Produktdetalj
Världshälsoorganisationen (WHO) vägleder att antigenupptäckande snabba diagnostiska tester (Ag-RDR) kan erbjuda ett snabbare och billigare sätt att diagnostisera aktiv SARS-CoV-2-infektion än nukleinsyraförstärkningstest (NAAT), och WHO rekommenderar också att Ag-RDT:er som uppfyller minimikraven för prestanda kan användas för primär falldetektering, kontaktspårning, under utbrottsundersökningar och för att övervaka trender av sjukdomsförekomst i samhällen.
Funktioner
● Omfattande:Tre målgener detekteras i ett test
● kompatibel:Anpassad till vanlig utrustning med CY5, FAM, VIC/HEX kanaler.
● Utmärkt prestanda:Hög känslighet och specificitet, LOD = 200 kopior/ml.
Teknisk parameter
| Förpackningsspecifikation | 50 tester/kit, 100 tester/kit |
| Målregion | ORF1ab, N, E |
| Tillämpligt prov | Sputum, Orofaryngeal Swab |
| Detektionsgräns | 200 ex/ml |
| Total tillfällighet | 99,55 % |
| Ct-värde (CV,%) | ≤5,0 % |
| Positivt sammanträffande | 99,12 % |
| Negativ sammanfallsfrekvens | 100 % |
| Förvaringsvillkor och utgångsdatum | Förvaras vid -20±5℃ och är giltigt provisoriskt i 12 månader. |
| Intern kontroll | Ja |
| Katalognummer | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Certifiering | CE |
| Exemplar | Nasofarynxpinne, Orofaryngeal pinn, alveolär sköljvätska, saliv och sputum |
| Tillämpligt instrument | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, SLAN-96P Real-Time PCR System |
Test procedur
1. Nukleinsyraextraktion
Drift ska utföras enligt manualen för extraktionssatsen.
2. Systemförberedelser:
1) Ta ut reagenset och tina reagenset helt.Vänd på blandningen och centrifugera omedelbart.N testreaktioner (N = antal prover som ska testas + positiv kontroll + negativ kontroll + 1) förbereds för reaktionssystem enligt följande.
| Voponentss | Volym för 1 reaktionssystem | Volym för N-reaktionssystem |
| Nukleinsyraamplifieringsreaktionslösning Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Enzymblandning | 2 µL | 2 µL * N |
| Total volym | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reaktionsfördelning: Reaktionslösningen blandades och centrifugerades, och varje rör dispenserades i en mängd av 20 μL i ett PCR-rör lämpligt för en fluorescens-PCR-apparat.
3. Laddar
5μL av den extraherade provnukleinsyran, positiv kontrollnukleinsyra och negativ kontrollnukleinsyra tillsätts till reaktionssystemen och den totala reaktionsvolymen är 25μL.Fäst rörlocket och flytta det till amplifieringstestområdet efter några sekunders centrifugering.
4. PCR-amplifieringsanalys
1) Sätt PCR-reaktionsröret i det fluorescerande PCR-amplifieringsinstrumentet för amplifieringsdetektering.
2) Cykelparameterinställning:
| Program | Antal cykler | Temperatur | Reaktionstid | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 minuter | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 sek | |
| 60 ℃ | 30 sek | Fluorescenssamling | ||
3) Detekteringsinställningar:
Detektionskanalerna är inställda på FAM, VIC,ROX och CY5, motsvarande ORF1ab, N-genen respektive E-genen, RNase P intern kontroll."Quencher Dye" och "Passive Reference" är inställda på "None" för ABI 7500-instrumentet.Ställ in positiv kontroll, negativ kontroll och prov (okänd) i den ordning som proverna överensstämmer med, och ställ in provnamnet i kolumnen "Provnamn".
För X-POCH16 är operationen och programmet som följer:
1) Efter att självtestet är klart, öppna locket och placera PCR-reaktionsrören i de avsedda positionerna i instrumentet.
2) Börja med att välja "Expert."alternativ.Välj alternativet "Alla" eller välj manuellt reaktionsområdet till vänster på skärmen.
3) Välj alternativet "LOAD";välj testprogrammet;klicka på "KLAR" och "KÖR".Programmet tar 30min42s att slutföra.
Detektionskanalerna för standardprogrammet är inställda på FAM, VIC, ROX och CY5, motsvarande ORF1ab, N-genen respektive E-genen, RNase P intern kontroll.
Cykelparametern för standardprogrammet är följande:
| Program | Antal | Temperatur | Reaktionstid |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 sek |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 sek |
| 60 ℃ | 13 sek | Fluorescens |
5. Tröskelinställning
Enligt den analyserade bilden, justera startvärdet, slutvärdet för baslinjen och tröskelvärdet (startvärde och slutvärde rekommenderas att ställas in på 3 respektive 15, och förstärkningskurvan för den negativa kontrollen justeras till att vara platt eller lägre än tröskellinjen), klicka på Analys för att automatiskt få analysen till provets Ct-värde.Se resultaten i rapportgränssnittet.
6. Kvalitetskontrollstandard
Varje kontroll av kitet måste uppfylla följande krav med 'S'-kurva, annars är experimentet ogiltigt.
| Detektionskanaler | Negativ kontroll | Positiv kontroll |
| FAM(ORF1ab) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ingen Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ingen Ct | Ct≤38 |
【Gränsvärde】
Enligt resultaten av 100 orofaryngeala pinnprover och 100 sputumprover, och med ROC-kurvmetoden, är Cut-off-värdet för OFR1ab, N gener E-genen i detta kit Ct = 38
FAQ
I detta kit är primrar och prober av fluorescerande PCR-teknik i realtid utformade för de konserverade och specifika regionerna av ORF1ab-, N- och E-genen av 2019-nCoV respektive.Under PCR-amplifiering binder sonden till mallen, och 5'-ändens reportergrupp av sonden klyvs av Taq-enzymet (5'→3' exonukleasaktivitet), och förflyttas därigenom bort från den släckande gruppen för att generera en fluorescerande signal .Amplifieringskurvan i realtid plottas automatiskt baserat på den detekterade fluorescenssignalen och provets Ct-värde beräknas.FAM-, VIC- och ROX-fluoroforer är märkta till ORF1ab-gen-, N-gen- och E-gensonder.Genom att använda ett test kan kvalitativ detektion av ovanstående tre gener av 2019-nCoV utföras samtidigt.
Satsen är försedd med en intern kontroll riktad mot RNase P-genen för att övervaka klinisk provinsamling, hantering, extraktion och RT-PCR-process för att undvika falskt negativa resultat.Den interna kontrollen är märkt med en CY5-fluorescerande grupp.
1. Analysera och tolka testresultaten när instrumentet är normalt och den positiva kontrollen, den negativa kontrollen och resultatet av internkontrolltestet uppfyller kvalitetskontrollstandarden.
2. Amplifieringskurvan för intern kontroll (CY5) visar en typisk S-kurva och Ct ≤ 38, tolkning resultaten av målgener utsätts för följande villkor.
| Detektionskanaler | Tolka resultaten av målgener | ||
| FMA | VIC (N-gen) | ROX (E-gen) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Med en typisk S-amplifieringskurva är Ct-värdet ≤38, motsvarande målgen är positiv. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Med en typisk S-amplifieringskurva, testa om motsvarande målgen för provet igen. Om Ct-värdet ＜ 40 med en typisk S-amplifieringskurva är motsvarande målgen positiv;om Ct-värdet ≥40 är motsvarande målgen negativ |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Motsvarande målgen är negativ |
Tolkning av resultat för 2019-nCoV:
Enligt resultaten av ORF1ab, N-genen och E-genen, tolkning enligt följande:
1) Om TVÅ eller TRE gener av de detekterade generna är positiva är 2019-nCoV positiv;
2) Om ENDAST EN eller INGEN av de detekterade generna är positiv är 2019-nCoV negativ.
Obs: Amplifieringskurvan för det positiva provet bör vara med en typisk S-kurva.Men om målkoncentrationen är för hög kanske den interna standardkontrollen inte förstärks och provet kan direkt bedömas som positivt.Om två av målgener får Ct≤38, är 2019-nCoV positiv.Om två av målgener får Ct≥40, är 2019-nCoV negativ.Om Ct≥40, eller inte visar något värde, tolkning är resultaten av målgenen negativa.
3. Om alla Ct-värden för FAM-, VIC-, ROX- och Cy5-kanaler är mer än 38 eller om det inte finns någon uppenbar typisk S-förstärkningskurva:
1) Det finns substans(er) i provet som hämmar PCR-reaktionen.Det rekommenderas att späda provet för att testas igen.
2) Processen för nukleinsyraextraktion är onormal, så det föreslås att återextrahera
nukleinsyra för omtestning.
3) Detta prov var INTE ett kvalificerat prov vid tidpunkten för provtagningen eller degraderades
under transport och lagring.
De är två sätt vi kan upptäcka denna situation: NAAT och Antigen.
(Kommer från CDC i Los Angeles)
