Faahfaahinta Alaabta
Ururka Caafimaadka Adduunka (WHO) wuxuu hagayaa in antigen-dejinta baaritaannada ogaanshaha degdegga ah (Ag-RDRs) ay ku siin karaan hab ka dhaqso badan oo ka jaban oo lagu baaro caabuqa SARS-CoV-2 ee firfircoon marka loo eego tijaabooyinka xoojinta acid nucleic (NAATs), iyo WHO waxay sidoo kale ku talinaysaa. in Ag-RDT-yada buuxiya shuruudaha waxqabadka ugu yar loo isticmaali karo ogaanshaha kiisaska aasaasiga ah, raadinta xiriirka, inta lagu jiro baaritaannada dillaaca iyo in lala socdo isbeddellada dhacdooyinka cudurrada ee bulshooyinka.
Astaamaha
● Dhammaystiran:Saddex hidde-sideed ayaa lagu ogaadaa hal baaritaan
● waafaqsan:La qabsiga qalabka caadiga ah ee leh kanaalada CY5, FAM, VIC/HEX.
● Waxqabad heer sare ah:Dareen sare iyo gaar ahaan, LOD = 200 nuqul/ml.
Qiyaasta Farsamada
| Faahfaahinta Xirmada | 50 tijaabo/xirmo, 100 tijaabo/xirmo |
| Gobolka Beegsiga | ORF1ab, N, E |
| Tusaalaha lagu dabaqi karo | xaako, Oropharyngeal Swab |
| Xadka Ogaanshaha | 200 koobi/ml |
| Wadarta Qiimaha Shilka | 99.55% |
| Qiimaha Ct (CV,%) | ≤5.0% |
| Heerka Shilka Toosan | 99.12% |
| Heerka Shilka Xun | 100% |
| Shuruudaha Kaydinta iyo Taariikhda dhicitaanka | Lagu kaydiyaa -20±5℃, oo si ku meel gaar ah ayuu u shaqaynayaa 12 bilood. |
| Xakamaynta Gudaha | Haa |
| Lambarka buugaagta | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Shahaado | CE |
| Muunada | Xuubka sanka, suufka Oropharyngeal, Dheecaan alveolar, candhuufta iyo xaakada |
| Qalabka lagu dabaqi karo | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Nidaamka PCR-waqtiga-dhabta ah |
Habka Imtixaanka
1. Soo saarista Acid Nucleic ah
Hawlgalka waa in lagu fuliyaa si waafaqsan buug-gacmeedka xirmada soo saarista.
2. Diyaarinta Nidaamka:
1) Soo saar reagents oo dhalaal gebi ahaanba.Isku darka u rogo oo centrifuge isla markiiba.Dareen-celinta tijaabada N (N = tirada shaybaarrada la tijaabinayo + xakamaynta togan + xakamaynta xun + 1) ayaa loo diyaariyey nidaamyada falcelinta, siday u kala horreeyaan, sida soo socota.
| Voponents | Mugga 1 habka falcelinta | Mugga habka falcelinta N |
| Xalka falcelinta xoojinta aashitada nukliyeerka Isku qas (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Isku darka enzyme | 2 µL | 2 µL * N |
| Tirada guud | 20 µL | 20 µL * N |
2) Qaybinta falcelinta: Xalka falcelintu waa la isku qasan yahay oo la centrifused, iyo tuubo kasta waxaa lagu qaybiyey xaddi 20μL tuubada PCR ku haboon qalabka PCR fluorescence.
3. Soo dejinta
5μL ee muunadda la soo saaray ee nucleic acid, kantaroolka togan ee nucleic acid iyo xakamaynta xun ee nucleic acid ayaa lagu daraa hababka falcelinta, iyo wadarta mugga falcelinta waa 25μL.Ku xidh daboolka tuubada oo u guuri aagga tijaabada cod-weyneynta ka dib dhawr ilbiriqsi oo ah centrifugation.
4. PCR Amplification Assay
1) Geli tuubada falcelinta PCR-ga gelinta qalabka wax-weynaynta PCR-ga si loo ogaado.
2) Dejinta halbeegga wareegga:
| Barnaamijka | Tirada wareegyada | Heerkulka | Waqtiga falcelinta | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 daqiiqo | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 ilbiriqsi | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 ilbiriqsi | |
| 60℃ | 30 ilbiriqsi | Ururinta Floorescence | ||
3) Dejinta ogaanshaha:
Kanaalada ogaanshaha waxaa loo dejiyay FAM, VIC, ROX iyo CY5, oo u dhiganta ORF1ab, hidda-wadaha N, iyo E Gene, xakamaynta gudaha RNase P, siday u kala horreeyaan."Quencher Dye" iyo "Tixraaca Passive" ayaa loo dejiyay "Ma jiro" qalabka ABI 7500.Deji Xakamaynta Wanaagsan, Xakamaynta Xun, iyo Muunad (Lama garanayo) si ay muunadyadu u dhigmaan, oo u deji magaca muunada khaanadda "Magaca Tusaalaha".
X-POCH16, hawlgalka iyo barnaamijku waa sida soo socota:
1) Kadib marka istijaabadu dhammaato, fur furka oo geli tuubooyinka falcelinta PCR meelaha loogu talagalay ee qalabka.
2) Ku bilow inaad doorato "Khubarada."doorasho.Dooro ikhtiyaarka "Dhammaan" ama gacanta ku dooro aagga falcelinta ee dhinaca bidix ee shaashadda.
3) Dooro ikhtiyaarka "LOAD";dooro barnaamijka imtixaanka;Guji "DONE" iyo "RUN".Barnaamijku wuxuu qaadanayaa 30min42s in la dhamaystiro.
Kanaalada ogaanshaha ee barnaamijka Default waxa loo dejiyay FAM, VIC, ROX iyo CY5, oo u dhiganta ORF1ab, N hidda-wadaha, iyo E Gene, xakamaynta gudaha RNase P, siday u kala horreeyaan.
Halbeegga meertada ee barnaamijka Default waa sida soo socota:
| Barnaamijka | Tirada | Heerkulka | Waqtiga falcelinta |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 daqiiqo |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 ilbiriqsi |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 ilbiriqsi |
| 60℃ | 13 ilbiriqsi | Fluorescence |
5. Dejinta bilowga
Sida ku cad sawirka la falanqeeyay, hagaaji qiimaha bilowga, Dhamaadka qiimaha saldhigga iyo qiimaha bilowga (qiimaha bilowga iyo dhammaadka waxaa lagula talinayaa in loo dejiyo inay noqdaan 3 iyo 15 siday u kala horreeyaan, iyo qalooca kontoroolka taban ayaa lagu hagaajiyaa inuu noqdo mid siman ama In ka hooseeya xariiqda marinka), dhagsii Falanqaynta si aad si toos ah u hesho falanqaynta muunadda Ct qiimaha.Ku arag natiijooyinka isku xirka Warbixinta
6. Heerka Xakamaynta Tayada
Xakameyn kasta oo qalabku waa inuu buuxiyaa shuruudaha soo socda oo leh qalooca 'S', haddii kale tijaabadu waa mid khaldan.
| Kanaalka ogaanshaha | Xakamaynta xun | Xakamaynta togan |
| FAM(ORF1ab) | Maya Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Maya Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Maya Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Maya Ct | Ct≤38 |
【Qiimaha Goynta】
Marka loo eego natiijooyinka 100 muunadaha swab oropharyngeal iyo 100 muunado xaako ah, iyo habka qalooca ROC, qiimaha Goynta OFR1ab, N hiddo-wadaha E ee xirmadan waa Ct = 38
FAQ
Xirmadan, furayaasha iyo shaybaadhayaasha tignoolajiyada PCR-da ee wakhtiga-dhabta ah waxaa loogu talagalay ilaalinta iyo gobollada gaarka ah ee ORF1ab, N iyo E hidda-wadaha 2019-nCoV siday u kala horreeyaan.Inta lagu jiro xoojinta PCR, baaritaanku wuxuu ku xiran yahay qaab-dhismeedka, kooxda 5'-dhamaadka weriyaha ee baaritaanka waxaa kala gooyay Taq enzyme (5'→3' dhaqdhaqaaqa exonuclease), taas oo ka fogaanaysa kooxda demisay si ay u dhaliso calaamad fluorescent ah. .Qalooca-weyneynta waqtiga-dhabta ah si toos ah ayaa loo sawiray iyadoo lagu salaynayo calaamada fluorescence ee la ogaaday, muunada qiimaha Ct waa la xisaabiyay.FAM, VIC iyo ROX fluorophores waxaa lagu calaamadeeyay hiddo-wadaha ORF1ab, hidda-wadaha N iyo E-baarayaasha hidda-wadaha.Isticmaalka hal tijaabo, ogaanshaha tayada ee saddexda hidde ee kor ku xusan ee 2019-nCoV ayaa la samayn karaa isku mar.
Xirmada waxaa la siiyay kontorool gudaha ah oo lagu beegsanayo hiddo-wadaha RNase P si loola socdo ururinta shaybaarada bukaan socodka, maaraynta, soo saarista iyo habka RT-PCR si looga fogaado natiijooyinka beenta ah.Kantaroolka gudaha waxaa lagu calaamadeeyay koox CY5 fluorescent ah.
1. Falanqeeyaan oo turjumaan natiijooyinka imtixaanka marka qalabku caadi yahay, iyo xakamaynta togan, kantaroolka xun iyo natiijada baaritaanka kontoroolka gudaha ayaa la kulmaya heerka xakamaynta tayada.
2. Qalooca kontoroolka gudaha (CY5) wuxuu muujinayaa qalooca S ee caadiga ah iyo Ct ≤ 38, fasiraadda natiijooyinka hiddo-wadaha bartilmaameedka ah waxaa lagu soo rogay xaaladaha soo socda.
| Kanaalka ogaanshaha | Fasiraadda natiijooyinka hiddo-wadaha bartilmaameedka ah | ||
| FMA | VIC (N hiddaha) | ROX (E hidde) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Iyada oo leh qalooca xoojinta S ee caadiga ah, qiimaha Ct waa≤38, hiddo-wadaha bartilmaameedka u dhigma waa togan. |
| 38 Ct 40 | 38 Ct 40 | 38 Ct 40 | Iyada oo leh qalooca xoojinta S ee caadiga ah, dib u tijaabi hiddasidaha bartilmaameedka u dhigma ee muunadda mar labaad. Haddii qiimaha Ct＜ 40 oo leh qalooca xoojinta S ee caadiga ah, hidde-sidaha bartilmaameedka u dhigma waa togan;haddii qiimaha Ct≥40, hiddo-wadaha bartilmaameedka u dhigma waa taban |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Hidde-sidaha bartilmaameedka u dhigma waa taban |
Fasiraadda natiijooyinka 2019-nCoV:
Marka loo eego natiijooyinka ORF1ab, hidda-wadaha N iyo hidda-wadaha E, fasiraadda sida soo socota:
1) Haddii LABA ama SADDEX hiddo-side ee hiddo-sidaha la ogaaday ay togan yihiin, 2019-nCoV waa togan;
2) Haddii HAL ama MID ka mid ah hiddo-wadaha la ogaaday uu togan yahay, 2019-nCoV waa taban.
Fiiro gaar ah: Qalooca weyneynta muunada togan waa in ay la socotaa qalooca S caadiga ah.Si kastaba ha ahaatee, haddii diirada la beegsanayo ay aad u sarreyso, xakamaynta heerka gudaha ayaa laga yaabaa in aan la kordhin waxaana muunada si toos ah loogu xukumi karaa mid togan.Haddii mid ka mid ah hiddo-sidaha bartilmaameedka ahi uu helo Ct≤38, 2019-nCoV waa togan.Haddii mid ka mid ah laba ka mid ah hiddo-sidaha bartilmaameedku helo Ct≥40, 2019-nCoV waa taban.Haddii Ct≥40, ama aysan muujin wax qiimo ah, fasiraadda natiijooyinka hidda-wadaha bartilmaameedku waa taban.
3. Haddii dhammaan qiyamka Ct ee FAM, VIC, ROX iyo kanaalka Cy5 ay ka badan yihiin 38 ama aanay jirin qalooca S- weyneynta caadiga ah:
1) Waxaa jira/ku jira walxo(no) ku jira muunada oo joojisa falcelinta PCR.Waxaa lagu talinayaa in la milo shaybaarka si dib loo tijaabiyo.
2) Habka soo saarista nucleic acid waa mid aan caadi ahayn, sidaas darteed waxaa la soo jeediyay in dib loo soo saaro.
nucleic acid dib-u-tijaabin.
3) Muunaddani ma ahayn muunad u qalma wakhtiga shaybaarka, ama la dhimay
inta lagu guda jiro gaadiidka iyo kaydinta.
Waa 2 siyaabood oo aan ku ogaan karno xaaladahan: NAAT iyo Antigen.
(Waxay ka timid CDC ee Los Angeles)
