پروڈکٹ کی تفصیل
ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن (ڈبلیو ایچ او) رہنمائی کرتا ہے کہ اینٹیجن کا پتہ لگانے والے تیز تشخیصی ٹیسٹ (Ag-RDRs) نیوکلک ایسڈ ایمپلیفیکیشن ٹیسٹ (NAATs) کے مقابلے میں فعال SARS-CoV-2 انفیکشن کی تشخیص کرنے کا تیز اور کم مہنگا طریقہ پیش کر سکتے ہیں، اور WHO بھی تجویز کرتا ہے۔ کہ Ag-RDTs کا استعمال کم سے کم کارکردگی کی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے بنیادی کیس کا پتہ لگانے، کانٹیکٹ ٹریسنگ، وبا کی تحقیقات کے دوران اور کمیونٹیز میں بیماری کے واقعات کے رجحانات کی نگرانی کے لیے کیا جا سکتا ہے۔
خصوصیات
● جامع:ایک ٹیسٹ میں تین ٹارگٹ جین کا پتہ لگاتا ہے۔
● ہم آہنگ:CY5، FAM، VIC/HEX چینلز کے ساتھ عام آلات کے لیے موافق۔
● بہترین کارکردگی:اعلی حساسیت اور خاصیت، LOD = 200 کاپیاں/ml۔
تکنیکی پیرامیٹر
| پیکنگ کی تفصیلات | 50 ٹیسٹ/کِٹ، 100 ٹیسٹ/کِٹ |
| ہدف کا علاقہ | ORF1ab, N, E |
| قابل اطلاق نمونہ | تھوک، Oropharyngeal Swab |
| کھوج کی حد | 200 کاپیاں / ملی لیٹر |
| کل اتفاق کی شرح | 99.55% |
| Ct قدر (CV,%) | ≤5.0% |
| مثبت اتفاق کی شرح | 99.12% |
| منفی اتفاق کی شرح | 100% |
| اسٹوریج کی شرائط اور میعاد ختم ہونے کی تاریخ | -20±5℃ پر ذخیرہ کیا گیا، اور 12 ماہ کے لیے عارضی طور پر درست ہے۔ |
| اندرونی کنٹرول | جی ہاں |
| کیٹلاگ نمبر | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| تصدیق | CE |
| نمونے | Nasopharyngeal swab، Oropharyngeal swab، Alveolar lavage سیال، تھوک اور تھوک |
| قابل اطلاق آلہ | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم |
ٹیسٹ کا طریقہ کار
1. نیوکلک ایسڈ نکالنا
آپریشن ایکسٹرکشن کٹ کے مینوئل کے مطابق کیا جانا چاہئے۔
2. سسٹم کی تیاری:
1) ری ایجنٹ کو باہر نکالیں اور ری ایجنٹ کو مکمل طور پر پگھلا دیں۔فوری طور پر مرکب اور سینٹری فیوج کو الٹ دیں۔N ٹیسٹ کے رد عمل (N = ٹیسٹ کیے جانے والے نمونوں کی تعداد + مثبت کنٹرول + منفی کنٹرول + 1) رد عمل کے نظام کے لیے بالترتیب، مندرجہ ذیل کے طور پر تیار کیے جاتے ہیں۔
| وومپونینٹس | 1 رد عمل کے نظام کے لیے حجم | N رد عمل کے نظام کے لیے حجم |
| نیوکلک ایسڈ ایمپلیفیکیشن ری ایکشن سلوشن مکس (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| انزائم مرکب | 2 µL | 2 µL * N |
| مکمل حجم | 20 µL | 20 µL * N |
2) رد عمل کی تقسیم: رد عمل کے حل کو ملایا گیا اور سینٹرفیوج کیا گیا، اور ہر ٹیوب کو 20μL کی مقدار میں پی سی آر ٹیوب میں تقسیم کیا گیا جو فلوروسینس پی سی آر اپریٹس کے لیے موزوں ہے۔
3. لوڈ ہو رہا ہے۔
نکالے گئے نمونے کا 5μL نیوکلک ایسڈ، مثبت کنٹرول نیوکلک ایسڈ اور منفی کنٹرول نیوکلک ایسڈ کو ری ایکشن سسٹم میں شامل کیا جاتا ہے، اور کل رد عمل کا حجم 25μL ہے۔ٹیوب کور کو باندھیں اور سینٹرفیوگریشن کے چند سیکنڈ کے بعد ایمپلیفیکیشن ٹیسٹ ایریا میں منتقل کریں۔
4. پی سی آر ایمپلیفیکیشن پرکھ
1) پی سی آر ری ایکشن ٹیوب کو ایمپلیفیکیشن کا پتہ لگانے کے لیے فلوروسینٹ پی سی آر ایمپلیفیکیشن انسٹرومنٹ میں ڈالیں۔
2) سائیکل پیرامیٹر کی ترتیب:
| پروگرام | سائیکلوں کی تعداد | درجہ حرارت | ردعمل کا وقت | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 منٹ | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 سیکنڈ | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 سیکنڈ | |
| 60℃ | 30 سیکنڈ | فلوروسینس مجموعہ | ||
3) پتہ لگانے کی ترتیبات:
پتہ لگانے کے چینلز بالترتیب ORF1ab، N جین، اور E Gene، RNase P اندرونی کنٹرول کے مطابق FAM، VIC، ROX اور CY5 پر سیٹ کیے گئے ہیں۔ABI 7500 آلے کے لیے "Quencher Dye" اور "Passive Reference" کو "None" پر سیٹ کیا گیا ہے۔مثبت کنٹرول، منفی کنٹرول، اور نمونہ (نامعلوم) کو ترتیب دیں جس میں نمونے مطابقت رکھتے ہیں، اور نمونے کا نام "نمونہ نام" کالم میں سیٹ کریں۔
X-POCH16 کے لیے، آپریشن اور پروگرام درج ذیل ہیں:
1) سیلف ٹیسٹ مکمل ہونے کے بعد، ڑککن کھولیں اور PCR ری ایکشن ٹیوبوں کو آلے میں مخصوص جگہوں پر رکھیں۔
2) "ماہر" کو منتخب کرکے شروع کریں۔اختیار"تمام" اختیار کو منتخب کریں یا اسکرین کے بائیں جانب ردعمل کے علاقے کو دستی طور پر منتخب کریں۔
3) "لوڈ" اختیار منتخب کریں؛ٹیسٹ پروگرام منتخب کریں؛"ہو گیا" اور "چلائیں" پر کلک کریں۔پروگرام کو مکمل ہونے میں 30 منٹ 42 سیکنڈ لگتے ہیں۔
ڈیفالٹ پروگرام کے پتہ لگانے والے چینلز بالترتیب ORF1ab، N جین، اور E Gene، RNase P اندرونی کنٹرول کے مطابق FAM، VIC، ROX اور CY5 پر سیٹ کیے گئے ہیں۔
پہلے سے طے شدہ پروگرام کے سائیکل پیرامیٹر مندرجہ ذیل ہیں:
| پروگرام | کی تعداد | درجہ حرارت | ردعمل کا وقت |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 منٹ |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 سیکنڈ |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 سیکنڈ |
| 60℃ | 13 سیکنڈ | فلوروسینس |
5. حد کی ترتیب
تجزیہ شدہ تصویر کے مطابق، ابتدائی قدر، بیس لائن اور تھریشولڈ ویلیو کی اختتامی قدر کو ایڈجسٹ کریں (اسٹارٹ ویلیو اور اینڈ ویلیو کو بالترتیب 3 اور 15 پر سیٹ کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، اور منفی کنٹرول کے ایمپلیفیکیشن وکر کو فلیٹ یا فلیٹ ہونے کے لیے ایڈجسٹ کیا جاتا ہے۔ تھریشولڈ لائن سے کم)، تجزیہ کو خود بخود نمونہ Ct قدر حاصل کرنے کے لیے تجزیہ پر کلک کریں۔رپورٹ انٹرفیس میں نتائج دیکھیں۔
6. کوالٹی کنٹرول سٹینڈرڈ
کٹ کے ہر کنٹرول کو 'S' وکر کے ساتھ درج ذیل تقاضوں کو پورا کرنا چاہیے، ورنہ تجربہ غلط ہے۔
| پتہ لگانے والے چینلز | منفی کنٹرول | مثبت کنٹرول |
| FAM(ORF1ab) | نہیں Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | نہیں Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | نہیں Ct | Ct≤38 |
| CY5 (RP) | نہیں Ct | Ct≤38 |
【کٹ آف ویلیو】
100 oropharyngeal swab کے نمونوں اور 100 sputum کے نمونوں کے نتائج کے مطابق، اور ROC منحنی طریقہ کے ساتھ، OFR1ab کی کٹ آف ویلیو، اس کٹ کے N جین E Gene Ct = 38 ہیں۔
عمومی سوالات
اس کٹ میں، ریئل ٹائم فلوروسینٹ پی سی آر ٹیکنالوجی کے پرائمر اور پروبس کو بالترتیب 2019-nCoV کے ORF1ab، N اور E جین کے محفوظ اور مخصوص علاقوں کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے دوران، پروب ٹیمپلیٹ سے جڑ جاتی ہے، اور تحقیقات کے 5'-اینڈ رپورٹر گروپ کو Taq انزائم (5'→3' exonuclease ایکٹیویٹی) کے ذریعے کلیو کیا جاتا ہے، اس طرح فلوروسینٹ سگنل پیدا کرنے کے لیے بجھانے والے گروپ سے ہٹ جاتا ہے۔ .ریئل ٹائم ایمپلیفیکیشن وکر کا پتہ لگائے گئے فلوروسینس سگنل کی بنیاد پر خود بخود پلاٹ کیا جاتا ہے، اور نمونہ Ct قدر کا حساب لگایا جاتا ہے۔FAM، VIC اور ROX fluorophores کو ORF1ab جین، N جین اور E جین پروبس پر لیبل لگایا گیا ہے۔ایک ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے، 2019-nCoV کے مندرجہ بالا تین جینوں کی کوالٹیٹیو ڈیٹیکشن بیک وقت کی جا سکتی ہے۔
کٹ میں داخلی کنٹرول فراہم کیا گیا ہے جس میں RNase P جین کو نشانہ بنایا گیا ہے تاکہ طبی نمونے جمع کرنے، ہینڈلنگ، نکالنے اور RT-PCR کے عمل کی نگرانی کی جا سکے تاکہ غلط-منفی نتائج سے بچا جا سکے۔اندرونی کنٹرول پر CY5 فلوروسینٹ گروپ کا لیبل لگا ہوا ہے۔
1. ٹیسٹ کے نتائج کا تجزیہ اور تشریح کریں جب آلہ نارمل ہو، اور مثبت کنٹرول، منفی کنٹرول اور اندرونی کنٹرول ٹیسٹ کا نتیجہ کوالٹی کنٹرول کے معیار پر پورا اترتا ہے۔
2. اندرونی کنٹرول (CY5) کا ایمپلیفیکیشن وکر ایک عام S وکر اور Ct ≤ 38 دکھاتا ہے، ہدف جین کے نتائج کی تشریح درج ذیل شرائط سے مشروط ہے۔
| پتہ لگانے والے چینلز | ٹارگٹ جینز کے نتائج کی تشریح | ||
| ایف ایم اے | VIC (این جین) | ROX (ای جین) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | ایک عام S ایمپلیفیکیشن وکر کے ساتھ، Ct قدر≤38 ہے، متعلقہ ہدف جین مثبت ہے۔ |
| 38 ~ Ct ~ 40 | 38 ~ Ct ~ 40 | 38 ~ Ct ~ 40 | ایک عام S ایمپلیفیکیشن وکر کے ساتھ، نمونے کے متعلقہ ٹارگٹ جین کو دوبارہ ٹیسٹ کریں۔ اگر ایک عام S ایمپلیفیکیشن وکر کے ساتھ Ct قدر＜ 40 ہے، تو متعلقہ ہدف جین مثبت ہے۔اگر Ct قدر≥40 ہے، تو متعلقہ ہدف جین منفی ہے۔ |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | متعلقہ ہدف جین منفی ہے۔ |
2019-nCoV کے نتائج کی تشریح:
ORF1ab، N جین اور E جین کے نتائج کے مطابق، مندرجہ ذیل تشریح:
1) اگر دریافت شدہ جینوں میں سے دو یا تین جین مثبت ہیں، 2019-nCoV مثبت ہے؛
2) اگر پائے جانے والے جینوں میں سے صرف ایک یا کوئی بھی مثبت نہیں ہے تو 2019-nCoV منفی ہے۔
نوٹ: مثبت نمونے کا ایمپلیفیکیشن وکر ایک عام S وکر کے ساتھ ہونا چاہیے۔تاہم، اگر ہدف کا ارتکاز بہت زیادہ ہے تو، اندرونی معیاری کنٹرول کو بڑھایا نہیں جا سکتا اور نمونے کو براہ راست مثبت سمجھا جا سکتا ہے۔اگر ٹارگٹ جینز میں سے کوئی دو Ct≤38 حاصل کرتا ہے تو 2019-nCoV مثبت ہے۔اگر ٹارگٹ جینز میں سے کوئی دو Ct≥40 حاصل کرتا ہے تو 2019-nCoV منفی ہے۔اگر Ct≥40، یا کوئی قدر نہیں دکھاتا ہے، تو ٹارگٹ جین کے نتائج کی تشریح منفی ہے۔
3. اگر FAM، VIC، ROX اور Cy5 چینلز کی تمام Ct قدریں 38 سے زیادہ ہیں یا کوئی واضح S amplification curve نہیں ہے:
1) نمونے میں ایسا مادہ موجود ہے جو PCR کے رد عمل کو روکتا ہے۔دوبارہ ٹیسٹ کرنے کے لیے نمونے کو پتلا کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔
2) نیوکلک ایسڈ نکالنے کا عمل غیر معمولی ہے، اس لیے اسے دوبارہ نکالنے کا مشورہ دیا جاتا ہے۔
نیوکلک ایسڈ دوبارہ ٹیسٹ کے لیے۔
3) یہ نمونہ نمونے لینے کے وقت ایک قابل نمونہ نہیں تھا، یا انحطاط پذیر تھا۔
نقل و حمل اور اسٹوریج کے دوران۔
وہ 2 طریقے ہیں جن سے ہم ان حالات کا پتہ لگا سکتے ہیں: NAAT اور Antigen۔
(لاس اینجلس کے سی ڈی سی سے آتا ہے)
