รายละเอียดผลิตภัณฑ์
องค์การอนามัยโลก (WHO) ให้คำแนะนำว่าการตรวจวินิจฉัยอย่างรวดเร็วเพื่อตรวจหาแอนติเจน (Ag-RDRs) สามารถเสนอวิธีการวินิจฉัยการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ที่ออกฤทธิ์ได้รวดเร็วและถูกกว่าการทดสอบด้วยการขยายกรดนิวคลีอิก (NAATs) และ WHO ยังแนะนำ Ag-RDT ที่ตรงตามข้อกำหนดประสิทธิภาพขั้นต่ำสามารถใช้สำหรับการตรวจหากรณีหลัก การติดตามผู้สัมผัส ในระหว่างการสืบสวนการระบาด และติดตามแนวโน้มของอุบัติการณ์ของโรคในชุมชน
คุณสมบัติ
● ครอบคลุม:ตรวจพบยีนเป้าหมายสามตัวในการทดสอบครั้งเดียว
● เข้ากันได้:ปรับให้เข้ากับอุปกรณ์ทั่วไปด้วยช่อง CY5, FAM, VIC/HEX
● ประสิทธิภาพที่ยอดเยี่ยม:ความไวและความจำเพาะสูง LOD = 200 สำเนา/มล.
พารามิเตอร์ทางเทคนิค
| ข้อกำหนดการบรรจุ | 50 การทดสอบ/ชุด, 100 การทดสอบ/ชุด |
| ภูมิภาคเป้าหมาย | ORF1ab, N, E |
| ตัวอย่างที่ใช้บังคับ | เสมหะ, Oropharyngeal Swab |
| ขีดจำกัดของการตรวจจับ | 200 สำเนา/มล |
| อัตราความบังเอิญทั้งหมด | 99.55% |
| ค่ากะรัต (CV,%) | ≤5.0% |
| อัตราบังเอิญในเชิงบวก | 99.12% |
| อัตราบังเอิญติดลบ | 100% |
| เงื่อนไขการจัดเก็บและวันหมดอายุ | เก็บไว้ที่ -20±5℃ และใช้ได้ชั่วคราวเป็นเวลา 12 เดือน |
| การควบคุมภายใน | ใช่ |
| หมายเลขแคตตาล็อก | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| การรับรอง | CE |
| ตัวอย่าง | Nasopharyngeal swab, Oropharyngeal swab, Alveolar lavage fluid, น้ำลายและเสมหะ |
| ตราสารบังคับ | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P ระบบ PCR แบบเรียลไทม์ |
กระบวนการทดสอบ
1. การสกัดกรดนิวคลีอิก
ควรดำเนินการตามคู่มือของชุดสกัด
2. การเตรียมระบบ:
1) นำรีเอเจนต์ออกมาและละลายรีเอเจนต์ให้หมดกลับส่วนผสมและหมุนเหวี่ยงทันทีปฏิกิริยาทดสอบ N (N = จำนวนตัวอย่างที่จะทดสอบ + การควบคุมเชิงบวก + การควบคุมเชิงลบ + 1) ถูกเตรียมสำหรับระบบปฏิกิริยาตามลำดับดังต่อไปนี้
| ผู้สนับสนุน | ปริมาตรสำหรับ 1 ระบบปฏิกิริยา | ปริมาตรสำหรับระบบปฏิกิริยา N |
| สารละลายผสมสำหรับปฏิกิริยาการขยายตัวของกรดนิวคลีอิก (A7793YF) | 18 ไมโครลิตร | 18 µL * N |
| ส่วนผสมของเอนไซม์ | 2 ไมโครลิตร | 2 µL * N |
| ปริมาณรวม | 20 ไมโครลิตร | 20 µL * N |
2) การกระจายตัวของปฏิกิริยา: สารละลายของปฏิกิริยาถูกผสมและปั่นแยก และแต่ละหลอดถูกจ่ายในปริมาณ 20μL ในหลอด PCR ที่เหมาะสำหรับเครื่องมือ PCR เรืองแสง
3. กำลังโหลด
5μL ของกรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่สกัดแล้ว กรดนิวคลีอิกกลุ่มควบคุมเชิงบวก และกรดนิวคลีอิกกลุ่มควบคุมเชิงลบ จะถูกเพิ่มเข้าไปในระบบปฏิกิริยา และปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมดคือ 25μLยึดฝาครอบท่อและย้ายไปยังพื้นที่ทดสอบการขยายหลังจากการหมุนเหวี่ยงไม่กี่วินาที
4. การทดสอบการขยาย PCR
1) ใส่หลอดปฏิกิริยา PCR ลงในเครื่องมือขยาย PCR เรืองแสงเพื่อตรวจจับการขยาย
2) การตั้งค่าพารามิเตอร์รอบ:
| โปรแกรม | จำนวนรอบ | อุณหภูมิ | เวลาการเกิดปฏิกิริยา | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 นาที | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 วินาที | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 วินาที | |
| 60 ℃ | 30 วินาที | คอลเลกชันเรืองแสง | ||
3) การตั้งค่าการตรวจจับ:
ช่องตรวจจับถูกตั้งค่าเป็น FAM, VIC ,ROX และ CY5 ซึ่งสอดคล้องกับการควบคุมภายในของ ORF1ab, N gene และ E Gene, RNase P ตามลำดับ"Quencher Dye" และ "Passive Reference" ถูกตั้งค่าเป็น "ไม่มี" สำหรับเครื่องมือ ABI 7500ตั้งค่าการควบคุมเชิงบวก การควบคุมเชิงลบ และตัวอย่าง (ไม่ทราบ) ตามลำดับที่ตัวอย่างสอดคล้องกัน และตั้งชื่อตัวอย่างในคอลัมน์ "ชื่อตัวอย่าง"
สำหรับ X-POCH16 การทำงานและโปรแกรมมีดังนี้:
1) หลังจากการทดสอบตัวเองเสร็จสิ้น ให้เปิดฝาและวางท่อปฏิกิริยา PCR ลงในตำแหน่งที่กำหนดในเครื่องมือ
2) เริ่มต้นด้วยการเลือก "ประสบการณ์"ตัวเลือก.เลือกตัวเลือก "ทั้งหมด" หรือเลือกพื้นที่ตอบสนองด้วยตนเองทางด้านซ้ายของหน้าจอ
3) เลือกตัวเลือก "โหลด";เลือกโปรแกรมทดสอบคลิก "เสร็จสิ้น" และ "เรียกใช้"โปรแกรมใช้เวลา 30 นาที 42 วินาทีจึงจะเสร็จสมบูรณ์
ช่องตรวจจับของโปรแกรมเริ่มต้นถูกตั้งค่าเป็น FAM, VIC, ROX และ CY5 ซึ่งสอดคล้องกับ ORF1ab, ยีน N และ E Gene, การควบคุมภายใน RNase P ตามลำดับ
พารามิเตอร์รอบของโปรแกรมเริ่มต้นมีดังนี้:
| โปรแกรม | จำนวน | อุณหภูมิ | เวลาการเกิดปฏิกิริยา |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2 นาที |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 วินาที |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2 วินาที |
| 60 ℃ | 13 วินาที | สารเรืองแสง |
5. การตั้งค่าเกณฑ์
ตามภาพที่วิเคราะห์ ให้ปรับค่าเริ่มต้น ค่าสิ้นสุดของเส้นฐาน และค่าเกณฑ์ (แนะนำให้ตั้งค่าเริ่มต้นและค่าสิ้นสุดเป็น 3 และ 15 ตามลำดับ และเส้นโค้งการขยายของตัวควบคุมเชิงลบถูกปรับให้แบนหรือ ต่ำกว่าเส้นเกณฑ์) ให้คลิกการวิเคราะห์เพื่อรับการวิเคราะห์ตัวอย่างค่า Ct โดยอัตโนมัติดูผลลัพธ์ในอินเทอร์เฟซรายงาน
6. มาตรฐานการควบคุมคุณภาพ
ชุดควบคุมแต่ละชุดต้องเป็นไปตามข้อกำหนดต่อไปนี้ด้วยเส้นโค้ง 'S' มิฉะนั้นการทดสอบจะไม่ถูกต้อง
| ช่องทางการตรวจจับ | การควบคุมเชิงลบ | การควบคุมเชิงบวก |
| ครอบครัว(ORF1ab) | ไม่มี Ct | กะรัต≤38 |
| วิค(N) | ไม่มี Ct | กะรัต≤38 |
| ร็อกซ์(E) | ไม่มี Ct | กะรัต≤38 |
| CY5(RP) | ไม่มี Ct | กะรัต≤38 |
【มูลค่าจุดตัด】
จากผลการตรวจจาก oropharyngeal swab 100 ตัวอย่าง และเสมหะ 100 ตัวอย่าง และด้วยวิธี ROC curve ค่า Cut-off ของ OFR1ab, N ยีน E Gene ของชุดทดสอบนี้เท่ากับ Ct = 38
คำถามที่พบบ่อย
ในชุดเครื่องมือนี้ ไพรเมอร์และหัววัดของเทคโนโลยี PCR เรืองแสงแบบเรียลไทม์ได้รับการออกแบบมาสำหรับภูมิภาคอนุรักษ์และเฉพาะเจาะจงของยีน ORF1ab, N และ E ของ 2019-nCoV ตามลำดับในระหว่างการขยายสัญญาณ PCR โพรบจะเชื่อมโยงกับเทมเพลต และกลุ่มนักข่าว 5'-end ของโพรบจะถูกแยกออกโดยเอนไซม์ Taq (กิจกรรม exonuclease 5' → 3') ดังนั้นจึงเคลื่อนออกจากกลุ่มดับเพื่อสร้างสัญญาณเรืองแสง .เส้นโค้งการขยายตามเวลาจริงได้รับการลงจุดโดยอัตโนมัติตามสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ที่ตรวจพบ และค่า Ct ของตัวอย่างจะถูกคำนวณฟลูออโรฟอร์ FAM, VIC และ ROX ถูกติดฉลากไว้ที่โพรบของยีน ORF1ab, ยีน N และยีน Eเมื่อใช้การทดสอบเพียงครั้งเดียว การตรวจหายีน 2019-nCoV สามชนิดข้างต้นในเชิงคุณภาพสามารถทำได้พร้อมกัน
ชุดอุปกรณ์นี้มาพร้อมกับการควบคุมภายในที่กำหนดเป้าหมายไปที่ยีน RNase P เพื่อตรวจสอบการเก็บตัวอย่างทางคลินิก การจัดการ การสกัด และกระบวนการ RT-PCR เพื่อหลีกเลี่ยงผลลบที่ผิดพลาดการควบคุมภายในติดป้ายกลุ่มเรืองแสง CY5
1. วิเคราะห์และตีความผลการทดสอบเมื่อเครื่องมือเป็นปกติ และการควบคุมเชิงบวก การควบคุมเชิงลบ และผลการทดสอบการควบคุมภายในเป็นไปตามมาตรฐานการควบคุมคุณภาพ
2. เส้นโค้งการขยายของการควบคุมภายใน (CY5) แสดงเส้นโค้ง S ทั่วไปและ Ct ≤ 38 การตีความผลลัพธ์ของยีนเป้าหมายอยู่ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้
| ช่องทางการตรวจจับ | การแปลผลของยีนเป้าหมาย | ||
| เอฟเอ็มเอ | วิก (ยีน N) | ROX (ยีนอี) | |
| กะรัต≤38 | กะรัต≤38 | กะรัต≤38 | ด้วยเส้นโค้งการขยาย S ทั่วไป， ค่า Ct คือ≤38 ยีนเป้าหมายที่สอดคล้องกันนั้นเป็นค่าบวก |
| 38 ＜ กะรัต ＜ 40 | 38 ＜ กะรัต ＜ 40 | 38 ＜ กะรัต ＜ 40 | ด้วยเส้นโค้งการขยาย S ทั่วไป ทดสอบยีนเป้าหมายที่สอดคล้องกันของตัวอย่างอีกครั้ง ถ้าค่า Ct < 40 กับเส้นโค้งการขยาย S ทั่วไป ยีนเป้าหมายที่เกี่ยวข้องจะเป็นบวกถ้าค่า Ct ≥40 แสดงว่ายีนเป้าหมายนั้นมีค่าเป็นลบ |
| กะรัต≥40 | กะรัต≥40 | กะรัต≥40 | ยีนเป้าหมายที่เกี่ยวข้องมีค่าเป็นลบ |
การตีความผลลัพธ์สำหรับ 2019-nCoV:
จากผลของ ORF1ab ยีน N และยีน E ตีความดังนี้:
1) ถ้าสองหรือสามยีนของยีนที่ตรวจพบเป็นบวก แสดงว่า 2019-nCoV เป็นบวก
2) หากยีนที่ตรวจพบเพียงหนึ่งหรือไม่มีเลยเป็นบวก แสดงว่า 2019-nCoV เป็นลบ
หมายเหตุ: เส้นโค้งการขยายของตัวอย่างที่เป็นบวกควรเป็นเส้นโค้ง S ทั่วไปอย่างไรก็ตาม หากความเข้มข้นเป้าหมายสูงเกินไป การควบคุมมาตรฐานภายในอาจไม่สามารถขยายได้ และตัวอย่างสามารถตัดสินได้โดยตรงว่าเป็นบวกหากยีนเป้าหมายสองตัวใดได้รับ Ct≤38 แสดงว่า 2019-nCoV เป็นบวกหากยีนเป้าหมายสองตัวใดได้รับ Ct≥40 แสดงว่า 2019-nCoV เป็นลบถ้า Ct≥40 หรือไม่แสดงค่า การตีความผลลัพธ์ของยีนเป้าหมายจะเป็นลบ
3. หากค่า Ct ทั้งหมดของช่อง FAM, VIC, ROX และ Cy5 มากกว่า 38 หรือไม่มีเส้นโค้งการขยาย S ทั่วไปที่ชัดเจน:
1) มีสารในตัวอย่างที่ยับยั้งปฏิกิริยา PCRแนะนำให้เจือจางตัวอย่างเพื่อทำการทดสอบซ้ำ
2) กระบวนการสกัดกรดนิวคลีอิกผิดปกติ จึงแนะนำให้สกัดใหม่
กรดนิวคลีอิกสำหรับการทดสอบซ้ำ
3) ตัวอย่างนี้ไม่ใช่ตัวอย่างที่มีคุณสมบัติ ณ เวลาที่ทำการสุ่มตัวอย่าง หรือเสื่อมคุณภาพ
ระหว่างการขนส่งและการเก็บรักษา
เราสามารถตรวจพบสถานการณ์นี้ได้ 2 วิธีคือ NAAT และ Antigen
(มาจาก CDC ของลอสแองเจลิส)
