தயாரிப்பு விவரம்
நியூக்ளிக் அமிலம் பெருக்க சோதனைகளை (NAATs) விட, செயலில் உள்ள SARS-CoV-2 நோய்த்தொற்றைக் கண்டறிய ஆன்டிஜென்-கண்டறிதல் விரைவான கண்டறியும் சோதனைகள் (Ag-RDRs) வேகமான மற்றும் குறைந்த விலை வழியை வழங்க முடியும் என்று உலக சுகாதார அமைப்பு (WHO) வழிகாட்டுகிறது, மேலும் WHO பரிந்துரைக்கிறது. குறைந்தபட்ச செயல்திறன் தேவைகளை பூர்த்தி செய்யும் Ag-RDT கள் முதன்மை வழக்கு கண்டறிதல், தொடர்புத் தடமறிதல், வெடிப்பு விசாரணைகளின் போது மற்றும் சமூகங்களில் நோய் நிகழ்வுகளின் போக்குகளைக் கண்காணிக்க பயன்படுத்தப்படலாம்.
அம்சங்கள்
● விரிவானது:ஒரு சோதனையில் மூன்று இலக்கு மரபணு கண்டறியப்படுகிறது
● இணக்கமானது:CY5, FAM, VIC/HEX சேனல்கள் கொண்ட பொதுவான உபகரணங்களுக்கு ஏற்ப.
● சிறந்த செயல்திறன்:அதிக உணர்திறன் மற்றும் தனித்தன்மை, LOD = 200 பிரதிகள்/மிலி.
தொழில்நுட்ப அளவுரு
| பேக்கிங் விவரக்குறிப்பு | 50 சோதனைகள்/கிட், 100 சோதனைகள்/கிட் |
| இலக்கு பகுதி | ORF1ab, N, E |
| பொருந்தக்கூடிய மாதிரி | ஸ்பூட்டம், ஓரோபார்னீஜியல் ஸ்வாப் |
| கண்டறிதல் வரம்பு | 200 பிரதிகள்/மிலி |
| மொத்த தற்செயல் விகிதம் | 99.55% |
| Ct மதிப்பு (CV,%) | ≤5.0% |
| நேர்மறை தற்செயல் விகிதம் | 99.12% |
| எதிர்மறை தற்செயல் விகிதம் | 100% |
| சேமிப்பக நிபந்தனைகள் மற்றும் காலாவதி தேதி | -20±5℃ இல் சேமிக்கப்பட்டு, 12 மாதங்களுக்கு தற்காலிகமாக செல்லுபடியாகும். |
| உள் கட்டுப்பாடு | ஆம் |
| பட்டியல் எண் | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| சான்றிதழ் | CE |
| மாதிரிகள் | நாசோபார்னீஜியல் ஸ்வாப், ஓரோபார்னீஜியல் ஸ்வாப், அல்வியோலர் லாவேஜ் திரவம், உமிழ்நீர் மற்றும் சளி |
| பொருந்தக்கூடிய கருவி | ABI 7500, ரோச் லைட் சைக்கிள் 480Ⅱ , ரோச் கோபஸ் z 480, SLAN-96P நிகழ்நேர PCR சிஸ்டம் |
சோதனை செயல்முறை
1. நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல்
பிரித்தெடுத்தல் கருவியின் கையேட்டின் படி அறுவை சிகிச்சை மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும்.
2. கணினி தயாரிப்பு:
1) மறுஉருவாக்கியை வெளியே எடுத்து, மறுபொருளை முழுவதுமாக கரைக்கவும்.கலவையை கவிழ்த்து உடனடியாக மையவிலக்கு.N சோதனை எதிர்வினைகள் (N = சோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரிகளின் எண்ணிக்கை + நேர்மறை கட்டுப்பாடு + எதிர்மறை கட்டுப்பாடு + 1) முறையே எதிர்வினை அமைப்புகளுக்கு பின்வருமாறு தயாரிக்கப்படுகிறது.
| Vomponentss | 1 எதிர்வினை அமைப்புக்கான தொகுதி | N எதிர்வினை அமைப்புக்கான தொகுதி |
| நியூக்ளிக் அமிலம் பெருக்க எதிர்வினை தீர்வு கலவை (A7793YF) | 18 μL | 18 µL * N |
| என்சைம் கலவை | 2 μL | 2 µL * N |
| மொத்த அளவு | 20 μL | 20 μL * N |
2) எதிர்வினை விநியோகம்: எதிர்வினை தீர்வு கலக்கப்பட்டு மையவிலக்கு செய்யப்பட்டது, மேலும் ஒவ்வொரு குழாயும் 20μL அளவில் ஒரு பிசிஆர் குழாயில் ஃப்ளோரசன்ஸ் பிசிஆர் கருவிக்கு ஏற்றது.
3. ஏற்றுகிறது
பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மாதிரி நியூக்ளிக் அமிலத்தின் 5μL, நேர்மறை கட்டுப்பாடு நியூக்ளிக் அமிலம் மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு நியூக்ளிக் அமிலம் ஆகியவை எதிர்வினை அமைப்புகளில் சேர்க்கப்படுகின்றன, மேலும் மொத்த எதிர்வினை அளவு 25μL ஆகும்.குழாய் அட்டையை இறுக்கி, மையவிலக்கு செய்த சில நொடிகளுக்குப் பிறகு பெருக்கச் சோதனைப் பகுதிக்கு நகர்த்தவும்.
4. PCR பெருக்க மதிப்பீடு
1) பிசிஆர் எதிர்வினைக் குழாயை ஃப்ளோரசன்ட் பிசிஆர் பெருக்க கருவியில் பெருக்கக் கண்டறிதலுக்கு வைக்கவும்.
2) சுழற்சி அளவுரு அமைப்பு:
| நிரல் | சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கை | வெப்ப நிலை | எதிர்வினை நேரம் | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 நிமிடம் | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 நொடி | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 நொடி | |
| 60℃ | 30 நொடி | ஃப்ளோரசன்ஸ் சேகரிப்பு | ||
3) கண்டறிதல் அமைப்புகள்:
கண்டறிதல் சேனல்கள் முறையே ORF1ab, N மரபணு மற்றும் E ஜீன், RNase P உள் கட்டுப்பாடு ஆகியவற்றுடன் தொடர்புடைய FAM, VIC , ROX மற்றும் CY5 க்கு அமைக்கப்பட்டுள்ளன.ABI 7500 கருவிக்கு "Quencher Dye" மற்றும் "Passive Reference" ஆகியவை "இல்லை" என அமைக்கப்பட்டுள்ளன.நேர்மறை கட்டுப்பாடு, எதிர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் மாதிரி (தெரியாதது) ஆகியவற்றை மாதிரிகள் ஒத்திருக்கும் வரிசையில் அமைத்து, மாதிரி பெயரை "மாதிரி பெயர்" நெடுவரிசையில் அமைக்கவும்.
X-POCH16 க்கு, செயல்பாடு மற்றும் நிரல் பின்வருமாறு:
1) சுய-சோதனை முடிந்த பிறகு, மூடியைத் திறந்து, PCR எதிர்வினை குழாய்களை கருவியில் நியமிக்கப்பட்ட நிலைகளில் வைக்கவும்.
2) "நிபுணர்" என்பதைத் தேர்ந்தெடுப்பதன் மூலம் தொடங்கவும்.விருப்பம்."அனைத்தும்" விருப்பத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கவும் அல்லது திரையின் இடது பக்கத்தில் உள்ள எதிர்வினை பகுதியை கைமுறையாகத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
3) "LOAD" விருப்பத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்;சோதனைத் திட்டத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்;"முடிந்தது" மற்றும் "ரன்" என்பதைக் கிளிக் செய்யவும்.நிரலை முடிக்க 30நிமிடங்கள் ஆகும்.
இயல்புநிலை நிரலின் கண்டறிதல் சேனல்கள் முறையே ORF1ab, N மரபணு மற்றும் E ஜீன், RNase P உள் கட்டுப்பாடு ஆகியவற்றுடன் தொடர்புடைய FAM, VIC, ROX மற்றும் CY5 என அமைக்கப்பட்டுள்ளன.
இயல்புநிலை நிரலின் சுழற்சி அளவுரு பின்வருமாறு:
| நிரல் | எண்ணிக்கை | வெப்ப நிலை | எதிர்வினை நேரம் |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 நிமிடம் |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 வினாடிகள் |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 நொடி |
| 60℃ | 13 வினாடிகள் | ஒளிரும் தன்மை |
5. வாசல் அமைப்பு
பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட படத்தின்படி, தொடக்க மதிப்பு, அடிப்படை மற்றும் த்ரெஷோல்ட் மதிப்பின் முடிவு மதிப்பை சரிசெய்யவும் (தொடக்க மதிப்பு மற்றும் இறுதி மதிப்பு முறையே 3 மற்றும் 15 ஆக அமைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது, மேலும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டின் பெருக்க வளைவு தட்டையாக அல்லது வாசலை விட குறைவாக), பகுப்பாய்வு மாதிரி Ct மதிப்பை தானாகவே பெற பகுப்பாய்வு என்பதைக் கிளிக் செய்யவும்.அறிக்கை இடைமுகத்தில் முடிவுகளைப் பார்க்கவும்.
6. தரக் கட்டுப்பாடு தரநிலை
கருவியின் ஒவ்வொரு கட்டுப்பாடும் 'S' வளைவுடன் பின்வரும் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய வேண்டும், இல்லையெனில் சோதனை தவறானது.
| கண்டறிதல் சேனல்கள் | எதிர்மறை கட்டுப்பாடு | நேர்மறை கட்டுப்பாடு |
| FAM(ORF1ab) | Ct இல்லை | Ct≤38 |
| விஐசி(என்) | Ct இல்லை | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ct இல்லை | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ct இல்லை | Ct≤38 |
【கட்-ஆஃப் மதிப்பு】
100 ஓரோபார்னீஜியல் ஸ்வாப் மாதிரிகள் மற்றும் 100 ஸ்பூட்டம் மாதிரிகள் மற்றும் ROC வளைவு முறையின் முடிவுகளின்படி, இந்த கிட்டின் OFR1ab, N ஜீன்கள் E மரபணுவின் கட்-ஆஃப் மதிப்பு Ct = 38 ஆகும்.
அடிக்கடி கேட்கப்படும் கேள்விகள்
இந்த கிட்டில், 2019-nCoV இன் ORF1ab, N மற்றும் E மரபணுவின் பாதுகாக்கப்பட்ட மற்றும் குறிப்பிட்ட பகுதிகளுக்கு நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ட் PCR தொழில்நுட்பத்தின் ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகள் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன.PCR பெருக்கத்தின் போது, ஆய்வு வார்ப்புருவுடன் பிணைக்கப்படுகிறது, மேலும் ஆய்வின் 5'-இறுதி நிருபர் குழு Taq நொதியால் (5'→3' exonuclease செயல்பாடு) பிளவுபடுகிறது, இதன் மூலம் ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் சிக்னலை உருவாக்க தணிக்கும் குழுவிலிருந்து விலகிச் செல்கிறது. .கண்டறியப்பட்ட ஒளிரும் சமிக்ஞையின் அடிப்படையில் நிகழ்நேர பெருக்க வளைவு தானாகவே திட்டமிடப்படுகிறது, மேலும் மாதிரி Ct மதிப்பு கணக்கிடப்படுகிறது.FAM, VIC மற்றும் ROX ஃப்ளோரோஃபோர்கள் ORF1ab மரபணு, N மரபணு மற்றும் E மரபணு ஆய்வுகள் என பெயரிடப்பட்டுள்ளன.ஒரு சோதனையைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், 2019-nCoV இன் மேற்கண்ட மூன்று மரபணுக்களின் தரமான கண்டறிதல் ஒரே நேரத்தில் செய்யப்படலாம்.
தவறான எதிர்மறையான முடிவுகளைத் தவிர்க்க மருத்துவ மாதிரிகள் சேகரிப்பு, கையாளுதல், பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் RT-PCR செயல்முறை ஆகியவற்றைக் கண்காணிக்க RNase P மரபணுவை இலக்காகக் கொண்ட உள் கட்டுப்பாட்டுடன் கிட் வழங்கப்படுகிறது.உள் கட்டுப்பாடு CY5 ஃப்ளோரசன்ட் குழுவுடன் பெயரிடப்பட்டுள்ளது.
1. கருவி இயல்பானதாக இருக்கும்போது சோதனை முடிவுகளை பகுப்பாய்வு செய்து விளக்கவும், மேலும் நேர்மறை கட்டுப்பாடு, எதிர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் உள் கட்டுப்பாட்டு சோதனை முடிவு ஆகியவை தரக் கட்டுப்பாட்டுத் தரத்தை சந்திக்கின்றன.
2. அகக் கட்டுப்பாட்டின் பெருக்க வளைவு (CY5) ஒரு பொதுவான S வளைவு மற்றும் Ct ≤ 38 ஆகியவற்றைக் காட்டுகிறது, இலக்கு மரபணுக்களின் முடிவுகள் பின்வரும் நிபந்தனைகளுக்கு உட்படுத்தப்படுகின்றன.
| கண்டறிதல் சேனல்கள் | இலக்கு மரபணுக்களின் முடிவுகளை விளக்குதல் | ||
| FMA | விஐசி (N மரபணு) | ROX (E மரபணு) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | ஒரு பொதுவான S பெருக்க வளைவுடன், Ct மதிப்பு≤38, தொடர்புடைய இலக்கு மரபணு நேர்மறையாக இருக்கும். |
| 38 x Ct 40 | 38 x Ct 40 | 38 x Ct 40 | வழக்கமான S பெருக்க வளைவுடன், மாதிரியின் தொடர்புடைய இலக்கு மரபணுவை மீண்டும் சோதிக்கவும். வழக்கமான S பெருக்க வளைவுடன் Ct மதிப்பு＜ 40 எனில், தொடர்புடைய இலக்கு மரபணு நேர்மறையாக இருக்கும்;Ct மதிப்பு≥40 எனில், தொடர்புடைய இலக்கு மரபணு எதிர்மறையாக இருக்கும் |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | தொடர்புடைய இலக்கு மரபணு எதிர்மறையானது |
2019-nCoV க்கான முடிவுகளின் விளக்கம்:
ORF1ab, N மரபணு மற்றும் E மரபணுவின் முடிவுகளின்படி, விளக்கம் பின்வருமாறு:
1) கண்டறியப்பட்ட மரபணுக்களின் இரண்டு அல்லது மூன்று மரபணுக்கள் நேர்மறையாக இருந்தால், 2019-nCoV நேர்மறையாக இருக்கும்;
2) கண்டறியப்பட்ட மரபணுக்களில் ஒன்று அல்லது எதுவும் நேர்மறையாக இருந்தால், 2019-nCoV எதிர்மறையாக இருக்கும்.
குறிப்பு: நேர்மறை மாதிரியின் பெருக்க வளைவு வழக்கமான S வளைவுடன் இருக்க வேண்டும்.இருப்பினும், இலக்கு செறிவு மிக அதிகமாக இருந்தால், உள் நிலையான கட்டுப்பாடு பெருக்கப்படாமல் இருக்கலாம் மற்றும் மாதிரியை நேர்மறையாக நேரடியாக மதிப்பிடலாம்.இலக்கு மரபணுக்களில் ஏதேனும் இரண்டு Ct≤38ஐப் பெற்றால், 2019-nCoV நேர்மறையாக இருக்கும்.இலக்கு மரபணுக்களில் ஏதேனும் இரண்டுக்கு Ct≥40 கிடைத்தால், 2019-nCoV எதிர்மறையாக இருக்கும்.Ct≥40, அல்லது எந்த மதிப்பையும் காட்டவில்லை என்றால், இலக்கு மரபணுவின் முடிவுகள் எதிர்மறையாக இருக்கும்.
3. FAM, VIC, ROX மற்றும் Cy5 சேனல்களின் அனைத்து Ct மதிப்புகளும் 38க்கு மேல் இருந்தால் அல்லது வெளிப்படையான வழக்கமான S பெருக்க வளைவு இல்லை என்றால்:
1) PCR எதிர்வினையைத் தடுக்கும் மாதிரியில் பொருள்(கள்) உள்ளது/இருக்கிறது.மீண்டும் சோதிக்கப்படுவதற்கு மாதிரியை நீர்த்துப்போகச் செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
2) நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் செயல்முறை அசாதாரணமானது, எனவே மீண்டும் பிரித்தெடுக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது
மீண்டும் சோதனைக்கு நியூக்ளிக் அமிலம்.
3) இந்த மாதிரி மாதிரியின் போது தகுதிவாய்ந்த மாதிரியாக இருக்கவில்லை, அல்லது சிதைக்கப்பட்டது
போக்குவரத்து மற்றும் சேமிப்பின் போது.
இந்த சூழ்நிலையை நாம் கண்டறியக்கூடிய 2 வழிகள் அவை: NAAT மற்றும் ஆன்டிஜென்.
(லாஸ் ஏஞ்சல்ஸின் CDC இலிருந்து வந்தது)
