Mahsulot detali
Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti (JSST) antigenni aniqlaydigan tezkor diagnostika testlari (Ag-RDRs) faol SARS-CoV-2 infektsiyasini diagnostika qilishning nuklein kislotani kuchaytirish testlariga (NAATs) qaraganda tezroq va arzonroq usulini taklif qilishi mumkinligini ko'rsatmoqda va JSST ham tavsiya qiladi Minimal ishlash talablariga javob beradigan Ag-RDTlar kasallikni birlamchi aniqlash, kontaktlarni qidirish, epidemiyani tekshirish vaqtida va jamoalarda kasallik bilan kasallanish tendentsiyalarini kuzatish uchun ishlatilishi mumkin.
Xususiyatlari
● Keng qamrovli:Bitta testda uchta maqsadli gen aniqlanadi
● mos:CY5, FAM, VIC/HEX kanallari bilan umumiy jihozlarga moslashtirilgan.
● Ajoyib ishlash:Yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslik, LOD = 200 nusxa / ml.
Texnik parametr
| Qadoqlash spetsifikatsiyasi | 50 ta test / to'plam, 100 ta test / to'plam |
| Maqsadli hudud | ORF1ab, N, E |
| Amaldagi namuna | Balg'am, orofaringeal tampon |
| Aniqlanish chegarasi | 200 nusxa/ml |
| Umumiy tasodif darajasi | 99,55% |
| Ct qiymati (CV,%) | ≤5,0% |
| Ijobiy tasodif darajasi | 99,12% |
| Salbiy tasodif darajasi | 100% |
| Saqlash shartlari va yaroqlilik muddati | -20±5℃ haroratda saqlanadi va 12 oy davomida vaqtincha amal qiladi. |
| Ichki nazorat | Ha |
| Katalog raqami | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Sertifikatlash | CE |
| Namunalar | Nazofarengeal tampon, orofaringeal tampon, alveolyar yuvish suyuqligi, tupurik va balg'am |
| Amaldagi asbob | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P real vaqtda PCR tizimi |
Sinov tartibi
1. Nuklein kislotaning ekstraktsiyasi
Ishlash ekstraksiya to'plamining qo'llanmasiga muvofiq amalga oshirilishi kerak.
2. Tizimni tayyorlash:
1) Reagentni chiqarib oling va reaktivni to'liq eritib oling.Aralashmani aylantiring va darhol sentrifuga qiling.Reaksiya tizimlari uchun mos ravishda N sinov reaksiyalari (N = tekshiriladigan namunalar soni + musbat nazorat + manfiy nazorat + 1) quyidagicha tayyorlanadi.
| Vomponentss | 1 ta reaksiya tizimi uchun hajm | N reaksiya tizimi uchun hajm |
| Nuklein kislotani kuchaytirish reaktsiyasi eritmasi aralashmasi (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Ferment aralashmasi | 2 mkl | 2 µL * N |
| Umumiy hajm | 20 µL | 20 µL * N |
2) Reaktsiya taqsimoti: Reaksiya eritmasi aralashtirildi va santrifüj qilindi va har bir kolba floresan PCR apparati uchun mos keladigan PCR trubkasida 20 mkl miqdorida tarqatildi.
3. Yuklash
Reaksiya tizimlariga 5 mkl ekstraksiya qilingan nuklein kislotasi, musbat nazorat nuklein kislotasi va salbiy nazorat nuklein kislotasi qo'shiladi va umumiy reaksiya hajmi 25 mkL ni tashkil qiladi.Naycha qopqog'ini mahkamlang va santrifüjdan bir necha soniya o'tgach, uni kuchaytirish sinov maydoniga o'tkazing.
4. PCR kuchaytirish tahlili
1) Kuchaytirishni aniqlash uchun PCR reaksiya trubkasini floresan PCR kuchaytiruvchi asbobga soling.
2) Tsikl parametrlarini sozlash:
| Dastur | Tsikllar soni | Harorat | Reaktsiya vaqti | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 sek | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 sek | |
| 60℃ | 30 sek | Floresan to'plami | ||
3) Aniqlash sozlamalari:
Aniqlash kanallari mos ravishda ORF1ab, N geni va E Gene, RNase P ichki nazoratiga mos keladigan FAM, VIC, ROX va CY5 ga o'rnatiladi."Quencher Dye" va "Passiv Reference" ABI 7500 asbobi uchun "Yo'q" ga o'rnatiladi.Ijobiy nazorat, salbiy nazorat va namunani (noma'lum) namunalar mos keladigan tartibda o'rnating va "Namuna nomi" ustuniga namuna nomini o'rnating.
X-POCH16 uchun operatsiya va dastur quyidagicha:
1) O'z-o'zini sinovdan o'tkazgandan so'ng, qopqoqni oching va PCR reaktsiyasi naychalarini asbobning belgilangan joylariga qo'ying.
2) "Mutaxassis" ni tanlash bilan boshlang.variant."Hammasi" variantini tanlang yoki ekranning chap tomonidagi reaktsiya maydonini qo'lda tanlang.
3) “YUKLASH” variantini tanlang;test dasturini tanlang;"DONE" va "RUN" tugmasini bosing.Dasturni bajarish uchun 30 daqiqa 42 soniya kerak bo'ladi.
Standart dasturning aniqlash kanallari mos ravishda ORF1ab, N geni va E Gene, RNase P ichki nazoratiga mos keladigan FAM, VIC, ROX va CY5 ga o'rnatiladi.
Standart dasturning sikl parametri quyidagicha:
| Dastur | soni | Harorat | Reaktsiya vaqti |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 soniya |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 soniya |
| 60℃ | 13 soniya | Floresans |
5. Eshik chegarasini sozlash
Tahlil qilingan tasvirga ko'ra, Boshlash qiymatini, Asosiy chiziqning yakuniy qiymatini va Eshik qiymatini sozlang (Boshlash qiymati va yakuniy qiymat mos ravishda 3 va 15 ga o'rnatilishi tavsiya etiladi va salbiy boshqaruvning kuchaytirish egri chizig'i tekis yoki chegara chizig'idan past bo'lsa), tahlilning Ct qiymatini avtomatik ravishda olish uchun "Tahlil" tugmasini bosing.Hisobot interfeysida natijalarni ko'ring.
6. Sifat nazorati standarti
To'plamning har bir nazorati "S" egri chizig'i bilan quyidagi talablarga javob berishi kerak, aks holda tajriba haqiqiy emas.
| Aniqlash kanallari | Salbiy nazorat | Ijobiy nazorat |
| FAM(ORF1ab) | Yo'q Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Yo'q Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Yo'q Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Yo'q Ct | Ct≤38 |
【Chiqish qiymati】
100 ta orofaringeal tampon namunasi va 100 ta balg'am namunasi natijalariga ko'ra va ROC egri usuli bilan ushbu to'plamning OFR1ab, N gen E genining kesish qiymati Ct = 38 ga teng.
TSS
Ushbu to'plamda real vaqt rejimidagi lyuminestsent PCR texnologiyasining primerlari va zondlari mos ravishda 2019-nCoV ning ORF1ab, N va E genining saqlanib qolgan va o'ziga xos hududlariga mo'ljallangan.PCR kuchaytirilishi paytida zond shablonga bog'lanadi va zondning 5'-uchli reportyor guruhi Taq fermenti (5'→3' ekzonukleaza faolligi) tomonidan parchalanadi va shu bilan flüoresan signal hosil qilish uchun söndürme guruhidan uzoqlashadi. .Haqiqiy vaqtda kuchaytirish egri chizig'i aniqlangan floresan signali asosida avtomatik ravishda chiziladi va namuna Ct qiymati hisoblanadi.FAM, VIC va ROX floroforlari ORF1ab geni, N geni va E gen zondlari bilan belgilanadi.Bitta testdan foydalangan holda, 2019-nCoV ning yuqoridagi uchta genini sifatli aniqlash bir vaqtning o'zida amalga oshirilishi mumkin.
To'plam noto'g'ri-salbiy natijalarga yo'l qo'ymaslik uchun klinik namunalarni yig'ish, ishlov berish, ekstraksiya qilish va RT-PCR jarayonini kuzatish uchun RNase P geniga qaratilgan ichki nazorat bilan ta'minlangan.Ichki nazorat CY5 lyuminestsent guruhi bilan belgilangan.
1. Asbob normal bo'lsa va musbat nazorat, salbiy nazorat va ichki nazorat sinovi natijasi sifat nazorati standartiga javob bersa, sinov natijalarini tahlil qiling va sharhlang.
2. Ichki nazoratni kuchaytirish egri chizig'i (CY5) tipik S egri chizig'ini va Ct ≤ 38 ni ko'rsatadi, maqsadli genlarning natijalarini sharhlash quyidagi shartlarga bog'liq.
| Aniqlash kanallari | Maqsadli genlarning natijalarini talqin qilish | ||
| FMA | VIC (N gen) | ROX (E geni) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Oddiy S kuchaytirish egri chizig'i bilan Ct qiymati ≤38, mos keladigan maqsadli gen musbat. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Oddiy S kuchaytirish egri chizig'i bilan, namunaning mos keladigan maqsadli genini qayta sinovdan o'tkazing. Agar Ct qiymati＜ 40 tipik S kuchaytiruvchi egri chizig'iga ega bo'lsa, mos keladigan maqsadli gen ijobiy bo'ladi;agar Ct qiymati≥40 bo'lsa, mos keladigan maqsadli gen salbiy |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Tegishli maqsadli gen salbiy |
2019-nCoV natijalarini talqin qilish:
ORF1ab, N geni va E geni natijalariga ko'ra, quyidagicha talqin qilinadi:
1) Agar aniqlangan genlarning IKKI yoki UCH geni ijobiy bo'lsa, 2019-nCoV ijobiy;
2) Agar aniqlangan genlardan FAQAT BITTA yoki HECH BIRTASI musbat bo‘lsa, 2019-nCoV salbiy hisoblanadi.
Eslatma: Ijobiy namunaning kuchaytirish egri chizig'i odatdagi S egri chizig'i bilan bo'lishi kerak.Biroq, agar maqsadli konsentratsiya juda yuqori bo'lsa, ichki standart nazorat kuchaytirilmasligi mumkin va namunani to'g'ridan-to'g'ri ijobiy deb baholash mumkin.Agar maqsadli genlardan ikkitasi Ct≤38 ga ega bo'lsa, 2019-nCoV ijobiy hisoblanadi.Agar ikkita maqsadli gen Ct≥40 olsa, 2019-nCoV manfiy hisoblanadi.Agar Ct≥40 bo'lsa yoki hech qanday qiymat ko'rsatmasa, maqsadli gen natijalarini talqin qilish manfiydir.
3. Agar FAM, VIC, ROX va Cy5 kanallarining barcha Ct qiymatlari 38 dan ortiq bo'lsa yoki aniq tipik S kuchaytirish egri chizig'i bo'lmasa:
1) Namunada PCR reaktsiyasini inhibe qiluvchi moddalar (lar) mavjud.Qayta tekshirish uchun namunani suyultirish tavsiya etiladi.
2) Nuklein kislotani olish jarayoni g'ayritabiiydir, shuning uchun uni qayta ekstraksiya qilish taklif etiladi
qayta tekshirish uchun nuklein kislotasi.
3) Ushbu namuna namuna olish vaqtida malakali namuna bo'lmagan yoki yomonlashgan
tashish va saqlash vaqtida.
Ular bu holatlarni aniqlashning ikkita usuli: NAAT va Antigen.
(Los-Anjelesdagi CDCdan olingan)
