مەھسۇلات تەپسىلاتى
دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتى ئانتىگېننى تەكشۈرۈشنىڭ تېز دىئاگنوز قويۇش سىنىقىنىڭ (Ag-RDRs) يادرو كىسلاتاسىنى كۈچەيتىش سىنىقىغا قارىغاندا ئاكتىپ SARS-CoV-2 يۇقۇملىنىشقا دىئاگنوز قويۇشنىڭ تېخىمۇ تېز ۋە ئەرزان ئۇسۇل بىلەن تەمىنلىيەلەيدىغانلىقىغا يېتەكچىلىك قىلىدۇ ، دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتىمۇ تەۋسىيە قىلىدۇ. ئەڭ تۆۋەن ئىقتىدار تەلىپىگە ماس كېلىدىغان Ag-RDT لارنى دەسلەپكى تەكشۈرۈش ، ئالاقىلىشىش ئىزلىرى ، يۇقۇم ئەھۋالىنى تەكشۈرۈش ۋە جەمئىيەتتىكى كېسەللىكلەرنىڭ يۈزلىنىشىنى نازارەت قىلىشقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
Features
● ئەتراپلىق:بىر سىناقتا ئۈچ نىشانلىق گېن بايقايدۇ
● compatible:CY5 ، FAM ، VIC / HEX قاناللىرى بىلەن ئورتاق ئۈسكۈنىلەرگە ماسلىشىش.
Performance مۇنەۋۋەر ئىپادىسى:يۇقىرى سەزگۈرلۈك ۋە ئېنىقلىق ، LOD = 200 نۇسخا / مىللىمېتىر.
تېخنىكىلىق پارامېتىر
| ئوراش ئۆلچىمى | 50 سىناق / يۈرۈشلۈك ، 100 سىناق / يۈرۈشلۈك |
| نىشان رايونى | ORF1ab, N, E. |
| قوللىنىشچان ئۈلگە | بەلغەم ، بوغماق ئۈچەي يەللىكى |
| بايقاشنىڭ چېكى | 200 نۇسخا / ml |
| ئومۇمىي تاسادىپىيلىق نىسبىتى | 99.55% |
| Ct قىممىتى (CV,%) | ≤5.0% |
| ئاكتىپ تاسادىپىيلىق نىسبىتى | 99.12% |
| سەلبىي تاسادىپىيلىق نىسبىتى | 100% |
| ساقلاش شەرتى ۋە مۇددىتى توشقان ۋاقىت | -20 ± 5 at دە ساقلانغان ، ۋاقىتلىق كۈچكە ئىگە 12 ئاي. |
| ئىچكى كونترول | ھەئە |
| مۇندەرىجە نومۇرى | A7793YF-50T ، A7793YF-100T |
| گۇۋاھنامە | CE |
| Specimens | بۇرۇن يۇتقۇنچاق يەللىكى ، بوغماق ئۈچەي يەللىكى ، ئۆپكە يەل خالتىسى سۇيۇقلۇقى ، شۆلگەي ۋە بەلغەم. |
| قوللىنىشچان قورال | ABI 7500 ، روچې يېنىك ۋېلىسىپىت 480Ⅱ ، روچې كوباس z 480 ، SLAN-96P ھەقىقىي ۋاقىت PCR سىستېمىسى |
سىناق تەرتىپى
1. يادرو كىسلاتاسىنى ئېلىش
ئېلىش زاپچاسلىرىنىڭ قوللانمىسىغا ئاساسەن مەشغۇلات ئېلىپ بېرىش كېرەك.
2. سىستېما تەييارلاش:
1) رېئاكتورنى چىقىرىپ ، رېئاكتورنى تولۇق ئېرىتىش.ئارىلاشما ۋە مەركەزدىن قاچۇرۇشنى دەرھال قايتۇرۇڭ.N سىناق رېئاكسىيەسى (N = سىناق قىلىنىدىغان ئەۋرىشكە سانى + مۇسبەت كونترول + مەنپىي كونترول + 1) ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئىنكاس سىستېمىسى ئۈچۈن تەييارلىنىدۇ.
| Vomponentss | 1 ئىنكاس سىستېمىسىنىڭ ھەجىمى | N رېئاكسىيە سىستېمىسىنىڭ ھەجىمى |
| يادرو كىسلاتاسىنى كۈچەيتىش رېئاكسىيەسى ئارىلاشمىسى (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N. |
| ئېنزىم ئارىلاشمىسى | 2 µL | 2 µL * N. |
| ئومۇمىي ھەجىمى | 20 µL | 20 µL * N. |
2) رېئاكسىيە تەقسىماتى: رېئاكسىيە ھەل قىلىش چارىسى ئارىلاشتۇرۇلدى ۋە مەركەزلەشتۈرۈلدى ، ھەر بىر تۇرۇبا فلۇئورېسسېنسىيە PCR ئۈسكۈنىسىگە ماس كېلىدىغان PCR تۇرۇبىسىدا 20μL مىقداردا تارقىتىلدى.
3. يۈكلەش
ئېلىنغان ئەۋرىشكە يادرو كىسلاتاسىنىڭ 5μL ، مۇسبەت كونترول يادرو كىسلاتاسى ۋە مەنپىي كونترول يادرو كىسلاتاسى رېئاكسىيە سىستېمىسىغا قوشۇلىدۇ ، ئومۇمىي ئىنكاس مىقدارى 25μL.نەيچە ياپقۇچنى چىڭىتىپ ، بىر نەچچە سېكۇنت مەركەزدىن قاچقاندىن كېيىن ئۇنى كۈچەيتىش سىناق رايونىغا يۆتكەڭ.
4. PCR كۈچەيتمە ئەسۋابى
1) PCR رېئاكسىيە تۇرۇبىسىنى فلۇئورېسسېنسىيەلىك PCR كۈچەيتمە ئەسۋابىغا سېلىپ كۈچەيتكۈچنى تەكشۈرۈش.
2) دەۋرىيلىك پارامېتىر تەڭشىكى:
| پروگرامما | دەۋرىيلىك سانى | تېمپېراتۇرا | ئىنكاس ۋاقتى | |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 10 مىنۇت | |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30 سېكۇنت | |
| 3 | 45 | 95 ℃ | 5 سېكۇنت | |
| 60 ℃ | 30 سېكۇنت | Fluorescence Collection | ||
3) بايقاش تەڭشەكلىرى:
تەكشۈرۈش قاناللىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا ORF1ab ، N گېنى ۋە E Gene ، RNase P نىڭ ئىچكى كونتروللۇقىغا ماس كېلىدىغان FAM ، VIC ، ROX ۋە CY5 قىلىپ تەڭشەلدى.«Quencher Dye» ۋە «Passive Reference» ABI 7500 قورالىنىڭ «None» قىلىپ بېكىتىلگەن.ئاكتىپ كونترول ، پاسسىپ كونترول ۋە ئەۋرىشكە (نامەلۇم) نى ئەۋرىشكە ماس ھالدا تەرتىپكە سېلىپ ، ئەۋرىشكە نامىنى «ئەۋرىشكە ئىسمى» ئىستونىغا قويۇڭ.
X-POCH16 ئۈچۈن مەشغۇلات ۋە پروگرامما تۆۋەندىكىچە:
1) ئۆزىنى تەكشۈرۈش تاماملانغاندىن كېيىن ، قاپاقنى ئېچىڭ ھەمدە PCR رېئاكسىيە تۇرۇبىسىنى چالغۇدىكى بەلگىلەنگەن ئورۇنغا قويۇڭ.
2) «مۇتەخەسسىس» نى تاللاشتىن باشلاڭ.تاللاش.«ھەممە» تاللانمىسىنى تاللاڭ ياكى ئېكراننىڭ سول تەرىپىدىكى ئىنكاس رايونىنى قولدا تاللاڭ.
3) «LOAD» تاللاشنى تاللاڭ;سىناق پروگراممىسىنى تاللاڭ«DONE» ۋە «RUN» نى چېكىڭ.بۇ پروگراممىنى تاماملاشقا 30min42s كېتىدۇ.
سۈكۈتتىكى پروگراممىنىڭ بايقاش يوللىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا ORF1ab ، N گېنى ۋە E Gene ، RNase P نىڭ ئىچكى كونتروللۇقىغا ماس كېلىدىغان FAM ، VIC ، ROX ۋە CY5 قىلىپ تەڭشەلدى.
سۈكۈتتىكى پروگراممىنىڭ دەۋرىيلىك پارامېتىرى تۆۋەندىكىچە:
| پروگرامما | سانى | تېمپېراتۇرا | ئىنكاس ۋاقتى |
| 1 | 1 | 50 ℃ | 2min |
| 2 | 1 | 95 ℃ | 30sec |
| 3 | 41 | 95 ℃ | 2sec |
| 60 ℃ | 13sec | Fluorescence |
5. بوسۇغىدىن تەڭشەش
تەھلىل قىلىنغان رەسىمگە ئاساسەن ، باشلىنىش قىممىتى ، ئاساسىي سىزىق ۋە چەك چېكىنىڭ ئاخىرقى قىممىتى (باشلىنىش قىممىتى ۋە ئاخىرقى قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 3 ۋە 15 قىلىپ بېكىتىلىشى تەۋسىيە قىلىنىدۇ ، سەلبىي كونترولنىڭ كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقى تەكشى ياكى تەڭشەلدى. بوسۇغا سىزىقىدىن تۆۋەن) ، ئانالىزنى چېكىپ ، ئەۋرىشكە Ct قىممىتىنى ئاپتوماتىك تەھلىل قىلىڭ.دوكلات كۆرۈنمە يۈزىدىكى نەتىجىنى كۆرۈڭ.
6. سۈپەت كونترول ئۆلچىمى
يۈرۈشلۈك زاپچاسلارنىڭ ھەر بىر كونتروللۇقى چوقۇم «S» ئەگرى سىزىقى بىلەن تۆۋەندىكى تەلەپلەرگە ماس كېلىشى كېرەك ، بولمىسا تەجرىبە ئىناۋەتسىز.
| تەكشۈرۈش يوللىرى | سەلبىي كونترول | ئاكتىپ كونترول |
| FAM (ORF1ab) | No Ct | Ct≤38 |
| VIC (N) | No Ct | Ct≤38 |
| ROX (E) | No Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | No Ct | Ct≤38 |
【كېسىش قىممىتى】
100 بوغماق ئۈچەي يەللىكى ئەۋرىشكىسى ۋە 100 تال بەلغەم ئەۋرىشكىسى نەتىجىسىگە قارىغاندا ، ROC ئەگرى سىزىق ئۇسۇلى بىلەن OFR1ab نىڭ كېسىش قىممىتى ، بۇ گېننىڭ N گېنى E گېن Ct = 38
سوئال
بۇ يۈرۈشلۈك زاپچاستا ، ھەقىقىي ۋاقىتتىكى فلۇئورېسسېنسىيەلىك PCR تېخنىكىسىنىڭ دەسلەپكى ۋە تەكشۈرۈش ئەسۋابى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 2019-nCoV نىڭ ORF1ab ، N ۋە E گېنىنىڭ ساقلانغان ۋە ئالاھىدە رايونلىرىغا لايىھەلەنگەن.PCR كۈچەيتىلگەن ۋاقىتتا ، تەكشۈرۈش ئەسۋابى قېلىپقا باغلىنىدۇ ، تەكشۈرۈش گۇرۇپپىسىنىڭ 5'ئاخىرىدىكى مۇخبىرلار گۇرۇپپىسى تاك فېرمېنتى (5 '→ 3' exonuclease پائالىيىتى) تەرىپىدىن يېشىپ ، شۇ ئارقىلىق ئۆچۈرۈش گۇرۇپپىسىدىن يىراقلاپ فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالى ھاسىل قىلىدۇ. .ھەقىقىي ۋاقىتتىكى كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق بايقالغان فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالىغا ئاساسەن ئاپتوماتىك پىلانلىنىدۇ ، ئەۋرىشكە Ct قىممىتى ھېسابلىنىدۇ.FAM ، VIC ۋە ROX فتوروفورلىرىغا ORF1ab گېنى ، N گېنى ۋە E گېنى تەكشۈرۈلگەن.بىر سىناق ئارقىلىق ، 2019-nCoV نىڭ يۇقارقى ئۈچ گېنىنى سۈپەتلىك بايقاش بىرلا ۋاقىتتا ئېلىپ بېرىلسا بولىدۇ.
بۇ زاپچاس RNase P گېنىنى نىشان قىلغان ئىچكى كونترول بىلەن تەمىنلەنگەن بولۇپ ، كلىنىكىلىق ئەۋرىشكە يىغىش ، بىر تەرەپ قىلىش ، ئېلىش ۋە RT-PCR جەريانىنى نازارەت قىلىپ ، يالغان پاسسىپ نەتىجىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.ئىچكى كونترولغا CY5 فلۇئورېسسېنسىيە گۇرۇپپىسى بەلگىسى قويۇلغان.
1. ئەسۋاب نورمال بولغاندا سىناق نەتىجىسىنى تەھلىل قىلىڭ ۋە شەرھلەڭ ، مۇسبەت كونترول ، پاسسىپ كونترول ۋە ئىچكى كونترول سىناق نەتىجىسى سۈپەت كونترول ئۆلچىمىگە يېتىدۇ.
2. ئىچكى كونترولنىڭ كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقى (CY5) تىپىك S ئەگرى سىزىقى ۋە Ct ≤ 38 نى كۆرسىتىدۇ ، نىشان گېننىڭ نەتىجىسىنى چۈشەندۈرۈش تۆۋەندىكى شەرتلەرگە دۇچ كېلىدۇ.
| تەكشۈرۈش يوللىرى | نىشانلىق گېننىڭ نەتىجىسىنى ئىزاھلاش | ||
| FMA | VIC (N gene) | ROX (E gene) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | تىپىك S كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقى ， Ct قىممىتى ≤38 بولسا ، ماس نىشان گېن مۇسبەت بولىدۇ. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | تىپىك S كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقى بىلەن ئەۋرىشكىنىڭ ماس كېلىدىغان گېننى قايتا سىناڭ. ئەگەر تىپىك S كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقلىق Ct قىممىتى ＜ 40 بولسا ، ماس نىشان گېنى مۇسبەت بولىدۇ.ئەگەر Ct قىممىتى ≥40 بولسا ، مۇناسىپ نىشان گېنى مەنپىي بولىدۇ |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | ماس كېلىدىغان نىشان گېنى مەنپىي بولىدۇ |
2019-nCoV نىڭ نەتىجىسىنى ئىزاھلاش:
ORF1ab ، N گېنى ۋە E گېنىنىڭ نەتىجىسىگە ئاساسەن ، تۆۋەندىكىدەك چۈشەندۈرۈش:
1) بايقالغان گېننىڭ ئىككى ياكى ئۈچ گېنى مۇسبەت بولسا ، 2019-nCoV مۇسبەت بولىدۇ.
2) ئەگەر بايقالغان گېنلارنىڭ پەقەت بىرى ياكى ھېچقايسىسى مۇسبەت بولسا ، 2019-nCoV مەنپىي بولىدۇ.
ئەسكەرتىش: مۇسبەت ئەۋرىشكىنىڭ چوڭايتىش ئەگرى سىزىقى تىپىك S ئەگرى سىزىقى بىلەن بولۇشى كېرەك.قانداقلا بولمىسۇن ، نىشاننىڭ قويۇقلۇقى بەك يۇقىرى بولسا ، ئىچكى ئۆلچەملىك كونترولنى كۈچەيتكىلى بولمايدۇ ھەمدە ئەۋرىشكە بىۋاسىتە مۇسبەت دەپ ھۆكۈم قىلىشقا بولىدۇ.ئەگەر نىشاندىكى ئىككى گېن Ct≤38 غا ئېرىشسە ، 2019-nCoV مۇسبەت بولىدۇ.ئەگەر نىشاندىكى ئىككى گېن Ct≥40 غا ئېرىشسە ، 2019-nCoV مەنپىي بولىدۇ.ئەگەر Ct≥40 ياكى قىممىتى يوق بولسا ، نىشان گېننىڭ نەتىجىسى مەنپىي بولىدۇ.
3. ئەگەر FAM ، VIC ، ROX ۋە Cy5 قاناللىرىنىڭ Ct قىممىتىنىڭ ھەممىسى 38 دىن ئېشىپ كەتسە ياكى ئېنىق تىپىك S كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقى بولمىسا:
1) ئەۋرىشكىدە PCR رېئاكسىيەسىنى چەكلەيدىغان ماددىلار بار.قايتا سىناق قىلىنىدىغان ئەۋرىشكىنى سۇيۇلدۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
2) يادرو كىسلاتاسىنى ئېلىش جەريانى بىنورمال ، شۇڭا قايتا ئېلىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ
قايتا تەكشۈرۈش ئۈچۈن يادرو كىسلاتاسى.
3) بۇ ئەۋرىشكە ئەۋرىشكە ئالغاندا لاياقەتلىك ئەۋرىشكە ئەمەس
توشۇش ۋە ساقلاش جەريانىدا.
ئۇلار بىزنىڭ بۇ ئەھۋاللارنى بايقىيالايدىغان 2 خىل ئۇسۇلىمىز: NAAT ۋە ئانتىگېن.
(لوس ئانژېلېستىكى CDC دىن كەلگەن)
