Alaye ọja
Ajo Agbaye ti Ilera (WHO) ṣe itọsọna pe wiwa antigen-wiwa awọn idanwo iwadii iyara (Ag-RDRs) le funni ni iyara ati ọna ti ko gbowolori lati ṣe iwadii ikolu SARS-CoV-2 ti nṣiṣe lọwọ ju awọn idanwo imudara acid nucleic (NAATs), ati WHO tun ṣeduro pe Ag-RDTs pade awọn ibeere iṣẹ ṣiṣe ti o kere julọ le ṣee lo fun wiwa ọran akọkọ, wiwa kakiri, lakoko awọn iwadii ibesile ati lati ṣe atẹle awọn aṣa ti isẹlẹ arun ni awọn agbegbe.
Awọn ẹya ara ẹrọ
● OyeJiini ibi-afẹde mẹta ṣe awari ninu idanwo kan
● ibaramu:Ibadọgba si ohun elo ti o wọpọ pẹlu awọn ikanni CY5, FAM, VIC/HEX.
● Iṣẹ ṣiṣe to dara julọ:Ifamọ giga ati pato, LOD = 200 idaako / milimita.
Imọ paramita
| Iṣakojọpọ Specification | 50 igbeyewo / kit, 100 igbeyewo / kit |
| Àkọlé Ekun | ORF1ab, N, E |
| Apeere to wulo | Sputum, Oropharyngeal Swab |
| Ifilelẹ ti Wiwa | 200 idaako / milimita |
| Lapapọ Oṣuwọn Lasan | 99.55% |
| Iye Ct (CV,%) | ≤5.0% |
| Oṣuwọn Lasan ti o dara | 99.12% |
| Oṣuwọn Lairotẹlẹ odi | 100% |
| Awọn ipo ipamọ ati Ọjọ Ipari | Ti fipamọ ni -20± 5℃, ati pe o wulo ni ipese fun awọn oṣu 12. |
| Iṣakoso ti abẹnu | Bẹẹni |
| Nọmba katalogi | A7793YF-50T, A7793YF-100T |
| Ijẹrisi | CE |
| Awọn apẹẹrẹ | Nasopharyngeal swab, Oropharyngeal swab, Alveolar lavage ito, itọ ati sputum |
| Ohun elo to wulo | ABI 7500, Roche Light Cycler 480Ⅱ, Roche Cobas z 480, SLAN-96P Eto PCR gidi-akoko |
Ilana Igbeyewo
1. Nucleic Acid isediwon
Isẹ yẹ ki o ṣee ṣe ni ibamu si itọnisọna ohun elo isediwon.
2. Igbaradi eto:
1) Mu reagent jade ki o tu reagent naa patapata.Yipada adalu ati centrifuge lẹsẹkẹsẹ.Awọn aati idanwo N (N = nọmba awọn ayẹwo lati ṣe idanwo + iṣakoso rere + iṣakoso odi + 1) ti pese sile fun awọn ọna ṣiṣe, ni atele, bi atẹle.
| Voponents | Iwọn didun fun 1 lenu eto | Iwọn didun fun N lenu eto |
| Ojutu ifaseyin imudara Nucleic acid Mix (A7793YF) | 18 µL | 18 µL * N |
| Apapọ enzymu | 2µL | 2µL * N |
| Lapapọ iwọn didun | 20 µL | 20 µL * N |
2) Pinpin ifaseyin: Ojutu ifa ti dapọ ati centrifuged, ati pe tube kọọkan ti pin ni iye 20μL ninu tube PCR ti o dara fun ohun elo PCR fluorescence kan.
3. ikojọpọ
5μL ti ayẹwo nucleic acid ti a fa jade, acid nucleic iṣakoso rere ati acid nucleic iṣakoso odi ti wa ni afikun si awọn eto ifaseyin, ati iwọn didun ifaseyin lapapọ jẹ 25μL.Di ideri tube ki o gbe lọ si agbegbe idanwo imudara lẹhin iṣẹju diẹ ti centrifugation.
4. PCR Amplification Assay
1) Fi tube ifa PCR sinu ohun elo imudara PCR fluorescent fun wiwa imudara.
2) Eto paramita iyipo:
| Eto | Nọmba ti iyika | Iwọn otutu | Aago lenu | |
| 1 | 1 | 50℃ | 10 min | |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 iṣẹju-aaya | |
| 3 | 45 | 95℃ | iṣẹju-aaya 5 | |
| 60℃ | 30 iṣẹju-aaya | Gbigba Fuluorescence | ||
3) Awọn eto wiwa:
Awọn ikanni wiwa ti ṣeto si FAM, VIC, ROX ati CY5, ti o baamu si ORF1ab, Jiini N, ati E Gene, iṣakoso inu RNase P, lẹsẹsẹ."Quencher Dye" ati "Itọkasi Palolo" ti ṣeto si "Ko si" fun ohun elo ABI 7500.Ṣeto Iṣakoso Rere, Iṣakoso odi, ati Ayẹwo (Aimọ) ni ibere ninu eyiti awọn apẹẹrẹ ṣe deede, ki o ṣeto orukọ apẹẹrẹ ni iwe “Orukọ Ayẹwo”.
Fun X-POCH16, isẹ ati eto jẹ bi atẹle:
1) Lẹhin ti idanwo ti ara ẹni ti pari, ṣii ideri ki o fi awọn tubes ifura PCR sinu awọn ipo ti a yan ni ohun elo.
2) Bẹrẹ nipa yiyan "Amoye."aṣayan.Yan aṣayan "Gbogbo" tabi pẹlu ọwọ yan agbegbe ifaseyin ni apa osi ti iboju naa.
3) Yan aṣayan "LOAD";yan eto idanwo;tẹ "ṢE" ati "RUN".Eto naa gba to 30min42s lati pari.
Awọn ikanni wiwa ti eto Aiyipada ti ṣeto si FAM, VIC, ROX ati CY5, ti o baamu si ORF1ab, N gene, ati E Gene, iṣakoso inu RNase P, lẹsẹsẹ.
Paramita iyipo ti eto Aiyipada jẹ bi atẹle:
| Eto | Nọmba ti | Iwọn otutu | Aago lenu |
| 1 | 1 | 50℃ | 2 min |
| 2 | 1 | 95℃ | 30 iṣẹju-aaya |
| 3 | 41 | 95℃ | 2 iṣẹju-aaya |
| 60℃ | 13 iṣẹju-aaya | Fuluorisun |
5. Ipese Ibẹrẹ
Gẹgẹbi aworan ti a ṣe atupale, ṣatunṣe iye Ibẹrẹ, Iwọn Ipari ti Ipilẹ ati iye Ipilẹ (Iye Ibẹrẹ ati iye ipari ni a gbaniyanju lati ṣeto si 3 ati 15 ni atele, ati pe iwọn imudara ti iṣakoso odi jẹ atunṣe lati jẹ alapin tabi kekere ju Laini ala), tẹ Itupalẹ lati gba itupalẹ laifọwọyi ni iye Ct ayẹwo.Wo awọn abajade ni wiwo Iroyin.
6. Didara Iṣakoso Standard
Iṣakoso kọọkan ti kit gbọdọ pade awọn ibeere wọnyi pẹlu ọna 'S', bibẹẹkọ idanwo naa ko wulo.
| Awọn ikanni wiwa | Iṣakoso odi | Iṣakoso to dara |
| FAM(ORF1ab) | Ko si Ct | Ct≤38 |
| VIC(N) | Ko si Ct | Ct≤38 |
| ROX(E) | Ko si Ct | Ct≤38 |
| CY5(RP) | Ko si Ct | Ct≤38 |
【Iye gige kuro】
Gẹgẹbi awọn abajade ti 100 oropharyngeal swab awọn ayẹwo ati awọn ayẹwo sputum 100, ati pẹlu ọna ọna ROC, iye gige-pipa ti OFR1ab, N genes E Gene ti kit yii jẹ Ct = 38
FAQ
Ninu ohun elo yii, awọn alakoko ati awọn iwadii ti imọ-ẹrọ fluorescent PCR akoko gidi jẹ apẹrẹ si awọn agbegbe ti o tọju ati pato ti ORF1ab, N ati E pupọ ti 2019-nCoV lẹsẹsẹ.Lakoko imudara PCR, iwadii naa sopọ mọ awoṣe naa, ati pe ẹgbẹ onirohin 5'-opin ti iwadii naa ti pin nipasẹ enzymu Taq (5'→ 3' iṣẹ exonuclease), nitorinaa gbigbe kuro ni ẹgbẹ quenching lati ṣe ifihan ifihan fluorescent kan. .Ipilẹ imudara akoko gidi jẹ igbero laifọwọyi da lori ifihan agbara fluorescence ti a rii, ati pe iye Ct ayẹwo jẹ iṣiro.FAM , VIC ati ROX fluorophores ti wa ni aami si ORF1ab gene , N gene ati E jiini wadi.Nipa lilo idanwo kan, iṣawari didara ti awọn jiini mẹta ti o wa loke ti 2019-nCoV le ṣee ṣe ni nigbakannaa.
A pese ohun elo naa pẹlu iṣakoso inu ti o fojusi jiini RNase P lati ṣe atẹle ikojọpọ awọn ayẹwo ile-iwosan, mimu, isediwon ati ilana RT-PCR lati yago fun awọn abajade eke-odi.Iṣakoso inu jẹ aami pẹlu ẹgbẹ fluorescent CY5 kan.
1. Ṣe itupalẹ ati ṣe itumọ awọn abajade idanwo nigbati ohun elo jẹ deede, ati iṣakoso rere, iṣakoso odi ati abajade idanwo iṣakoso inu pade boṣewa iṣakoso didara.
2. Iwọn imudara ti iṣakoso inu (CY5) ṣe afihan aṣaju S ti tẹ ati Ct ≤ 38, itumọ awọn esi ti awọn jiini afojusun wa labẹ awọn ipo wọnyi.
| Awọn ikanni wiwa | Itumọ awọn abajade ti awọn Jiini afojusun | ||
| FMA | VIC (N jiini) | ROX (E jiini) | |
| Ct≤38 | Ct≤38 | Ct≤38 | Pẹlu ọna imudara S aṣoju, iye Ct jẹ≤38, jiini ibi-afẹde ti o baamu jẹ rere. |
| 38 Ct 40 | 38 Ct 40 | 38 Ct 40 | Pẹ̀lú ìṣàfilọ́lẹ̀ S ìṣàpẹẹrẹ, tún àbùdá ìfojúsùn tí ó bára mu ti àpèjúwe wò lẹ́ẹ̀kan síi. Ti o ba jẹ pe iye Ct＜ 40 pẹlu ọna kika imudara S aṣoju, jiini ibi-afẹde ti o baamu jẹ rere;ti iye Ct≥40, jiini ibi-afẹde ti o baamu jẹ odi |
| Ct≥40 | Ct≥40 | Ct≥40 | Jiini ibi-afẹde ti o baamu jẹ odi |
Itumọ awọn abajade fun 2019-nCoV:
Gẹgẹbi awọn abajade ti ORF1ab, N gene ati E gene, itumọ bi atẹle:
1) Ti awọn Jiini MEJI tabi mẹta ti awọn Jiini ti a rii jẹ rere, 2019-nCoV jẹ rere;
2) Ti ỌKAN tabi KOKAN ninu awọn Jiini ti a rii jẹ rere, 2019-nCoV jẹ odi.
Akiyesi: Iwọn imudara ti apẹẹrẹ rere yẹ ki o wa pẹlu ọna kika S aṣoju.Bibẹẹkọ, ti ifọkansi ibi-afẹde ba ga ju, iṣakoso boṣewa inu le ma pọ si ati pe ayẹwo le ṣe idajọ taara bi rere.Ti eyikeyi meji ninu awọn jiini ibi-afẹde gba Ct≤38, 2019-nCoV jẹ rere.Ti eyikeyi meji ninu awọn jiini ibi-afẹde gba Ct≥40, 2019-nCoV jẹ odi.Ti Ct≥40, tabi ko ṣe afihan iye, itumọ awọn abajade ti jiini ibi-afẹde jẹ odi.
3. Ti gbogbo awọn iye Ct ti FAM, VIC, ROX ati awọn ikanni Cy5 ba ju 38 lọ tabi ko si iṣipopada imudara S ti o han gbangba:
1) Awọn nkan (awọn) wa ninu apẹẹrẹ ti o ṣe idiwọ iṣesi PCR.O ti wa ni niyanju lati dilute awọn ayẹwo fun a tun-idanwo.
2) Ilana ti isediwon acid nucleic jẹ ohun ajeji, nitorinaa o daba lati tun jade.
nucleic acid fun tun-idanwo.
3) Apeere yii kii ṣe ayẹwo ti o pe ni akoko iṣapẹẹrẹ, tabi ibajẹ
nigba gbigbe ati ibi ipamọ.
Wọn jẹ awọn ọna meji ti a le rii awọn ipo yii: NAAT ati Antigen.
(Wa lati CDC ti Los Angeles)
