Chi tiết sản phẩm
Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) hướng dẫn rằng các xét nghiệm chẩn đoán nhanh phát hiện kháng nguyên (Ag-RDRs) có thể cung cấp một cách nhanh hơn và ít tốn kém hơn để chẩn đoán nhiễm SARS-CoV-2 đang hoạt động so với các xét nghiệm khuếch đại axit nucleic (NAAT) và WHO cũng khuyến nghị rằng Ag-RDT đáp ứng các yêu cầu về hiệu suất tối thiểu có thể được sử dụng để phát hiện ca bệnh ban đầu, truy tìm người tiếp xúc, trong quá trình điều tra ổ dịch và theo dõi xu hướng mắc bệnh trong cộng đồng.
Đặc trưng
● Toàn diện:Ba gen mục tiêu phát hiện trong một thử nghiệm
● tương thích:Thích ứng với các thiết bị phổ biến với các kênh CY5, FAM, VIC/HEX.
● Hiệu quả xuất sắc:Độ nhạy và độ đặc hiệu cao, LOD = 200 bản sao/ml.
Thông số kỹ thuật
| Thông số kỹ thuật đóng gói | 50 test/kit, 100 test/kit |
| Vùng mục tiêu | ORF1ab, N, E |
| Mẫu áp dụng | Tăm bông tiêu đờm, hầu họng |
| Giới hạn phát hiện | 200 bản sao/ml |
| Tổng tỷ lệ trùng khớp | 99,55% |
| Giá trị CT (CV,%) | ≤5,0% |
| Tỷ lệ trùng khớp dương | 99,12% |
| Tỷ lệ trùng hợp âm | 100% |
| Điều kiện bảo quản và ngày hết hạn | Được lưu trữ ở -20 ± 5 ℃ và có giá trị tạm thời trong 12 tháng. |
| Kiểm soát nội bộ | Đúng |
| Số mục lục | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| chứng nhận | CE |
| mẫu vật | Tăm bông mũi họng, tăm bông hầu họng, dịch rửa phế nang, nước bọt và đờm |
| Công cụ áp dụng | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ , Roche Cobas z 480, Hệ thống PCR thời gian thực SLAN-96P |
Thủ tục kiểm tra
1. Chiết xuất axit nucleic
Hoạt động nên được thực hiện theo hướng dẫn sử dụng của bộ khai thác.
2. Chuẩn bị hệ thống:
1) Lấy thuốc thử ra và rã đông hoàn toàn.Đảo ngược hỗn hợp và ly tâm ngay lập tức.N phản ứng thử nghiệm (N = số lượng mẫu được thử nghiệm + đối chứng dương tính + đối chứng âm tính + 1) được chuẩn bị tương ứng cho các hệ thống phản ứng như sau.
| Vomponents | Thể tích cho 1 hệ phản ứng | Khối lượng cho hệ phản ứng N |
| Hỗn hợp dung dịch phản ứng khuếch đại axit nucleic (A7793YF) | 18µL | 18 µL * N |
| hỗn hợp enzym | 2µL | 2µL * N |
| Tổng khối lượng | 20µL | 20µL * N |
2) Phân phối phản ứng: Dung dịch phản ứng được trộn và ly tâm, và mỗi ống được phân phối với một lượng 20μL trong ống PCR phù hợp với thiết bị PCR huỳnh quang.
3. Đang tải
5μL axit nucleic mẫu đã chiết xuất, axit nucleic đối chứng dương tính và axit nucleic đối chứng âm tính được thêm vào hệ thống phản ứng và tổng thể tích phản ứng là 25μL.Vặn chặt nắp ống và di chuyển nó đến khu vực thử nghiệm khuếch đại sau vài giây ly tâm.
4. Xét nghiệm khuếch đại PCR
1) Đặt ống phản ứng PCR vào dụng cụ khuếch đại PCR huỳnh quang để phát hiện khuếch đại.
2) Cài đặt thông số chu kỳ:
| Chương trình | Số chu kỳ | Nhiệt độ | Thời gian phản ứng | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 phút | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 giây | |
| 3 | 45 | 95℃ | 5 giây | |
| 60℃ | 30 giây | Bộ sưu tập huỳnh quang | ||
3) Cài đặt phát hiện:
Các kênh phát hiện được đặt thành FAM, VIC , ROX và CY5, tương ứng với ORF1ab, gen N và E Gene, kiểm soát nội bộ RNase P, tương ứng."Quencher Dye" và "Passive Reference" được đặt thành “None” cho thiết bị ABI 7500.Đặt Đối chứng Dương tính, Đối chứng Âm tính và Mẫu (Không xác định) theo thứ tự các mẫu tương ứng và đặt tên mẫu trong cột “Tên Mẫu”.
Đối với X-POCH16, hoạt động và chương trình như sau:
1) Sau khi hoàn tất quá trình tự kiểm tra, mở nắp và đặt các ống phản ứng PCR vào các vị trí được chỉ định trong thiết bị.
2) Bắt đầu bằng cách chọn "Exper."lựa chọn.Chọn tùy chọn "Tất cả" hoặc chọn thủ công khu vực phản ứng ở bên trái màn hình.
3) Chọn tùy chọn "TẢI";chọn chương trình thử nghiệm;nhấp vào “XONG” và “CHẠY”.Chương trình mất 30 phút 42 giây để hoàn thành.
Các kênh phát hiện của chương trình Mặc định được đặt thành FAM, VIC, ROX và CY5, tương ứng với ORF1ab, gen N và kiểm soát nội bộ E Gene, RNase P, tương ứng.
Tham số chu kỳ của chương trình Mặc định như sau:
| Chương trình | Số lượng | Nhiệt độ | Thời gian phản ứng |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 phút |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 giây |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 giây |
| 60℃ | 13 giây | huỳnh quang |
5. Cài đặt ngưỡng
Theo hình ảnh được phân tích, điều chỉnh Giá trị bắt đầu, Giá trị kết thúc của Giá trị cơ sở và Giá trị ngưỡng (Giá trị bắt đầu và giá trị kết thúc được khuyến nghị đặt lần lượt là 3 và 15 và đường cong khuếch đại của điều khiển âm được điều chỉnh thành phẳng hoặc thấp hơn Đường ngưỡng), nhấp vào Phân tích để tự động lấy giá trị Ct mẫu phân tích.Xem kết quả trong giao diện Báo cáo.
6. Tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng
Mỗi điều khiển của bộ công cụ phải đáp ứng các yêu cầu sau với đường cong 'S', nếu không thì thử nghiệm không hợp lệ.
| kênh phát hiện | Kiểm soát tiêu cực | Kiểm soát tích cực |
| FAM(ORF1ab) | Không Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Không Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Không Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Không Ct | Ct≤38 |
【Giá trị giới hạn】
Theo kết quả của 100 mẫu bệnh phẩm hầu họng và 100 mẫu đờm và với phương pháp đường cong ROC, giá trị ngưỡng của OFR1ab, N gen E Gene của bộ kit này là Ct = 38
Câu hỏi thường gặp
Trong bộ công cụ này, mồi và mẫu dò của công nghệ PCR huỳnh quang thời gian thực được thiết kế cho các vùng được bảo tồn và vùng cụ thể của gen ORF1ab, N và E của 2019-nCoV tương ứng.Trong quá trình khuếch đại PCR, đầu dò liên kết với mẫu và nhóm phóng viên đầu 5' của đầu dò bị cắt bởi enzyme Taq (hoạt động exonuclease 5'→3'), do đó di chuyển ra khỏi nhóm dập tắt để tạo ra tín hiệu huỳnh quang .Đường cong khuếch đại thời gian thực được vẽ tự động dựa trên tín hiệu huỳnh quang được phát hiện và giá trị Ct của mẫu được tính toán.FAM, VIC và ROX fluorophores được dán nhãn cho gen ORF1ab, gen N và gen E.Bằng cách sử dụng một xét nghiệm, việc phát hiện định tính ba gen trên của 2019-nCoV có thể được thực hiện đồng thời.
Bộ này được cung cấp một biện pháp kiểm soát nội bộ nhắm vào gen RNase P để giám sát quá trình thu thập, xử lý, chiết xuất và RT-PCR mẫu lâm sàng để tránh kết quả âm tính giả.Kiểm soát nội bộ được dán nhãn bằng nhóm huỳnh quang CY5.
1. Phân tích và giải thích kết quả xét nghiệm khi thiết bị bình thường, đối chứng dương tính, đối chứng âm tính và kết quả xét nghiệm kiểm soát nội bộ đáp ứng tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng.
2. Đường cong khuếch đại của kiểm soát nội bộ (CY5) thể hiện đường cong S điển hình và Ct ≤ 38, việc giải thích kết quả của gen mục tiêu tuân theo các điều kiện sau.
| kênh phát hiện | Giải thích kết quả của gen mục tiêu | ||
| FMA | VIC (N gen) | ROX (gen E) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Với đường cong khuếch đại S điển hình, giá trị Ct là ≤38, gen mục tiêu tương ứng là dương tính. |
| 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | 38 ＜ Ct ＜ 40 | Với đường cong khuếch đại S điển hình, kiểm tra lại gen mục tiêu tương ứng của mẫu một lần nữa. Nếu giá trị Ct＜ 40 với đường cong khuếch đại S điển hình, thì gen mục tiêu tương ứng là dương tính;nếu giá trị Ct≥40, gen mục tiêu tương ứng là âm tính |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Gen mục tiêu tương ứng là âm tính |
Giải thích kết quả cho 2019-nCoV:
Theo kết quả của ORF1ab, gen N và gen E, giải thích như sau:
1) Nếu HAI hoặc BA gen trong số các gen được phát hiện dương tính, thì 2019-nCoV là dương tính;
2) Nếu CHỈ MỘT hoặc KHÔNG CÓ gen nào được phát hiện là dương tính, thì 2019-nCoV là âm tính.
Lưu ý: Đường cong khuếch đại của mẫu dương tính phải có đường cong S điển hình.Tuy nhiên, nếu nồng độ mục tiêu quá cao, chất đối chứng nội chuẩn có thể không được khuếch đại và mẫu có thể được đánh giá trực tiếp là dương tính.Nếu bất kỳ hai gen mục tiêu nào có Ct≤38, thì 2019-nCoV là dương tính.Nếu bất kỳ hai gen mục tiêu nào có Ct≥40, thì 2019-nCoV là âm tính.Nếu Ct≥40, hoặc không hiển thị giá trị, giải thích kết quả của gen mục tiêu là âm tính.
3. Nếu tất cả các giá trị Ct của các kênh FAM, VIC, ROX và Cy5 đều lớn hơn 38 hoặc không có đường cong khuếch đại S điển hình rõ ràng:
1) Trong mẫu có (các) chất ức chế phản ứng PCR.Nên pha loãng mẫu để kiểm tra lại.
2) Quá trình chiết xuất axit nucleic không bình thường, đề nghị chiết xuất lại
axit nucleic để kiểm tra lại.
3) Mẫu này KHÔNG phải là mẫu đủ tiêu chuẩn tại thời điểm lấy mẫu, hoặc đã xuống cấp
trong quá trình vận chuyển và bảo quản.
Có 2 cách để chúng ta có thể phát hiện ra tình huống này: NAAT và Antigen.
(Từ CDC của Los Angeles)
