minu | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sec | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sec | |
| 60℃ | 30 sec | Fa'aputuga Fluorescence | ||
3) Su'esu'ega tulaga:
O auala e iloa ai ua setiina ile FAM, VIC, ROX ma le CY5, e fetaui ma le ORF1ab, N gene, ma le E Gene, RNase P pulega i totonu."Quencher Dye" ma le "Passive Reference" ua seti i le "Leai" mo le meafaigaluega ABI 7500.Seti le Pulea Lelei, Pulea Leaga, ma Fa'ata'ita'iga (Le iloa) i le fa'asologa o fa'ata'ita'iga e fetaui, ma seti le igoa fa'ata'ita'i i le koluma "Igoa Fa'ata'ita'i".
Mo X-POCH16, o le faʻagaioiga ma le polokalame e faʻapea:
1) A maeʻa le suʻega a le tagata lava ia, tatala le tapuni ma tuʻu le PCR reaction tubes i totonu o tulaga filifilia i totonu o le meafaigaluega.
2) Amata i le filifilia o le "Exper."filifiliga.Filifili le "All" filifiliga pe filifili ma le lima le vaega tali i le itu tauagavale o le lau.
3) Filifili le filifiliga "LOAD";filifili le polokalame su'ega;kiliki "FAIA" ma le "RUN".E 30min42s le polokalame e fa'amae'a ai.
O auala e iloa ai le polokalame Default ua setiina ile FAM, VIC, ROX ma le CY5, e fetaui ma le ORF1ab, N gene, ma le E Gene, RNase P pulea totonu, fa'asologa.
O le ta'amilosaga ta'amilosaga o le Default program e fa'apea:
| Polokalama | Numera o | vevela | Taimi tali |
| 1 | 1 | 50℃ | 2min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30sec |
| 3 | 41 | 95℃ | 2sec |
| 60℃ | 13sec | Fluorescence |
5. Fa'atulagaina o le Avanoa
E tusa ai ma le ata suʻesuʻe, fetuutuunai le tau Amata, Faʻaiʻu tau o le Faʻavae ma le Faʻailoga (O le tau amata ma le tau faʻaiʻuga e fautuaina e seti i le 3 ma le 15 taʻitasi, ma o le faʻalauteleina o le faʻaogaina o le pule le lelei e fetuunai ina ia mafolafola pe i lalo ifo o le laina laina), kiliki le Suʻesuʻega e otometi ona maua le auiliiliga o le faʻataʻitaʻiga Ct tau.Va'ai i'uga i le fa'aoga Lipoti.
6. Tulaga Pulea Tulaga
O pulega ta'itasi o le pusa e tatau ona fa'amalieina mana'oga o lo'o i lalo ma le 'S' curve, a leai e le aoga le su'ega.
| Su'e auala | Le pulea lelei | Pulea lelei |
| FAM(ORF1ab) | Leai Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Leai Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Leai Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Leai Ct | Ct≤38 |
【Toea le tau】
E tusa ai ma faʻaiʻuga o faʻataʻitaʻiga 100 oropharyngeal swab samples ma 100 sputum samples, faʻatasi ai ma le ROC curve method, o le Cut-off value o le OFR1ab, N genes E Gene o lenei pusa o Ct = 38
FAQ
I totonu o lenei pusa, o faʻamatalaga ma suʻesuʻega o tekinolosi PCR faʻamalama i le taimi moni o loʻo mamanuina i vaega faʻasao ma faʻapitoa o le ORF1ab, N ma le E o le 2019-nCoV.I le taimi o le PCR faʻateleina, o le suʻega e fusifusia i le faʻataʻitaʻiga, ma o le 5'-end reporter group of the probe e vavaeina e le Taq enzyme (5'→3' exonuclease activity), ma o le a alu ese mai le kulupu tineia e faʻatupu ai se faʻailoga faʻafefe. .O le taimi moni fa'ateleina fa'asolo e otometi lava ona fa'atatau i luga o le fa'ailoga fluorescence ua iloa, ma le fa'ata'ita'iga Ct tau fa'atatau.FAM, VIC ma ROX fluorophores o lo'o fa'aigoaina i le ORF1ab gene, N gene ma E su'esu'ega gene.I le fa'aaogaina o se su'ega se tasi, e mafai ona fa'atino i le taimi e tasi le su'esu'ega agava'a o kenera e tolu o lo'o i luga ole 2019-nCoV.
O le pusa o loʻo tuʻuina atu i ai se faʻatonuga i totonu e faʻatatau i le RNase P gene e mataʻituina ai faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga aoina, faʻaogaina, faʻaaogaina ma le RT-PCR faiga e aloese ai mai iʻuga sese.O le fa'atonuga i totonu o lo'o fa'ailogaina i le CY5 fluorescent group.
1. Iloilo ma fa'amatala fa'ai'uga o su'ega pe a masani le mea faigaluega, ma o le fa'atonutonu lelei, le lelei ma le fa'ai'uga o su'ega fa'alotoifale e fetaui lelei ma tulaga fa'atonu.
2. O le faʻalauteleina o le faʻaogaina o le pulea i totonu (CY5) o loʻo faʻaalia ai le masani S curve ma Ct ≤ 38, faʻamatalaga o taunuuga o kenera taulaʻi e faʻatatau i tulaga nei.
| Su'e auala | Fa'amatala taunu'uga o kenera fa'atatau | ||
| FMA | VIC (N gene) | ROX (E gene) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Fa'atasi ai ma le fa'asologa masani o le S, o le tau Ct o le≤38, o le kenera fa'atatau e lelei. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Fa'atasi ai ma le fa'asologa masani o le fa'atuputeleina o le S, toe su'esu'e le kenera fa'atatau o le fa'ata'ita'iga. Afai o le Ct value＜ 40 fa'atasi ai ma le fa'aupuga fa'atele S, o le kene fa'atatau e lelei;afai o le Ct value≥40, o le kenera fa'atatau e le lelei |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | O le ga'o taula'i fetaui e leaga |
Fa'amatalaga o fa'ai'uga mo le 2019-nCoV:
E tusa ai ma taunuʻuga o le ORF1ab, N gene ma le E gene, faʻamatalaga e pei ona taua i lalo:
1) Afai e LUA pe TOLU o kenera na maua e lelei, o le 2019-nCoV e lelei;
2) Afai e NA'O LE TASI po'o le LEAI o kenera na maua e lelei, o le 2019-nCoV e leaga.
Fa'aaliga: O le fa'alautelega o le fa'ata'ita'iga lelei e tatau ona fa'atasi ma se fa'ailoga S masani.Ae peita'i, afai e maualuga tele le fa'atonuga, o le fa'atonuga fa'alotoifale e le mafai ona fa'ateleina ma e mafai ona fa'amasino sa'o le fa'ata'ita'iga e lelei.Afai e iai ni kenera e lua e maua Ct≤38, o le 2019-nCoV e lelei.Afai e iai ni kenera e lua e maua Ct≥40, o le 2019-nCoV e leaga.Afai o le Ct≥40, pe fa'aalia e leai se aoga, fa'amatalaga e le lelei le i'uga o le kenera fa'atatau.
3. Afai e sili atu i le 38 le aofa'i ole Ct ole FAM, VIC, ROX ma le Cy5 po'o le leai o se fa'ailoga masani ole fa'atuputeleina ole S:
1) O lo'o iai/e iai mea (s) i totonu o le fa'ata'ita'iga e fa'alavelaveina le tali atu o le PCR.E fautuaina e faʻafefe le faʻataʻitaʻiga mo le toe suʻeina.
2) O le faʻagasologa o le faʻaaogaina o le nucleic acid e le masani ai, o lea e fautuaina ai e toe faʻapipiʻi
nucleic acid mo le toe su'ega.
3) O lenei faʻataʻitaʻiga e leʻo se faʻataʻitaʻiga agavaa i le taimi o faʻataʻitaʻiga, pe faʻaleagaina
i le taimi o felauaiga ma teuina.
O auala ia e 2 e mafai ona tatou iloa ai nei tulaga: NAAT ma Antigen.
(Sau mai le CDC o Los Angeles)
