Детаљи о производу
Светска здравствена организација (СЗО) наводи да брзи дијагностички тестови за откривање антигена (Аг-РДР) могу понудити бржи и јефтинији начин за дијагностицирање активне САРС-ЦоВ-2 инфекције од тестова за амплификацију нуклеинске киселине (НААТ), а СЗО такође препоручује да се Аг-РДТ који испуњавају минималне захтеве перформанси могу користити за примарно откривање случајева, праћење контаката, током истрага избијања и за праћење трендова инциденције болести у заједницама.
Карактеристике
● Свеобухватно:Три циљна гена се детектују у једном тесту
● компатибилан:Прилагодљив на уобичајену опрему са ЦИ5, ФАМ, ВИЦ/ХЕКС каналима.
● Одличне перформансе:Висока осетљивост и специфичност, ЛОД = 200 копија/мл.
Тецхницал Параметер
| Спецификација паковања | 50 тестова/комплет, 100 тестова/комплет |
| Циљна регија | ОРФ1аб, Н, Е |
| Применљив узорак | Спутум, орофарингеални брис |
| Лимит оф Детецтион | 200 копија/мл |
| Укупна стопа случајности | 99,55% |
| Цт вредност (ЦВ,%) | ≤5,0% |
| Стопа позитивних коинциденција | 99,12% |
| Негативна стопа случајности | 100% |
| Услови складиштења и рок трајања | Чува се на -20±5℃ и важи привремено 12 месеци. |
| Интерна контрола | да |
| Каталошки број | А7793ИФ-50Т, А7793ИФ-100Т |
| Цертифицатион | CE |
| Специменс | Брис назофаринкса, брис орофаринкса, течност алвеоларног испирања, пљувачка и спутум |
| Применљив инструмент | АБИ 7500, Роцхе Лигхт Цицлер 480Ⅱ, Роцхе Цобас з 480, СЛАН-96П ПЦР систем у реалном времену |
Тест Процедуре
1. Екстракција нуклеинске киселине
Рад треба да се изведе у складу са упутствима комплета за екстракцију.
2. Припрема система:
1) Извадите реагенс и потпуно га одмрзните.Окрените смешу и одмах центрифугирајте.Н тест реакција (Н = број узорака за тестирање + позитивна контрола + негативна контрола + 1) се припремају за реакционе системе, респективно, на следећи начин.
| Вомпонентсс | Запремина за 1 реакциони систем | Запремина за Н реакциони систем |
| Мешавина реакцијског раствора амплификације нуклеинске киселине (А7793ИФ) | 18 µЛ | 18 µЛ * Н |
| Мешавина ензима | 2 µЛ | 2 µЛ * Н |
| Укупан обим | 20 µЛ | 20 µЛ * Н |
2) Расподела реакције: Реакциони раствор је помешан и центрифугиран, а свака епрувета је стављена у количину од 20 μЛ у ПЦР епрувету погодну за флуоресцентни ПЦР апарат.
3. Лоадинг
5 μЛ екстраховане узорковане нуклеинске киселине, нуклеинске киселине позитивне контроле и нуклеинске киселине негативне контроле се додаје у реакционе системе, а укупна запремина реакције је 25 μЛ.Причврстите поклопац епрувете и померите га у простор за тестирање амплификације након неколико секунди центрифугирања.
4. ПЦР тест амплификације
1) Ставите ПЦР реакциону епрувету у флуоресцентни инструмент за ПЦР амплификацију за детекцију амплификације.
2) Подешавање параметара циклуса:
| Програм | Број циклуса | Температура | Време реакције | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 мин | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 сец | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 сец | |
| 60℃ | 30 сец | Флуоресценце Цоллецтион | ||
3) Подешавања детекције:
Канали за детекцију су подешени на ФАМ, ВИЦ ,РОКС и ЦИ5, што одговара ОРФ1аб, Н гену и Е гену, интерној контроли РНазе П, респективно."Куенцхер Дие" и "Пассиве Референце" су подешени на "Ноне" за инструмент АБИ 7500.Подесите позитивну контролу, негативну контролу и узорак (непознато) редоследом којим се узорци подударају и подесите назив узорка у колони „Назив узорка“.
За Кс-ПОЦХ16, рад и програм су следећи:
1) Након што је самотестирање завршено, отворите поклопац и ставите ПЦР реакционе епрувете на назначена места у инструменту.
2) Почните тако што ћете изабрати „Екпер“.опција.Изаберите опцију „Све“ или ручно изаберите област реакције на левој страни екрана.
3) Изаберите опцију "ЛОАД";изаберите програм за тестирање;кликните на „ДОНЕ“ и на „РУН“.Програм траје 30 минута 42 с да се заврши.
Канали за детекцију подразумеваног програма су подешени на ФАМ, ВИЦ, РОКС и ЦИ5, што одговара ОРФ1аб, Н гену и Е гену, интерној контроли РНасе П, респективно.
Параметар циклуса подразумеваног програма је следећи:
| Програм | Број | Температура | Време реакције |
| 1 | 1 | 50℃ | 2мин |
| 2 | 1 | 95℃ | 30сец |
| 3 | 41 | 95℃ | 2сец |
| 60℃ | 13сец | Флуоресценција |
5. Подешавање прага
Према анализираној слици, подесите почетну вредност, крајњу вредност основне и граничне вредности (препоручује се да се почетна и крајња вредност подесе на 3 и 15, а крива појачања негативне контроле да буде равна или ниже од граничне линије), кликните на Анализа да бисте анализи аутоматски добили вредност Цт узорка.Погледајте резултате у интерфејсу извештаја.
6. Стандард контроле квалитета
Свака контрола комплета мора да испуни следеће захтеве са 'С' кривом, иначе је експеримент неважећи.
| Канали за детекцију | Негативна контрола | Позитивна контрола |
| ФАМ(ОРФ1аб) | Но Цт | Цт≤38 |
| ВИЦ(Н) | Но Цт | Цт≤38 |
| РОКС(Е) | Но Цт | Цт≤38 |
| ЦИ5(РП) | Но Цт | Цт≤38 |
【гранична вредност】
Према резултатима 100 узорака орофарингеалног бриса и 100 узорака спутума, и методом РОЦ криве, гранична вредност гена ОФР1аб, Н гена Е овог комплета је Цт = 38
ФАК
У овом комплету, прајмери и сонде флуоресцентне ПЦР технологије у реалном времену су дизајниране за очуване и специфичне регионе ОРФ1аб, Н и Е гена 2019-нЦоВ респективно.Током ПЦР амплификације, сонда се везује за шаблон, а репортерска група на 5'-крају сонде се цепа ензимом Так (5'→3' ексонуклеазна активност), чиме се удаљава од групе за гашење и ствара флуоресцентни сигнал .Крива појачања у реалном времену се аутоматски исцртава на основу детектованог флуоресцентног сигнала и израчунава се вредност Цт узорка.ФАМ, ВИЦ и РОКС флуорофори су обележени ОРФ1аб геном, Н геном и Е генским сондама.Коришћењем једног теста, квалитативна детекција горња три гена 2019-нЦоВ може се извршити истовремено.
Комплет има интерну контролу која циља на РНасе П ген за праћење прикупљања клиничких узорака, руковања, екстракције и РТ-ПЦР процеса како би се избегли лажно негативни резултати.Унутрашња контрола је обележена флуоресцентном групом ЦИ5.
1. Анализирајте и интерпретирајте резултате теста када је инструмент нормалан, а позитивна контрола, негативна контрола и резултат теста интерне контроле испуњавају стандард контроле квалитета.
2. Крива амплификације интерне контроле (ЦИ5) показује типичну С криву и Цт ≤ 38, интерпретација резултата циљних гена је подвргнута следећим условима.
| Канали за детекцију | Интерпретација резултата циљних гена | ||
| ФМА | ВИЦ (Н ген) | РОКС (Е ген) | |
| Цт≤38 | Цт≤38 | Цт≤38 | Са типичном кривом С амплификације, вредност Цт је ≤38, одговарајући циљни ген је позитиван. |
| 38 ＜ Цт ＜ 40 | 38 ＜ Цт ＜ 40 | 38 ＜ Цт ＜ 40 | Са типичном кривом С амплификације, поново тестирајте одговарајући циљни ген узорка. Ако је вредност Цт< 40 са типичном кривом С амплификације, одговарајући циљни ген је позитиван;ако је вредност Цт≥40, одговарајући циљни ген је негативан |
| Цт≥40 | Цт≥40 | Цт≥40 | Одговарајући циљни ген је негативан |
Тумачење резултата за 2019-нЦоВ:
Према резултатима ОРФ1аб, Н гена и Е гена, интерпретација је следећа:
1) Ако су ДВА или ТРИ гена откривених гена позитивна, 2019-нЦоВ је позитиван;
2) Ако је САМО ЈЕДАН или НИЈЕДАН од откривених гена позитиван, 2019-нЦоВ је негативан.
Напомена: Крива појачања позитивног узорка треба да буде са типичном С кривом.Међутим, ако је циљна концентрација превисока, контрола интерног стандарда можда неће бити појачана и узорак се може директно оценити као позитиван.Ако било која два циљана гена добију Цт≤38, 2019-нЦоВ је позитиван.Ако било која два циљана гена добију Цт≥40, 2019-нЦоВ је негативан.Ако Цт≥40, или не показују никакву вредност, интерпретација резултата циљног гена је негативна.
3. Ако су све вредности Цт канала ФАМ, ВИЦ, РОКС и Ци5 веће од 38 или нема очигледне типичне С криве појачања:
1) У узорку постоје супстанце које инхибирају ПЦР реакцију.Препоручује се да се узорак разблажи за поновно испитивање.
2) Процес екстракције нуклеинске киселине је абнормалан, па се предлаже поновно екстраховање
нуклеинске киселине за поновно испитивање.
3) Овај узорак НИЈЕ био квалификован узорак у време узорковања или деградиран
током транспорта и складиштења.
То су 2 начина на које можемо открити ове ситуације: НААТ и Антиген.
(Долази из ЦДЦ-а из Лос Анђелеса)
